Chastnaya_mikrobiologia

Профилактика. Изоляция выявленных больных, соблюдение особых мер предосторожности при работе с кровью, слюной, мокротой, мочой больных. Разработаны рекомендации по предупреждению завоза инфекции с обезьянами и другими животными в неэндемичные регионы.

После изучения темы студент должен знать: характеристику онкогенных вирусов,

возбудителей арбовирусных, нейровирусных, медленных инфекций и СПИДа, а также принципы лабораторной диагностики, профилактики и лечения упомянутых инфекций.

Изучив тему, студент должен уметь: трактовать результаты лабораторных исследований при арбовирусных, нейровирусных, медленных инфекциях и СПИДе.

ТЕМА 17. ПАТОГЕННЫЕ ГРИБЫ. ВОЗБУДИТЕЛИ ГЛУБОКИХ И СУБКУТАННЫХ МИКОЗОВ, ДЕРМАТОМИКОЗОВ, ОППОРТУНИСТИЧЕСКИХ МИКОЗОВ

Цель занятия: разбор биологических свойств патогенных грибов, освоение методов лабораторной диагностики, профилактики и лечения микозов

Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1.Классификация грибов и вызываемых ими заболеваний (микозов).

2.Морфология грибов. Основные формы грибов (овоидная, мицелярная) и их структура. Особенности строения цитоплазматической мембраны и клеточной стенки. Понятие о диморфности грибов. Споры (вегетативные, эндоспоры, экзоспоры, половые) и спорообразование у грибов. Методы изучения морфологии грибов (микроскопия нативных и окрашенных препаратов).

3. Физиология грибов. Особенности питания, дыхания и размножения у грибов. Методы культивирования грибов и питательные среды, применяемые в микологии. Экология грибов. Грибы как продуценты биологически активных веществ.

4. Возбудители глубоких микозов: бластомикозов (северо- и южноамериканского), гистоплазмоза, криптококкоза, кокцидиоза. Экология. Особенности биологии. Роль в патологии человека. Препараты для лечения.

5. Дерматомицеты (дерматофиты) - возбудители дерматомикозов: эпидермофитии, трихофитии, микроспории. Экология. Роль в патологии человека. Лабораторная диагностика. Неспецифическая профилактика. Препараты для лечения.

6.Дрожжеподобные грибы рода Кандида. Экология. Роль в патологии человека. Факторы, способствующие возникновению кандидоза (дисбактериоз, иммунодефициты). Лабораторная диагностика. Препараты для лечения.

7.Возбудители плесневых микозов – аспергиллеза, пенициллеза, зигомикозов. Экология. Роль в патологии человека. Лабораторная диагностика. Препараты для лечения.

ЭЛЕМЕНТЫ ОБЩЕЙ МИКОЛОГИИ И ПРИНЦИПЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ МИКОЗОВ

Биологические свойства грибов

Царство грибов (Mycota или Fungi) входит в состав надцарства Eucaryotae и содержит многочисленные виды грибов, среди которых 150-500 видов относится к отделу настоящих грибов (Eumycotae), вызывая у человека, вызывая разнообразные по клиническим проявлениям заболевания (микозы) - от легких, имеющих косметическое значение, до тяжелых системных инфекций с поражением различных органов, тканей и систем. Большинство патогенных для человека грибов являются представителями преимущественно класса Deuteromycetes (Fungi imperfecti или несовершенные грибы, не способные размножаться половым путем), а также классов

Ascomycetes и Basidiomycetes. Выделяют 4 группы микозов (табл. 23).

Некоторые микозы встречаются спорадически, другие имеют эпидемическое распространение, третьи характеризуются природной очаговостью. Патогенные для человека грибы мо-

121

гут быть одноклеточными и многоклеточными, одна часть из которых способна расти на искусственных средах, а другая не способная развиваться вне организма больного человека.

Таблица 23. Классификация микозов.

