Chastnaya_mikrobiologia

свидетельствует о наличии 3-галактозамидазы. Положительный тест на оба фермента в сочетании с наличием ростовых трубок считаются достаточными для идентификации С. albicans.

Серологический метод (постановка РСК, РА, ИФА. РНГА, ВИЭФ и др. с парными сыворотками крови больных с целью определения специфических антител) обычно проводится при висцеральных формах кандидоза. Результаты исследования считают положительными при нарастании титра антител более чем в 4 раза в динамике заболевания. Для РА используются корпускулярные антигены, для РСК очищенные полисахариды, лизаты или ультразвуковые дезинтеграты дрожжеподобных грибов.

Аллергологический метод (преимущественно у больных висцеральным кандидозом) - постановка внутрикожной аллергической пробы со стандартным кандидозным аллергеном, представляющим взвесь клеток грибов, прогретую при 800 С в течение 2 ч. Результаты реакции (гиперемия, папула) учитывают через 24 — 48 ч. В связи с широким распространением сенсибилизации к антигенам грибов аллергопроба имеет ограниченное диагностическое значение.

Генодиагностика - разработана ПЦР для инидикации видоспецифического фрагмента ДНК С. albicans.

Другие оппортунистические микозы

К возбудителям этих заболеваний относят условно-патогенные грибы родов Aspergillus, Penicillium, Rhizopus, Rhiiomucor, Pneumocystis и др. Они вызывают преимущественно у лиц с им-

мунодефицитом широкий спектр заболеваний, варьирующих по остроте, локализации, тяжести процесса и клиническим проявлениям, вплоть до системных инфекций, угрожающих жизни.

Плесневые микозы наиболее часто встречаются у работников элеваторов, пивоваренных, мукомольных, комбикормовых заводов при контакте с заплесневелым зерном, у рабочих силикатной промышленности, ткацких и шпагатно-веревочных фабрик и др. Афлатоксикоз возникает в результате употребления в пищу зерна, орехов и других пищевых материалов, содержащих сильнодействующие афлатоксины в результате вегетации грибов рода Aspergillus.

Материалом для исследования при оппортунистических микозах являются мокрота, гной, кусочки тканей из пораженных органов и др.

Аспергиллез

Грибы рода Aspergillus обитают и развиваются на органических субстратах в почве, а также на растениях. Споры аспергилл постоянно находятся в воздухе, а из него попадают на продукты питания, предметы обихода, наружные покровы и слизистые человека.

Наиболее часто аспергиллеза вызывает вид A.fumigatus, реже - A.flavus, A.niger, A.nidulans. Некоторые виды аспергилл (Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus) продуцируют аф-

латоксины, обладающие высокой токсичностью и канцерогенностью.

. Заражение происходит, как правило, аэрогенным, реже алиментарным и еще реже контактным путем в результате повреждения кожи или слизистых оболочек и попадания на них спор гриба. Аспергиллез может возникать как типичная аутоинфекция в результате активации аспергиллов, обитающих в организме человека. Больные аспергиллезом люди не заразны для окружающих.

Аспергиллез обычно развивается вторично при каком-либо хроническом заболевании на фоне иммунодефицита; у здорового человека первичный аспергиллез возникает только при попадании в организм массивных доз плесени. Чаще всего при этом заболевании поражается бронхолегочная система (аспергиллома легких, трахеобронхит), реже - наружное ухо, слизистая оболочка и придаточные пазухи носа, а также миндалины. Иногда наблюдается гематогенное распространение инфекции с развитием генерализованной формы, при которой поражаются различные внутренние органы (головной мозг, печень и т.д.), а также глаза. При использовании пищевых продуктов или кормов, содержащих афлатоксины, продуцируемые некоторыми штаммами A.flavus и A.parasiticus, развиваются афлатоксикозы.

Микроскопический метод – исследование нативных мазков из патологического материала, в которых находят характерный для гриба септированный мицелий, толщиной 4-6 мкм, а также типичные конидиальные головки (рис. 38). Основанием для постановки диагноза аспергиллеза является обнаружение мицелия и характерных органов спороношения гриба (кони-

141

диеносцев) в окрашенных срезах биоптатов тканей, особенно в тех случаях, когда они взяты из закрытых полостей или невскрывшихся абсцессов.

