Особенности методики приготовления постоянных гистологических препаратов некоторых органов и тканей

I. Обработка и окрашивание костной ткани. Наличие в межклеточном веществе костной ткани солей кальция придает ей твердость, затрудняющую приготовление препаратов. Поэтому обработка костной ткани включает приготовление срезов после специальной предварительной подготовки объекта - декальцинацией в водном растворе азотной кислоты 5-7% концентрации, кроме того, одним из способов получения препаратов из костной ткани является приготовление тонких костных пластинок (шлифов) из клубочков нефиксированной костной ткани путем стачивания последних. Наиболее распространенным методом окраски срезов декаль-цинированой кости является окраска по Шморлю (тионином с пикриновой кислотой), после чего общий фон срезов приобретает коричневый или болотный цвет, а костные клетки и их отростки окрашиваются в красный.

II. Приготовление тотальных препаратов. В тех случаях, когда необходимо изучить микроскопическую структуру объекта, имеющего пленочное строение (серозные, мозговые оболочки), готовят целостные тотальные препараты. Для этого участок пленки во избежание складок расправляют и фиксируют на ровной поверхности. По окончании фиксации материал обрабатывают обычным способом или, если объект сам по себе достаточно тонок и имеет естественную окраску, можно ограничиться лишь фиксацией, просветлением и заключением его (например, при выявлении пигментных клеток твердой и мягкой мозговых оболочек) или фиксацией, окрашиванием (препарат мелких сосудов мягкой мозговой оболочки).

III. Приготовление и окраска мазков крови. Для морфологического исследования клеток крови и подсчета лейкоцитарной формулы готовят мазок крови. Он должен отвечать следующим условиям: 1) начинаться на расстоянии 1 см от края предметного стекла и заканчиваться не доходя до края противоположной стороны на 2-3 см; 2) препарат должен быть равномерной толщины, а не волнообразным; 3) слой крови не должен достигать краев стекла. В противном случае в мазке эритроциты будут лежать густым слоем, и образовывать монетные столбики. Фиксируют метиловым (этиловым) 100° спиртом и окрашивают по методу Романовского - Гимза (азур-2 с эозином). Первый окрашивает базофильные структуры клеток в ярко-синий цвет, а эозин-оксифильные части в розово-красный.

IV. Гистологические препараты для пунктатов органов. Диагностическая пункция (взятия материала с помощью специальных игл) все больше входит в гистологическую практику. Гистологические препараты из пунктата обладают преимуществом перед мазками, поскольку они позволяют изучить структуру нормальной и патологически измененной ткани. Пунктат смешивают в чашке Петри с раствором лимоннокислого натрия для предупреждения свертывания крови. После кратковременного стояния жидкое содержимое сливают, а осевшие плавающие частички собирают на полоску фильтровальной бумаги. Эту процедуру проводят несколько раз. Собранный материал вместе с фильтровальной бумагой фиксируют в зависимости от взятого органа (например, печень в 10% формалине, костный мозг в жидкости Ценкера) и по окончании фиксации промывают в проточной воде, проводят через спирты и заключают в парафин, предварительно отделив фильтровальную бумагу. Окраска производится в зависимости от цели исследования.