Группы микозов	Заболевания		Возбудители
Глубокие (системные микозы)	Кокцидиоидный микоз		Coccidioides immitis
	Гистоплазмоз		Histoplasma capsulatum
	Криптококкоз		Criptococcus neoformans
	Бластомикоз		Blastomyces dermatitidis
Подкожные (субкутанные) ми-	Споротрихоз		Sportrichum schenckii
козы	Хромобластомикоз		Fonsecaca pedrosai
	(хромомикоз)
	Мицетома (мадуроми-		Грибы родов Acremonium,
	коз)		Aspergillus и т.д.
Эпидермомикозы	Эпидермофития		Epidermophyton floccosum
	Рубромикоз		Trichophyton rubrum
	Трихофития		Trichophyton violaceum,
			Trichophyton mentagrophytes,
	Микроспория		Microsporum canis,
			Microsporum ferrugineum
	Парша (фавус)		Achorion schoenleini
Кератомикозы (поверхностные	Разноцветный лишай		Malassezia furfur
микозы)	Черный микоз (кла-		Cladosporium werneskii
	доспоридиоз)
	Трихоспороз	(белая	Trichosporon beigelii
	пьедра)
	Черная пьедра		Piedraia hortae
Оппортунистические микозы	Кандидозы		Candida albicans,
			Candida tropicalis
			Candida pseudotropicalis и др.
	Мукороз		Mucor spp
	Аспергиллез		Aspergillus spp
	Пенициллиоз		Penicillium spp
	Пневмоцистоз		Pneumocystis carinii

Размеры клеток гриба варьируют от нескольких (дрожжи, дерматофиты) до десятков и сотен микрометров (мукоровые). Грибы относятся к примитивным эукариотам, их клетки содержат гомогенную или зернистую цитоплазму, одно или несколько шарообразных ядер нуклеолями, вакуоли, митохондрии, аппарат Гольджи и ряд включений. Постоянными включениями в клетке грибов являются липиды, волютин, гликоген, реже — кристаллы солей, органических кислот и пигменты.

Морфология грибов весьма разнообразна (рис. 32). Наиболее часто у молодых клеток грибов встречается яйцевидная форма или удлиненная в виде трубочки или нитей ветвящаяся структура - мицелий. Полиморфные, грушевидные, булавовидные, веретенообразные, амебовидные клетки встречаются в более зрелых культурах.

Мицелий представляет собой круглую ветвящуюся трубку диаметром от 1 до 10 мк, разделенную поперечными перегородками на клетки длиной 5 до 70 мкм. Ветви мицелия возникают в виде боковых выростов, которые могут располагаться у некоторых грибов через правильные промежутки с той или другой стороны. Переплетаясь и анастомозируя друг с другом, нити мицелия создают рыхлую или густую грибницу, плотно спаянную с питательным субстратом или же легко от него отделяющуюся. На конце нитей у ряда

122

грибов можно наблюдать своеобразные ветвления в виде рогов северного оленя, канделябров, гребешковых органов, завитков, тонких спиралей или же вздутий, напоминающих дубинку, посошок, булаву.

В культурах дрожжеподобных грибов рода Candida вместо истинного мицелия встречается псевдомицелий, состоящий из удлиненных клеток с боковыми ответвлениями, напоминающими нити истинного мицелия. В отличие от истинного мицелия, псевдомицелий представлен отдельными, не связанными друг с другом клетками, каждая из которых имеет собственную оболочку и вместо истинного ветвления в псевдомицелии имеется древовидное расположение клеток.

Важнейшим элементом грибов являются споры или конидии, с помощью которых грибы размножаются и распространяются во внешней среде. Обычно споры образуются в большом количестве и возникают либо внутри мицелия (эндоспоры - тканевые формы возбудителей кокцидиоидного микоза, риноспоридиоза, развивающиеся в крупных круглых образованиях — сферулах), или непосредственно на мицелии, на его ветвях, либо на своеобразных спороносных гифах (экзоспоры).

Выделяют следующие виды спор:

артроспоры прямоугольной и округлой формы, размером 2-4х4-8 мкм, образующиеся путем расчленения мицелия;

бластоспоры - круглые или яйцевидные споры, размером 1,5-8 мкм, образующиеся почкованием материнской клетки;

хламидоспоры - округлые, крупные споры, диаметром 15 -20 мк с выраженной шероховатой оболочкой, располагающиеся по ходу (интеркаларные, промежуточные) или на концах (терминальные, концевые)мицелия;

микроконидии (алейроспоры) округлой или грушевидной формы размером 2- 5х3-7 мкм, располагающиеся кучками или поодиночке;

123

Рис. 32. Морфология грибов. 1 - мицелий; 2 - разветвление мицелия в виде рогов северного оленя; 3 - гребешковые органы - окончания мицелия дерматофитов; 4 - канделябры - концевые ветвления мицелия; 5 - булавовидные окончания мицелия; 6 - окончания мицелия в виде дубинок; 7 - узловатые органы - сплетения мицелия дерматофитов; 8 - веретенообразные споры на концах мицелия; 9 - аскоспоры; 10-спорангиоспоры; 11 - артроспоры; 12 - бластоспоры; 13 - хламидоспоры концевые и интрекалярные; 14 - алейрии; 15 - макро- и микроконидии.