Рис. 38. Возбудитель аспергиллеза (Aspergillus fumigatus) в исследуемом материале.

Микологический метод. Является наиболее достоверным методом в лабораторной диагностике аспергиллеза, особенно при выделении культуры возбудителя в результате исследования биоптатов или пунктатов из закрытых очагов поражения (абсцессы, воспалительные участки тканей). Диагностическое значение имеет также повторное обнаружение одного и того же вида гриба в значительных концентрациях, сочетающееся с клинико-эпидемиологическими, патоморфологическими и иммунологическими данными.

Аспергиллы являются аэробами, они хорошо растут на среде Сабуро при температуре 23260 С. Морфология колоний зависит от вида аспергилл, обычно колонии бархатистые, пигментированные. При микроскопическом исследовании культуры обнаруживают септированный мицелий, от которого перпендикулярно отходят ответвления — конидиеносцы, на концах которых имеются вздутия с выростами (стеригмы) с гладкими или шероховатыми, округлой или овальной формы конидиями, окрашенными в светлые или темные тона, определяющими цвет колонии. У видов аспергилл, обладающих половым путем размножения, образуются аскоспоры, находящиеся в специальных сумках - асках.

Серологический метод. Для выявления антител в сыворотке крови применяют РП, РСК, ИФА и др. Диагностическое значение имеет также резко повышенный титр IgE в сыворотке крови больного.

Аллергический метод - постановка внутрикожной аллергической пробы с соответствующими аллергенами из аспергилл используется как вспомогательный метод диагностики аспергиллеза. Аспергиллы можно проверять на токсигенность путем заражения морских свинок или кроликов, но чаще афлатоксины идентифицируют в экстрактах хроматографическими методами.

Разработаны методы ПЦР-диагностики оппортунистических микозов (аспергиллеза и др.).

Пенициллиоз

К возбудителям пенициллиоза относят Penicillium marneffei, реже — другие виды Penicillium. Возбудителями зигомикоза (мукороза, мукоромикоза) являются Absidia corymbifera, Rhizomucor pussillus, Rhizopus arrhizus, Rhizopus microsporus и другие грибы.

Фикомикоз (мукороз)

142

Возбудителями фикомикоза (мукороза) являются различные виды грибов родов

Rhizopus, Mucor, Absidia, входящих в семейство Мисоrасеае класса Phycomycetes (Zygomycetes). Они широко распространены в природе, обитая в почве, навозе, воздухе, на гниющих частях растений, плодов и др.

Фикомикоз - сравнительно редкое заболевание. Описано более 200 видов семейства Мисоrасеае, однако лишь немногие из них вызывают фикомикоз.

В организм человека споры проникают аэрогенным, реже — алиментарным путем, их можно обнаружить на слизистой носа, на коже. Фикомикоз не заразен и от человека человеку не передается.

Заболевание, как правило, развивается вторично у лиц с иммунодефицитами, при сахарном диабете, обширных ожогах, лейкозах, лимфомах и т.д. Зигомицеты проникают через стенки кровеносных сосудов и размножаются внутри сосудов, вызывая развитие тромбоза. Это происходит чаще всего в легких, пазухах носа, желудочно-кишечном тракте и приводит к возникновению ишемического некроза в окружающих тканях с образованием интенсивного полиморфноядерного инфильтрата. При гематогенной диссеминации может развиваться менингоэнцефалит. Применяются следующие методы лабораторной диагностики.

Микроскопический метод. В нативных препаратах из мокроты и гноя обнаруживаются элементы гриба - широкие несептированные нити мицелия неравномерной толщины, можно найти также спорангии. В гистологических препаратах также находят части гриба (мицелий, реже спорангии), располагающиеся в тромбированных сосудах или синусах, и окруженные скоплениями лейкоцитов и гигантских клеток (рис. 39).

