Бактериологическое исследование при брюшном тифе и паратифах (гемокультура)

1. Цель исследования – накопить возбудителя

Визуально + 37^оС,

18-24 Часа

Окраска

по Граму

Исследуемый материал (кровь)

Среды накопления:

- Раппопорт (1:10), желчный бульон (20%)

М:1Б, дистиллированная вода, среды

Мюллера, Кауфмана и т.п.

2. Цель исследования – получить изолированные колонии

Визуально + 37^оС,

18-24 Часа

Окраска по Граму

Подвижность

ДДС

Среды: Эндо, Левина, Плоскирева,

Рост на среде накопления Вильсон-Блера и др.

3. Цель – изучить изолированную колонию и накопить чистую культуру

Визуально Отсев колоний

+ 37^оС,

Окраска по Граму 18-24 часа

Подвижность

ДДС Изолированные колонии Скошенный МПА Скошенный столбик сред

Ресселя, Олькеницкого,

Клиглера и др.

4. Цель – изучение биологических свойств чистой культуры бактерий

1. Биохимическая активность

Визуально ТАВК

По Граму

Ориентиров

РА

Подвижность

Чистая культура гл лак мн мл сах

на МПА или а) углеводолитическая актив-ть

ср.Ресселя

МПБ МПБ МПБ МПС

индо сероводород лак желатин

а)протеолитическая

2. Серологические свойства

ТАВК

Ориентировочная реакция

агглютинации на стекле

Антитела Т, А, В. 1/50 1/100 1/120 1/400 1/800 1/1600… КК КС

К – контроль Развернутая (пробирочная) реакция агглютинация

3. Фагодиагностика

а) Типирование бактериофагами

К

Т

А

В

К

В Т

В жидком МПБ

А

На плотном МПА Т, А, В – б/фаги

К – физ.раствор

б) Чувствительность к поливалентному (Т, А, В) на плотной или жидкой среде

Выполняются также, но со смесью б/фагов, без их разделения.

Дополнение к 3 а

Свежевыделенные (идентифицированные) брюшнотифозные бактерии содержат Vi – антигены, к ним обнаружены 24 типа Vi – фага. Соответственно существует 24 типа брюшнотифозных Vi – штаммов. Кроме того, существует Vi – фаг I типа – универсальный для всех брюшнотифозных бактерий.

Методика фаготипирования по Vi - специфичности

1. Чистую культуру отсеять на МПБ. Выращивать 4 дня при + 37^оС.

2. 25 капель 4-х суточной культуры раздельно раскапать на чашки с МПА. Подсушить.

3. К каждой подсушенной капле добавить один из 24-х Vi –бактериофагов, а к 25-й обязательно Vi – фаг универсального типа. Подсушить.

4. Поместить в термостат при + 37^оС на 2 часа, затем на 8-10 часов на холод (+ 4^оС) и опять в термостат на 4 часа при + 37^оС.

5. Учет результатов. Лизис культуры Vi – фагом I типа свидетельствует о её принадлежности к брюшнотифозным микробам.

Лизис одним из 24 типов фага указывает на принадлежность штамма к этому типу моно- Vi – фага.