конидии (конидиоспоры) круглой или яйцевидной формы с гладкой или шероховатой оболочкой, диаметром 3-5х5-8 мкм, образующиеся на специальных конидиеносцах по бокам либо на концах мицелия и прикрепляющиеся к нему непосредственно или тонкой ножкой. К конидиям также относят крупные веретенообразные формы длиной 6— 8—40 мк, шириной 3—12 мк с поперечными перегородками (макроконидии). В патологическом материале из очагов поражения от больных микозами обнаруживаются достаточно однообразные элементы гриба (споры, нити мицелия), не похожие на элементы гриба в культурах.

124

Культуральные признаки некоторых патогенных грибов, выращиваемых при разных температурах, могут быть различны. Так, например, возбудители кокцидиоидного микоза, бластомикозов, гистоплазмоза при температуре 30-330 С и ниже дают мицелиальные формы, а при температуре 35-370 С-дрожжевые формы, почти совсем лишенные мицелия.

Культуры патогенных грибов отличаются большим разнообразием. Разнообразие колоний зависит от видовых и возрастных особенностей гриба, состава питательной среды и условий культивирования.

Диаметр колоний колеблется от 0,5 до 3 см и более, цвет также варьирует - наряду с бесцветными колониями встречаются беловато-желтоватые, желтые, коричневые, розовые, красные, зеленоватые, оранжевые, фиолетовые, черные. Колонии одних грибов плоские и ровные, других - складчатые, бугристые, морщинистые, в некоторых случаях кратерообразные или куполовыпуклые. Поверхность колоний у одних грибов гладкая, кожистая, иногда блестяще-сального оттенка, у других пушистая, бархатистая или мучнистая.Консистенция культур тоже различна: у одних кожистая, плотная, у других мягкая, тестообразная, слизисто-тягучая, у некоторых крошковатая. Отношение грибов к субстрату также различное: одни глубоко внедряются в среду, другие легко отделяются от питательной среды.

Патогенные грибы являются аэробами, использующими для своего питания различные белки, углеводы, липиды, кератин и т.д. Глубина разложения питательных субстратов различна у разных грибов. Так, одни грибы разлагают белки только до аминокислот, другие до аммиака и сероводорода. Разложение углеводов одними грибами сопровождается кислотообразованием, тогда как другие грибы расщепляют их до углекислоты и воды.

Большинство патогенных грибов лучше развиваются в кислых средах (рН 6,0—6,5) при оптимальной температуре 28-330 С, однако они способны хорошо расти при комнатной температуре (16-200 С) и при температуре 35-370 С.Наиболее часто для культивирования грибов применяют плотную или жидкую среду Сабуро, содержащую пептон и мальтозу.

Лабораторная диагностика микозов

Материалом для исследования являются пораженные волосы, чешуйки кожи, кусочки ногтей, кожные и ногтевые соскобы, гной, мокрота, пунктаты лимфатических узлов, костного мозга, внутренних органов, кровь, спинномозговая жидкость, желудочный сок, желчь, испражнения, биоптаты и др. Материал берут стерильными инструментами (пинцетом, скальпелем, иглой, ножницами, ложечкой Фолькмана и т.д.); тампоны для взятия материала не используются. Патологический материал обрабатывают смесью едкого калия с диметисульфоксидом (20 г КОН + 100 мл 60%-го ДМСО). Препараты «раздавленной капли» исследуют под большим увеличением (х40) обычного или фазово-контрастного микроскопа.

У больных микроспорией в лучах люминесцентной лампы пораженные волосы имеют изумрудно-зеленое свечение.

Для диагностики микозов применяется широкий комплекс лабораторных исследований (микроскопический, микологический, аллергический, серологический, генетические методы, биопроба – схема 23).