Микологический метод. Грибы этого семейства являются аэробами, хорошо растут при температуре 22-370 С на среде Сабуро. Колонии обычно пушистые, сначала белые, затем темно-серые или бурые. От хорошо развитого несептированного мицелия отходят длинные (до 5мм) спорангиеносцы и ризоиды (Rhizopus nigricans), с помощью которых мицелий прикрепляется к субстрату, а также сплетающиеся в виде войлока спорангиеносцы (Mucor mucedo). Спорообразование эндогенное, споры одноклеточные, шаровидные или овальные, образуются в шаровидных или грушевидных спорангиях, диаметром до 200 мкм. Спорангий находится на конце спорангиеносца (ножки), от которого отделяется перегородкой, от последней внутрь спорангия отходит выпячивание — столбик шаровидной, грушевидной или яйцевидной формы. У некоторых грибов этого семейства воздушный мицелий имеет вид дугообразно изогнутых пучков гиф — столонов.

Рис. 39. Возбудитель мукороза (Mucor mucedo) в исследуемом материале

143

Пневмоцистоз

Возбудитель пневмоцистоза (Pneumocystis carinii) является дрожжевым грибом, входящим в состав класса Blastomycetes. Пневмоцисты широко распространены в природе среди грызунов (крысы, мыши) и домашних животных (собаки), встречаются у чел овека, однако обычно у здоровых людей заболевания не вызывают. Непременным условием развития пневмоцистоза является иммунодефицит (в частности, СПИД), при котором в р е- зультате аэрогенного заражения гриб вызывает интерстициальную пневмонию.

Типичной структурой гриба является «розетка» из 8 грушевидных спорозоитов, размерами 1-2мкм, в виде цистоподобной структуры диаметром 7-10мкм. Ранние стадии развития гриба представлены слизистыми шаровидными структурами с 1 -4 ядрами (пневмоцисты). Оболочка пневмоцист при окраске по Романовскому-Гимзе окрашивается в красно-фиолетовый цвет, цитоплазма – в голубой, а ядра - в красный. Пневмоцисты, окруженные пенистым веществом и скоплениями плазматических клеток с эозинофилами, в обилии находятся в легочных альвеолах и бронхиолах (рис. 40) .

Возбудитель пневмоцистоза не культивируется на искусственных питательных средах и в различных биосистемах (культуры клеток, куриные эмбрионы, лабораторные ж и- вотные), что значительно сужает возможности лабораторного подтверждения этой и н- фекции. В практической работе единственным методом лабораторной диагностики этой инфекции является микроскопический (исследование мокроты больного или секционн о- го материала на наличие пневмоцист при окраске препаратов по Романовскому-Гимзе).

Рис. 40. Возбудитель пневмоцистоза (Pneumocystis carinii) в исследуемом материале.

Самостоятельная работ студентов Лабораторная диагностика эпидермомикозов.

1. Микроскопический метод – исследование материала от больного (пораженные волосы, ногти, чешуйки кожи) с целью обнаружения мицелия гриба и спор. Для более четкого выявления элементов гриба производят просветление материала. Для этого на предметное стекло наносят каплю 20% едкой щелочи, в которую помещают пинцетом патологический материал и слегка подогревают над пламенем спиртовки, не доводя до кипения. Затем каплю накрывают покровным стеклом и микроскопируют, используя малое и большое увеличение.

При поверхностной и хронической трихофитии элементы гриба (в основном споры), цепочками располагаются внутри волоса по типу "эндотрикс". Границы волоса четкие, споры округлые, за пределы волоса не выходят, напоминая пробирку, заполненную горохом.

При инфилътративно-нагноительной трихофатии споры грибов располагаются цепочками снаружи волоса - "экзотрикс". Контуры волоса нечеткие, смазанные. При микроспории волос

144

окружен чехлом из мозаично расположенных мелких спор, внутри волоса обнаруживаются фрагменты гриба в виде нитей мицелия и споры.

При эпидермофитии и рубромикозе элементы гриба (септированные нити мицелия, споры) содержатся в чешуйках кожи.

