Аэробных бактерий

Ι этап. Накопление или рассев микробного материала.

ΙΙ этап. Получение изолированной колонии.

ΙΙΙ этап. Накопление (получение) чистой культуры.

ΙVэтап. Идентификация микробного вида.

Параметры идентификации микробного вида:

- морфология и тинкториальные свойства

- культуральные свойства

- антигенная характеристика

- биохимическая характеристика

- факторы патогенности

- фаготипирование

- чувствительность к антибиотикам

V. Заключительный этап: на основе учета результатов, изучения морфологии, структуры, тинкториальных, культуральных, биохимических, серологических свойств, чувствительности к антибиотикам и бактериофагии дают полное заключение.

СХЕМА ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АНАЭРОБОВ

Iэтап. Накопление инфекционного материала.

IIэтап. Получение изолированной колонии.

IIIэтап. Накопление чистой культуры.

IVэтап. Идентификация микробного вида.

Vэтап. Заключение.

Приложение 2

Физические методы культивирования анаэробов

Полужидкая среда столбиком под слоем вазелинового масла с резиновой пробкой, посев уколом.

1. Редукцией среды – удаление кислорода с кипячением и с последующим нанесением слоя вазелинового масла.

2. Микроанаэростат Аристовского.

3. Трубки Вейон – Виньяла с запаянными или парафинированными концами.

4. Эксикатор с горящей свечой.

5. Метод Перетца с заливкой инфицированной расплавленной среды между спичками на дне чашки под предметное стекло. Чашка герметически закрывается, под пластилином или парафином.

Приложение 3

Химический метод культивирования анаэробов

1. Эксикатор, на котором помещается один из поглотителей кислорода, например пирогалол. Крышка плотно притерта.

2. Пробирка Бюхнера с шаровидным расширением и шейкой внизу, куда также помещается поглотитель О₂, а над шейкой устанавливается косячок с посевом. Пробка резиновая.

Приложение 4

Биологический метод культивирования анаэробов (м-д Фортнера)

Метод основан на одновременном посеве в чашку со средой, разделенной по диаметру канавкой, испытуемого материала или чистой выделенной культуры анаэробов и какого-либо штамма-аэроба – жадного потребителя кислорода (Bac. prodigiosum, Sarcina lutea– из воздуха).

Чашкaс посевом герметически закрывается с помощью утрамбованной ваты, пластилина или парафина, и становиться для инкубации в термостат.

Вначале в связи с присутствием в чашке О₂бурно растут анаэробы.

Приложение 5

Биохимическое определение газообразных веществ при оценке протеолитической активности

Метод Сальковского для определения индола

Бульонную культуру микроорганизмов нагревают с 4 мл 10% серной кислоты, затем с 0,5 – 2 мл, 0,05 раствора азотисто-натриевой соли. Реактивы приливают по стенке пробирок.

Появление красно-фиолетового кольца указывает на наличие индола.

Определение индола по методу Эрлиха

Культуру выращивают на МПА, после чего делают густой посев в пробирки жидкой средой с казеином, нагретой до 30-35С⁰.

Пробирки инкубируют 2 часа в термостате, а затем добавляют сначала 5 мл раствора №1, а затем 5 мл раствора №2. Через 5 минут, при наличие индола, появляется красное окрашивание среды.

Раствор №1:

парадиметиламинобензальгид – 1г

Этиловый спирт (95^о) - 95мл

Соляная кислота (удельный вес 1,19) -20мл

Раствор №2:

насыщенный раствор K₂Cr₂O₂.

Определение сероводорода по методу Хоменко

К расплавленному МПА добавляют уксусно-кислый свинец, охлаждают до 45 ⁰ C, добавляют яичный белок в количестве 2%, тщательно смешивают со средой, разливают по пробиркам и стерилизуют текучим паром (3 дня по 30 мин).

Посевы делают уколом. При наличии способности образовывать H₂Sсреда по линии укола чернеет.