Схема 23. Лабораторные методы диагностики микозов

Материал для исследования: пораженные волосы, чешуйки кожи, кусочки ногтей, кожные и ногтевые соскобы, гной, мокрота, пунктаты лимфатических узлов, костного мозга, внутренних органов, кровь, спинномозговая жидкость, желудочный сок, желчь, испражнения, биоптаты и др.

125

Микроскопический метод: исследование нативных и окрашенных препаратов с целью обнаружения элементов гриба (мицелия, спор)

Микологический метод: посев на специальные питательные среды (Сабуро и др.). Идентификация выделенной культуры гриба на основании характеристики колоний, микроскопического строения гриба, а также по биохимическим и другим признакам.

Серологический метод: определение антител к грибам или их антигенам в сыворотке крови больных микозами с помощью РА, РСК, РНГА, РИФ, ИФА, иммуноблотинга

Аллергический метод: постановка внутрикожных аллергических проб с грибковыми аллергенами

Биопроба: заражение чувствительных животных с последующим выделением чистой культуры гриба

Экспресс-диагностика: РИФ, ПЦР

Микроскопический метод играет важную роль в диагностике микозов, т.к. дает возможность быстро выявить в нативных и окрашенных препаратах наличие и расположение клеток, спор гриба и нитей мицелия в патологическом материале. Наиболее часто для окраски грибов применяют общепринятые методы Грама, Романовского-Гимза, Циля-Нильсена, Бурри. Разработан также широкий набор специальных методов окраски грибов.

Экспресс-диагностика микозов осуществляется с помощью прямой РИФ.

Микологический метод (выделение чистой культуры гриба и ее идентификация) является важнейшей составной частью лабораторного исследования при микозах. Посевы производят на специальные плотные и жидкие (неселективные и селективные) питательные среды (среды Сабуро – мальтозо-пептонная, сусло-агар, Чапека; кукурузный, рисовый, картофельный, кровяной, шоколадный, сердечно-мозговой, угольно-дрожжевой агар и т.д.). Селективные среды содержат антибиотики (левомицетин, стрептомицин, пенициллин и др.), красители (бенгальский розовый и др.) или дезинфицирующие вещества. В отличие от слабощелочных сред для выращивания большинства бактерий, среды для культивирования грибов имеют кислую или слабокислую рН

(5,7-6,8).

Для первичной дифференциации грибов разработан агар CHROM с хромогенными субстратами, расщепляющимися ферментами грибов с образованием окрашенных соединений, в результате чего колонии различных видов грибов окрашиваются в разные цвета – красный, желтый, белый, кремовый, коричневый, черный и т.д.

Культивирование грибов осуществляют обычно при температуре 22-280 С в течение 2-4 недель. Идентификацию выделенной культуры гриба проводят на основании характеристики колоний (внешний вид, форма, консистенция, цвет), микроскопического строения гриба (строение мицелия, форма и расположение конидиеносцев и конидий – спор), а также по биохимическим и другим признакам.

Серологический метод – определение антител к грибам или их антигенам в сыворотке крови больных микозами с помощью РА, РСК, РНГА, РИФ, ИФА, иммуноблотинга

Аллергический метод – постановка внутрикожных аллергических проб. Проводят с грибковыми аллергенами, представляющих собой взвеси из убитых грибов, фильтраты обезвреженных нагреванием культур, полисахаридные и белковые фракции клеток гриба. Результаты аллергических проб учитывают через 20 мин (немедленные) и через 24-48 ч (замедленные реакции).

126

Для выявления грибковой сенсибилизации организма также применяют иммунологические тесты in vitro (дегрануляция базофилов как тест гиперчувствительности немедленного типа, а для выявления гиперчувствительности замедленного типа - реакцию торможения миграции лейкоцитов или бласттрансформации лимфоцитов).

Биопроба - заражение чувствительных животных (мыши, крысы, хомяки, кролики, морские свинки, собаки, кошки) различными способами (накожно, внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, внутрисердечно, интрацеребрально, перорально, интратрахеально) для выделения чистой культуры гриба.

Гистологический метод направлен на обнаружение гриба в тканях, полученных при биопсии и аутопсии.