2.Микологический метод. Исследование проводится для установления родовой и видовой принадлежности возбудителя путем выделения чистой культура гриба и его идентификации на осно-

вании макро- и микроскопического строения. Производен посев патологического материала на агар Сабуро с добавлением антибиотиков. Посевы инкубированы при температуре 280 С в течение 1-2 недель. Изучают культуральные свойства грибов, отмечая при описании внешнего вида колоний их вид, консистенцию, цвет. Колонии дерматофитов разнообразные: кожистые, пушистые, мучнистые, бугристо-складчатые в центре с радиальными бороздами по периферии у грибов рода Trichophyton, бархатисто-ворсистые у грибов рода Microsporum; сухие, порошковидные, бархати- сто-ворсистые у грибов рода Epidermophyton. После осмотра колонии изучают при малом увеличении микроскопа или в стереомикроскопе. Отмечают наличие или отсутствие воздушного мицелия, расположение конидиеносцев, общее строение конидиеносного (спороносного) аппарата, расположнение спор.

3.Изучить препараты, используемые для лечения дерматомикозов: низорал, ламизил, гризеофульвин, препараты йода, миконазол, орунгал и др.

Лабораторная диагностика кандидозов.

1.Микроскопический метод. Промикроскопировать мазки из пораженных участков слизистой оболочки полости рта, окрашенные метиленовым синим, обратить внимание на форму, окраску клеток гриба, на наличие псевдомицелия и бластоспор (клетки-почки, находящиеся на перетяжках псевдомицелия) хламидоспор (споры с двойной оболочкой), гломерул (скопления бластоспор по ходу мицелия в местах его сочленения), вертицилл (мутовок боковых ветвлений).

2.Микологический метод. изучить характер роста грибов рода Кандида на сусло-агаре (колонии гриба гладкие, блестящие, сметанообразной консистенции или морщинистые, матовые). Произвести учет сахаролитических свойств дрожжеподобных грибов.

3.Серологический метод (выявление специфических антител в парных сыворотках крови больного кандидозом). Диагностически значимым считают нарастание титров антител в 4 раза и более.

учет РСК с парными сыворотками больного кандидозом (7 и 17 дни болезни). Диагностикум - полисахаридная фракция грибов рода Кандида.

учет РА с парными сыворотками крови больного кандидозом. В качестве антигена используют взвесь в изотоническом растворе хлорида натрия культуры гриба плотностью 2 млрд, микробных тел в 1 мл.

4.Изучить препараты, используемые для профилактики, диагностики и лечения канди-

доза:

кандидозный антиген 2-х суточной культуры грибов рода Candida в изотоническом расгворе хлорида натрия,

кандидозный антиген - спиртовой экстракт из культуры грибов Candida, применяется для постановки РСК и кожной аллергической пробы,

антибиотики: нистатин, леворин, клотримазол, маконазол.

Лабораторная диагностика глубоких микозов.

1.Иммунофлюоресцентный метод. Срезы пораженных тканей обрабатывают люминесцирующей сывороткой, содержащей антитела против гриба, меченные флюорохромом. Положительный результат характеризуется наличием ярко люминесцирующего ободка по периферии клетки гриба (демонстрация).

2.Серологический метод (определение антител к возбудителям глубоких микозов в сыворотке крови больных с подозрением на глубокий микоз):

учет реакции латекс-агглютанации при криптококкозе ,

учет РСК с парными сыворотками больного гистоплазмозом. (диагностический титр 1:8).

145

4.Изучить препараты, используемые для диагностики и лечения глубоких микозов: гис-

топлазмин, бластомицин, амфотерицин В, миконазол.

Лабораторная диагностика плесневых микозов.

1.Микологический метод. Макро- и микроскопическое изучение культур плесневых грабов

ина основании морфологических свойств определение их родовой принадлежности. При исследовании культуры мукоровой плесени обратить внимание на наличие несептированного мицелия, от которого отходит несептированный спорангиеносец с шаровидным расширением наверху - спорангием, который заполнен эндоспорами. У плесеней рода Aspergillus нити несептированного мицелия, переплетаясь друг с другом, образуют густую грибницу, от которой отходят одноклеточные конидиеносцы, заканчивающиеся веерообразным расширением (стеригмы со спорами - конидиями). У пеницилловых плесеней Penicillium от грибницы отходят септированные конидиеносцы, заканчивающиеся в виде кисточки из стеригм и конидий

2.Серологический метод:

выявление антител с помощью РНГА в парных сыворотках крови больного аспергилле-

зом.

