Методы индикации и идентификации вирусов
Для индикации вирусов в инфекционном материале могут быть использованы следующие методы и критерии:
Микроскопический: обнаружение вирусных включений в препаратах, окрашенных но Муромцеву, Морозову, Романовскому, Пигаревскому, Павловскому, обработанные флюорохромами.
Вирусологическое выделение вирусов в культурах клеток, в развивающихся куриных эмбрионах, на лабораторных животных (состояние, симптомы).
В культуре тканей: реакция гемаглютинации (РГА), реакция гемадсорбции (РГадс), цитопатогенное действие (ЦПД), цветная проба, метод бляшек.
Идентификация вирусов осуществляется с помощью серологических (иммунологических) методов:
реакция торможения гемагглютинации (РТГА),
реакция торможения гемадсорбции (РТГадс),
реакция связывания комплемента (РСК),
реакция нейтрализации цитопатогенного действия (РН),
реакция иммунофлюоресценции прямая и непрямая (РИФ, РНИФ),
реакция преципитации в геле (РП),
реакция нейтрализации цветной пробы.
Приложение 5
Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах
Берут 7-11 дневные куриные эмбрионы, проверяют их жизнеспособность на овоскопе, на нем же у эмбриона простым карандашом обводят воздушную камеру - главный ориентир для последующих манипуляций. Стерильным тампоном с йодом протирают верхнюю (тупую) часть яйца, затем 60° спиртом.
Заражение невскрытого эмбриона
А) В хорион аллантоисную полость: Делают по границе воздушной камеры яйца под углом 45° к его поверхности на глубине 0,3-0,5 см. После введения вирусного материала отверстие заливают расплавленным парафином, и эмбрион в специальных лотках помещают в термостат-инкубатор при t° +40; +42С° и влажности в 60 %.
Б) В амнион и куриный зародыш: Инфицируют толстой тупой иглой для спинномозговых пункций. Манипуляцию выполняют в темной комнате под контролем глаза, осторожно упираясь в эмбрион.
После заражения отверстие парафинируют, а инкубацию эмбриона продолжают.
Заражение вскрытого эмбриона:
Выполняют после снятия изогнутыми ножницами крышки яйца над его воздушной камерой, которую снимают очень осторожно.
А) Заражение в амниотический мешок выполняют после его подтягивания стерильным пинцетом.
Б) Заражение в желточный мешок проводят также.
В) обоих случаях дефект в скорлупе яйца закрывают: либо возвращением снятого тупого конца скорлупы, либо крышечкой от стеклянного бюкса. Их края для придания герметичности заливают парафином. Помещают в термостат-инкубатор.
Контрольные наблюдения ведут по критериям:
подвижность эмбриона, как показатель жизнеспособности;
появление на оболочках эмбриона бляшек с просяное зерно из внутриклеточных вирусных включений;
общепринятая индикация и идентификация вируса (Приложение 4).
Приложение 6
ВОПРОСЫ ТЕСТОВОГО КОНТРОЛЯ
1.. Аденовирусы являются:
а) РНК-вирусами
б) ДНК-вирусами
.2. Рабдовирусы являются:
а) ДНК-вирусами
б) РНК-вирусами
4. Ретровирусы являются:
а) РНК-вирусами
б) ДНК-вирусами
5. Пикорнавирусы являются:
а) РНК-вирусами
б) ДНК-вирусами
6. Гепатовирус В является:
а) РНК-вирусом
б) ДНК-вирусом
6. Гепатовирусы А, С, D являются:
а) РНК-вирусами
б) ДНК-вирусами
7. Герпесвирусы являются:
а) РНК-вирусами
б) ДНК-вирусами
9. Каким из перечисленных признаков должна отвечать культура клеток:
а) способность к быстрой пролиферации
б) являться низкодифференцированными
в) все выше перечисленное
10. Какая из перечисленных стадий не характерна для последовательности репродукции вирусов?
а) адсорбция
б) проникновение генома
в) проникновение (виропексис)
г) депротеинизация, освобождение генома
д) репродукция генома, синтез белка
е) сборка вирионов
ж) высвобождение вирионов из клетки
11. Каким образом можно выявить наличие вируса в зараженной культуре клеток?
а) по цитопатическому эффекту (деструкция)
б) по способности цитоплазматической мембраны инфицированных клеток адсорбировать эритроциты
в) по рН и цвету культуральной среды (цветная проба)
г) по всем критериям
12. Имеет ли смысл выращивать бактерии в культуре ткани? а) да
б) нет
13. Можно ли культивировать вирусы на простом МПА, кровяном MIIA, МПБ? а) да
б) нет
14. Выбрать эффективный способ обезвреживания вирусов:
а) дезинфекция
б) антибиотики
в) стерилизация в автоклаве
д) простое кратковременное кипячение
е) все названные методы и средства
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная:
Лекция по теме.
Методическая разработка по теме.
Мотавкина Н.С., Артемкин В.Д. Атлас по микробиологии и вирусологии. М., 1976. С. 170-227.
Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология. М., 2005.
5. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С-Пб, 2002. С. 239-253.
Дополнительная:
Медицинская микробиология. Под ред. Покровского В.И., Поздеева O.K. М., 1999. С.659-697.
Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования (пол ред. Биргера М.О.). М., 1982. С. 23-30, 98-114, 121-126.
3. Райкис Б.Н., Пожарская В.О., Казиев А.Х. Общая микробиология с вирусологией и иммунологией. М., 2002. С.27-39.
4. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С. М., 2003. С.99-103.
5. Медицинская микробиология. Под ред. Королюка А.М., Сбойчакова В.Б. С-Пб, 2002. С. 7-46.