Генодиагностика. Разработана ПЦР для выявления в материале от больного специфических фрагментов ДНК грибов, позволяющая выявить около 40 видов грибов, в том числе Candida albicans и ее варианты, Т. rubrum и С. neoformans, различные виды Aspergillus, возбудителей па-

ракокцидиоидомикоза (Paracoccidioides brasiliensis) и гистоплазмоза (Histoplasma capsulatum).

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ОТДЕЛЬНЫХ МИКОЗОВ

Лабораторная диагностика глубоких (системных) микозов

Возбудителями глубоких микозов, встречающихся в определенных природных очагах, являются почвенные грибы, вызывающие в ряде случаев развитие тяжелых системных форм инфекции.

Криптокккоз

Возбудителем криптококкоза (европейского бластомикоза) является Cryptococcum neoformans, поражающий преимущественно у лиц с иммунодефицитами (как правило, при СПИДе) ткань мозга, легкие, кожу, подкожную клетчатку и слизистые оболочки. Наиболее часто криптококкоз протекает в виде хронического менингита с частыми ремиссиями и обострениями, иногда переходящего в энцефалит. При генерализации процесса прогноз обычно неблагоприятный. Заболевание встречается редко, но распространено повсеместно. Возбудитель обитает в почве, в гнездах птиц, на растениях, в пищевых продуктах. Заражение происходит при вдыхании грибка с пылью.

Материалом для исследования при криптококкозе являются мокрота, гной, спинномозговая жидкость, кусочки костей, биоптататов тканей из очагов поражения и секционный материал. Применяются следующие методы лабораторного исследования.

Микроскопический метод - исследование неокрашенных препаратов из материала от больного, в которых возбудитель выглядит в виде округлых или яйцевидных дрожжевых клеток размером 2х5, реже -10-20 мкм, покрытых толстой слизистой капсулой желтоватого цвета, иногда с одной длинной почкой (рис 33 а). Иногда толщина капсулы (до 50мкм) значительно превосходит размеры самой клетки гриба. Капсулу можно выявить также методом Гинса-Бурри. Реже исследуют гистологические препараты, окрашенные гематоксилином. Тканевая форма криптококка морфологически мало отличается от культуральной.

Микологический метод - посев исследуемого материала на среду Сабуро и другие среды для выращивания грибов. выращивают при 25 — 30 °С. Через 1-5 суток выращивания при температуре 25-300 С на среде Сабуро вырастают блестящие, слизисто-сальные, сметанообразной консистенции колонии беловатого, желтоватого или коричневого цвета с куполообразной гладкой поверхностью (рис. 33 б), реже — морщинистые или мелкозернистые. Идентификацию С. neoformans проводят по морфологическим, культуральным свойствам, способности расти при 37 °С, а также по биохимическим свойствам. Криптококки образовуют уреазу, фенолоксидазу, не растут в присутствии циклогексимида, неспособны ферментировать углеводы.

127

а б

Рис. 33. Возбудитель криптококкоза (Cryptococcum neoformans). а – в исследуемом материале, б – колонии на питательной среде.

Серологический метод - имеет вспомогательное значение, т.к. с помощью РА, РНГА, РП, РСК, РИФ антитела при криптококкозе обнаруживаются в невысоких титрах и непостоянно.

Биопроба - внутрибрюшинное или внутримозговое заражение мышей материалом от больных. Через 2-4 недели животных забивают с целью выделения чистой культуры гриба из внутренних органов. Выделенные культуры идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам.

Генодиагностика. Разработана ПЦР для диагностики криптококкоза.

Североамериканский бластомикоз (болезнь Джилкрайста—Стокса)

Возбудителем этого микоза является Blastomyces dermatitidis - диморфные грибы, вызывающие местное или системное хронически протекающее заболевание с гнойным поражением органов дыхания, кожи, подкожной клетчатки, костей, внутренних органов. Заболевание эндемично для США, Канады, встречается в странах Африки, реже - в Австралии, Индии, Латинской Америке, Европе. Возбудитель обитает в почве, заражение происходит при вдыхании спор гриба с пылью. Исследованию подвергают гной из свищей и абсцессов, спинномозговую жидкость, мокроту, мочу, пунктат лимфатических узлов и т.д.

Возбудитель североамериканского бластомикоза является димор фным грибом, который в тканях развивается в виде дрожжеподобных почкующихся клеток, а в культурах при 200 С - в мицелиальной и дрожжевой формах.