Педиатрические аспекты темы

У детей чаще, чем у взрослых встречается такие дерматомикозы как микроспория, трихофития, фавус (парша). Дети нередко заражаются от домашних животных (кошек и собак). У новорожденных детей часто встречается первичный кандидоз в виде молочницы. Обсеменение грибами рода Candida происходит при прохождении ребенка через родовые пути матери, а также через предметы окружающей среды. При наличии у детей молочницы и одновременно других инфекционных заболеваний антибактериальные антибиотики необходимо применять с большой осторожностью, комбинируя их с витаминами и антифунгальными препаратами (леворином, нистатином и т.д.). Кандидозы у детей старшего возраста являются, как правило, вторичным заболеванием.

После изучения темы студент должен знать: характеристику возбудителей грибковых инфекций (микозов), а также принципы лабораторной диагностики, профилактики и лечения микозов.

Изучив тему, студент должен уметь: трактовать результаты лабораторных исследований при микозах.

Тема 18. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПРОТОЗОЙНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Цель занятия: изучение биологических свойств основных возбудителей протозойных инфекций - малярии, криптоспоридиоза, токсоплазмоза, трихомониаза, лямблиоза, амебиаза, балантидиоза, методов их лабораторной диагностики, профилактики и лечения.

Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1.Плазмодии малярии. Морфология. Циклы развития. Патогенез малярии, иммунитет. Лабораторная диагностика. Профилактика. Препараты для лечения.

2.Токсоплазмы, бабезии, лямблии, лейшмании, трипаносомы, трихомонады, амебы, балантидии, микроспоридии. Морфология и культивирование. Патогенез. Лабораторная диагностика. Препараты для лечения. Профилактика.

Основные методы лабораторной диагностики протозойных инфекций Микроскопический метод направлен на выявление паразитов в нативных и окрашенных

препаратах. Материалом для исследования служат кровь, пунктаты грудины или лимфатических узлов, спинномозговая жидкость, соскоб с кожных элементов, фекалии, дуоденальное содержимое, отделяемое слизистой оболочки наружных половых органов или мочеиспускательного канала. Простейшие можно обнаружить как в мазках, так и в гистологических препаратах, изготовленных из пораженных тканей. Разработано значительное число методов окраски простейших, среди которых наиболее часто применяется метод Романовского-Гимза.

Культуральный метод заключается в посеве исследуемого материала на среды, содер-

жащие кровь или нативную сыворотку, яичный белок, углеводы, аминокислоты и другие вещества (рН сред 7,0-7,6). Культивирование большинства простейших осуществляют обычно при 370

146

С, лейшманий и трипаносом при 20-260 С. Результаты посевов учитывают визуально и микроскопическим методом ( препарат «раздавленная» капля) через 24, 48, 72, 120 часов. Дизентерийные амебы, балантидии, трихомонады, хиломастиксы проще выявить микроскопическими методами, однако при необходимости применяют культуральное исследование.

Серологический метод при протозойных инфекциях имеет вспомогательное значение. Применяется РА (американский трипаносомоз), РП (американский трипаносомоз, амебиаз), РСК (американский трипаносомоз, токсоплазмоз, висцеральный лейшманиоз, амебиаз), РИФ (американский трипаносомоз, малярия, токсоплазмоз, висцеральный лейшманиоз, амебиаз), РНГА (токсоплазмоз), ИФА (токсоплазмоз, тропическая малярия, амебиаз, кожный и висцеральный лейшманиозы, американский трипаносомоз).

Аллергический метод – кожные аллергические пробы применяются редко, обычно для подтверждения диагноза кожного лейшманиоза (проба с лейшманином, реакция Монтенегро) и токсоплазмоза (проба с токсоплазмином).