Микроскопический метод – выявление в нативном препарате из материала от больного (или в гистологических препаратах, окрашенных по Романовскому—Гимзе) дрожжеподобных почкующихся округлых или овальных клеток, размером 8—15 мкм, с двойной оболочкой и единственной почкой, располагающейся на широком основании. Вместо образования почки клетка может вытягиваться и принимать вид языка колокола.

Микологический метод – посев на среду Сабуро, сахарный или сусло-агар с последующим выращиванием в течение 4-6 недель при температуре 20-250 С в результате чего образуется мицелиальная форма гриба. Колонии гриба сначала круглые и гладкие, складчатые, дрожжеподобные, затем они последовательно покрываются белым, желтым и бурым пушком с короткими шипами. При микроскопии культур обнаруживают круглые почкующиеся дрожжевые клетки, большое количество септированных нитей мицелия с многочисленными боковыми конидиями круглой, овальной, иногда грушевидной формы, диаметром 3- 5мкм. В старых культурах можно найти хламидоспоры, диаметром 7-18мкм. . Мицелиальная форма легко превращается в дрожжеподобную при выращивании при 370 С, а дрожжевая при 200 С в мицелиальную. На кислых средах вырастает мицелиальная, а на щелочных — дрожжевая форма гриба

Идентификация возбудителя североамериканского бластомикоза основывается на способности гриба трансформироваться в дрожжевую форму при температуре культивирования 370 С и вырабатывать экзоантиген мицелиальной формы гриба, определяемый с помощью реакции иммунодиффузии с диагностической сывороткой и концентрированным экстрактом

128

бульонной или агаровой культуры возбудителя. Для целей идентификации используют ся также методы генодиагностики.

Серологическое исследование. Для серодиагностики применяют РСК и реакцию иммунодиффузии.

Аллергологическое исследование - внутрикожные пробы с бластомицином – аллергеном, полученным из экстракта клеток возбудителя. Диагностическая ценность пробы невысока изза перекрестных реакций.

Биопроба - заражение белых мышей с последующим посевом пораженных тканей на питательные среды с целью выделения чистой культуры гриба и ее идентификации.

Генодиагностика - ПЦР для быстрого обнаружения ДНК возбудителя в исследуемом материале.

Южноамериканский бластомикоз (паракокцидиоидоз)

Встречается только в странах Южной Америки, возбудителем является двухфазный гриб Paracoccidioides brasiliensis, поражающий кожу, слизистую оболочку полости рта и носовой части глотки, внутренние органы, лимфатические узлы. Возбудитель заболевания обитает на растениях и в почве. Заражение происходит аэрогенным путем или при проникновении гриба через слизистую оболочку полости рта в результате ее травмировании при чистке зубов веточкой растения.

Микроскопический метод – изучение нативных или окрашенных по Граму, Романов- скому—Гимзе и другими методами мазков из гноя, мокроты, отделяемого свищей, биоптатов и т.д. Клетки гриба круглые или эллипсоидные, крупные (от 30 до 60 мкм), окруженные толстой оболочкой. Материнская клетка окружена мелкими (2—10 мкм) дочерними бластоконидиями, приобретая характерный вид короны или корабельного штурвала. В отличие от возбудителя бластомикоза место соединения дочерних клеток с материнской узкое. Окончательный диагноз устанавливают после выделения и идентификации возбудителя.

Микологический метод. Гриб медленно растет на питательных средах, образуя через 3-4 недели культивирования при 370 С белые или кремовые колонии, в мазках из которых обнаруживают дрожжевые клетки, размером 40-50 мкм, окруженные большим числом бластоконидий на узком основании (вид «корабельного штурвала»). При более длительном культивировании появляются признаки мицелиального роста. Идентификация гриба проводится с помощью реакции иммунодиффузии с использованием диагностической иммунной сыворотки для определения типа экстрагируемого экзоантигена.

Дрожжевая форма возникает при выращивании культуры гриба при 370 С, колонии в этой форме гладкие или складчатые, сходные с колониями дрожжеподобных грибов. В мазках из колоний видны овальные и круглые клетки крупного размера, с единичными или множественными почками или без них, напоминая тканевые формы гриба.

Мицелиальная форма возникает при выращивании культуры при температуре до 250 С, характеризуется ростом складчатых колоний, покрытых в центре беловато-сероватым, а затем - желтоватым пушком. Под микроскопом видны ветвящийся мицелий и овальные конидии, диаметром 3,0-3,5мкм, которые располагаются по бокам мицелиальных клеток.

Для лабораторной диагностики южноамериканского бластомикоза (паракокцидиоидоза) применяют также методы серологической и аллергической диагностики, биопробу, ПЦР.

Гистоплазмоз

Возбудитель гистоплазмоза - диморфный гриб Histoplasma capsulatum вызывает широко распространенный природно-очаговый микоз в регионах с теплым климатом. В России гистоплазмоз встречается в виде спорадических случаев.

Совершенная стадия гриба является аскомицетом и имеет название Emmonsietla capsulata. Возбудитель гистоплазмоза может иметь дрожжевую (паразитарная форма, встречается в организме человека и животных или развивается на соответствующих искусственных средах), а также мицелиальную форму, свойственную природным и лабораторным штаммам. Дрожжевая форма в тканях и патологическом материале имеет вид одноядерных клеток округлой или грушевидной формы, размером 2-4мкм, с клеточной оболочкой, капсулой и почкой на более

129

узком конце клетки и ядром, которое вдвое меньше клетки. Характерным для тканевой формы является расположение внутри макрофагов, гигантских клеток и клеток ретикулоэндотелиальной системы; реже клетки гриба лежат свободно и напоминают тканевые формы лейшманий.

Гистоплазма обитает в почве, загрязненной пометом птиц и летучих мышей, а также в гнездах птиц. Заражение происходит аэрогенным путем при вдыхании пыли со спорами гриба. Для гистоплазмоза типичны острая или хроническая пневмония, поражение кожных покровов и слизистых оболочек, внутренних органов, развитие анемии, перитонита, менингоэнцефалита и т.д. Гистоплазмы поражают мононуклеарные фагоциты с формированием очагов казеозного некроза, последующим фиброзом и кальцинацией.

Материалом для исследования является отделяемое язвенных поражений кожи и слизистой оболочки, мокрота, кровь, моча, спинномозговая жидкость, пунктаты костного мозга, подкожной клетчатки. Применяются следующие методы лабораторной диагностики.

Микроскопический метод - исследование мазков из патологического материала или гистологических срезов позволяет выявить овальные дрожжеподобные одиночные или почкующиеся клетки гриба, размером 10—15 мкм (рис. 34), а также микроконидии, размером 3-5 мкм. Результаты микроскопического исследования должны быть подтверждены выделением чистой культуры гриба.

Рис. 34. Возбудитель гистоплазмоза (Histoplasma capsulatum) в исследуемом материале.

Микологический метод. Исследуемый материал засевают на среду Сабуро, или другие питательные среды для грибов, посевы инкубируют при температуре 25-300 С и 370 С в течение 3-6 недель. Гистоплазмы образуют блестящие беловатые или коричневатые дрожжеподобные колонии мягкой консистенции, которые состоят из округлых клеток диаметром 4 — 5 мкм с мелкими почками на тонких ножках. При более низкой температуре инкубирования возбудитель образует белый волокнистый мицелий, образованный в зрелых колониях бугорчатыми макроконидиями и/или мелкими каплевидными конидиями. Выделенную культуру идентифицируют по морфологическим и культуральным признакам, а также по антигенной структуре (реакция иммунодиффузии с диагностической сывороткой к антигенам гриба).

На среде Сабуро при температуре 25-300 С характерен рост аэробной мицелиальной формы в виде пушистых колоний, цвет которых варьирует от белого до коричневого. Мицелий в этих колониях септированный, ветвистый, многоядерный, диаметром до 5мкм. Макроконидии крупные, круглые или грушевидные, диаметром 10-25мкм, с шиловидными выростами, располагаются на концах воздушных нитей мицелия. Имеются хламидоспоры. Микроконидии гладкостенные, округлые, грушевидные или сигарообразные, размером 2-6мкм.

Дрожжевая форма гистоплазмы относится к факультативным анаэробам или микроаэрофилам и вырастает на кровяных средах с глюкозой при температуре 35-370 С и рН 7,2-7,6. Коло-

130