Биологический метод (биопроба) применяется для подтверждения диагноза ряда протозоозов, а также в научных целях. Чувствительными животными для дизентерийных амеб и балантидий являются 2-3-недельные крысята, морские свинки, котята, щенки, золотистые хомячки; для лямблий — мыши; для лейшманий белые мыши и хомяки; для американских трипаносом - морские свинки; для африканских трипаносом – мартышки; для токсоплазм - белые мыши. Заражение животных осуществляют парентерально, в слепую кишку при лапаротомии, через длинный пластмассовый зонд или путем скармливания животным исследуемого материала.

В течение 30 дней после заражения микроскопическому исследованию подвергают кровь животных, мазки-отпечатки из органов или гистологические препараты из пораженных тканей.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПРОТОЗОЙНЫХ ИНФЕКЦИЙ Малярия

Возбудителями тропической малярии является Plasmodium falciparum, трехдневной малярии - Plasmodium vivax, четырехдневной малярии - Plasmodium malariae и трехдневной или овалемалярии - Plasmodium ovale. Малярийные плазмодии претерпевают половой цикл развития в организме комара рода Anopheles и бесполый цикл (шизогония – рис.41) — в организме человека, поражая сначала клетки печени (тканевая шизогония), а затем эритроциты (эритроцитарная шизогония).

Микроскопический метод. Кровь на наличие плазмодиев малярии исследуют на стадии эритроцитарной шизогонии путем микроскопии обычных мазков и толстой капли, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Плазмодии, цитоплазма которых окрашена в голубой цвет, а ядро в вишнево-красный, находят в эритроцитах.

Бесполые (эритроцитарные) формы паразитов имеют некоторые морфологические особенности. В частности, мерозоит представляет собой круглую или овальную форму с небольшим участком цитоплазмы около ядра; кольцевидный трофозоит - одноядерную форма с узким ободком цитоплазмы, окружающим небольшую вакуоль; амебовидный трофозоит - одноядерную форму с различным количеством и величиной псевдоподий; шизонт содержит два или несколько ядер; морула характеризуется полным разделением ядра и цитоплазмы на мерозоиты.

Половые формы плазмодиев (гаметоциты или гамонты) не содержат вакуолей и псевдоподий. Мужские (микрогаметоциты) и женские (макрогаметоциты) формы отличаются по величине и структуре ядра, интенсивности окраски цитоплазмы и размерам.

При микроскопии тонкого мазка при малярии находят обычно кольцевидные трофозоиты.

У P. vivax, P. malariae, P. оvale они имеют размеры от 2 до 4 мкм, занимают около 1/3 диаметра эритроцита. Ядра у трофозоитов P. vivax и P. malariae круглые, у P. ovale — неправильной формы, крупные; ободок цитоплазмы ровный, неширокий, суживается к ядру. Молодые кольцевидные трофозоиты P. falclparum мелкие (1,25-1,50 мкм), занимают примерно 1/6 часть диаметра эритроцита, имеют маленькое круглое ядро с тонким ободком цитоплазмы. Взрослые кольцевидные

147

трофозоиты более крупные, занимают 1/3 диаметра эритроцита, ободок цитоплазмы толстый, резко суживающийся к ядру.

Амебовидные трофозоиты P. vivax отличаются разнообразием форм, размеров, наличием одной или нескольких псевдоподий, вакуолей, круглого или овального ядра, пигмента в виде темнокоричневых цитоплазматических зерен различной величины и формы. Амебовидные трофозоиты P. malariae округлые и овальные (нередко в виде ленты поперек эритроцита с продолговатым или вытянутым ядром), с короткими и широкими псевдоподиями, более темной цитоплазмой и пигментом, ядром неправильной формы.. Амебовидные трофозоиты P.falciparum в виде круглых или

148

Рис. 41. Основные стадии эритроцитарной шизогонии малярийных плазмодиев

205

овальных форм лишены вакуоли, имеют ядро круглой или неправильной формы, пигмент черного цвета, расположенный компактно, однако они, как правило, в периферической крови не обнаруживаются. Молодые трофозоиты P. ovale имеют кольцевидную форму, более взрослые сходны с

P. malariae.

Размеры шизонтов у возбудителей малярии увеличиваются по нарастающей в ряду P.vivax, P. ovale, P.falciparum.

Морула P. vivax содержит обычно от 14 до 16 беспорядочно расположенных мерозоитов, между которыми лежат глыбки пигмента. В моруле P. malariae около 8 крупных мерозоитов, расположенных в виде розетки; в моруле P.falciparum 8-24 мелких мерозоитов, занимающих часть эритроцита; в моруле P. ovale около 8 крупных мерозоитов с ядром неправильной формы. Гаметоциты Р. vivax (крупные), P. malariae (мелкие) и Р. ovale округлой или овальной формы; глыбки пигмента крупные, равномерно расположены в цитоплазме гаметоцитов. В женских гаметоцитах у края цитоплазмы обнаруживают компактное ядро темно-голубого цвета. Расположенное центрально ядро мужских гаметоцитов розовато-фиолетового цвета, крупное, рыхлое. Гаметоциты этих видов плазмодиев появляются и исчезают из периферической крови вместе с трофозоитами. Гаметоциты P.falciparum имеют характерную полулунную форму с ядром, расположенным в средней части цитоплазмы (у женских форм оно небольшое и компактное, у мужских - крупное и рыхлое). Пигмент окружает ядро в виде коротких палочек. Стадия развития гаметоцитов P.falciparum в эритроците существенно превышает длительность шизогонии. Эти гаметоциты выявляются в периферической крови на 8-10 день после появления кольцевидных трофозоитов, продолжая поступать в кровь через несколько недель после их исчезновения на фоне отсутствия клинических симптомов малярии..

Эритроциты, пораженные P. vivax и P. ovale, увеличиваются в диаметре до 10-12 мкм, хуже окрашиваются по Романовскому —Гимзе; эритроциты, пораженные P. ovale, могут приобретать неправильную форму, иметь бахромчатый край. Морфология эритроцитов, содержащих P. malariae и P. falciparum, не меняется.

В эритроцитах, содержащих P. vivax на различных стадиях развития, выявляются множественные мелкие азурофильные зерна (зернистость Шюффнера), при наличии в эритроцитах P. ovale зерна редкие и крупные (зернистость Джеймса), при обнаружении в эритроцитах кольцевидных трофозоитов P.falciparum можно выявить небольшое количество крупных азурофильных зерен (зернистость Маурера), а в тех случаях, когда возбудителем является P. malariae, в эритроцитах выявляют мелкую зернистость Циманна.

Морфология возбудителей малярии в толстой капле. Кольцевидные трофозоиты P. vivax, P. ovale, P. malariae обычно имеют одинаковую величину, однако в толстой капле они часто дефор-

206

мируются, превращаясь в форму запятой или восклицательного знака; цитоплазма при этом концентрируется около ядра в виде округлого или треугольного комочка. Наряду с кольцевидными трофозоитами можно найти другие формы плазмодиев и определить вид возбудителя.

Аналогичные превращения происходят и с кольцевидными трофозоитами P. falciparum, часть из которых сохраняет свою форму. Цитоплазма может разрываться, располагаясь с двух сторон от ядра в виде «крыльев ласточки», нередко находят раздвоенные ядра. На других стадиях развития плазмодии малярии в периферической крови обычно не выявляются.

Для амебовидных трофозоитов P. vivax в толстой капле характерна деформация их цитоплазмы в виде двух или нескольких комочков, располагающихся около ядра.

Трофозоиты P. malariae в мазке выглядят как компактные овальные или округлые образования с большим количеством пигмента.

На стадии морулы различные виды плазмодиев имеют разное количество мерозоитов и форму морулы. У P. malariae в толстой капле морула сохраняет форму розетки, шизонты и морулы P. ovale напоминают аналогичные формы P. malariae, однако ядро более крупное, пигмента меньше, встречаются неразрушенные пораженные эритроциты. При малярии, вызванной P. vivax, пораженные эритроциты так же не всегда разрушаются, сохраняется зернистость Шюффнера. У P.