Реакция нейтрализации бактериальных экзотоксинов

Проводится ин виво (на больных людях, морских свинках, мышах) и ин витро — в реакции флокуляции, на плотной среде. Применяется для идентификации бактериального экзотоксина по его видовой и типовой принадлежности, а также для определения наличия и силы антитоксина в исследуемой сыворотке, титра анатоксина.

Бактериальный экзотоксин в смеси с гомологичной сывороткой (антисывороткой) не разрушается, а нейтрализуется. Нейтрализация наступает в строго определенных пропорциях (необходим избыток антитоксина) и при одномоментном добавлении всего количества антитоксина к токсину. При дробном добавлении токсина, с интервалами смесь остается токсичной (феномен Дениша), поскольку первые порции адсорбируют и изымают антитела, последующие порции остаются токсичными, не нейтрализованными.

Примеры постановки на человеке (в настоящее время не используются):

а) больном скарлатиной – феномен гашения сыпи. См. приложение 9;

б) на здоровом – оценка напряжённости иммунитета к дифтерии (проба Шика), скарлатине (проба Дика).

1. Определение токсигенности бактерий на питательной среде

Центральная часть МПА в чашке либо покрывается по диаметру полоской фильтровальной бумаги шириной 0,5 см, предварительно смоченной антитоксической иммунной сывороткой и высушенной, или стерильным скальпелем вырезается бороздка, изъятый МПА нагревают до плавления, остужают до + 45С°, дополняют ею, заполняют бороздку смесью. Дают застыть и перпендикулярно к ней подсевают бляшками испытуемые штаммы. Токсин бактерий и антитоксин из бороздки диффундируют навстречу друг другу, образуя усики преципитата.

2. Единицы измерения токсина и антитоксина

DLМ (Dosisletalisminima) - минимальная летальная доза, т.е. наименьшая доза токсина, способная убить морскую свинку массой 250 г в течение 4 дней после подкожного или внутрибрюшинного введения;

МЕ - международная единица антитоксина, соответствующая его количеству, содержащемуся в 0,0628 мг стандартного, высушенного антитоксина, хранящегося в качестве эталона в Копенгагенском институте сывороток;

LO- наибольшее количество токсина, которое в смеси с одной единицей антитоксина, при введении подкожно морской свинке массой 250 г не дает никакой видимой реакции;

Lt(Limestod) - наименьшее количество токсина, которое в смеси с одной антитоксической единицей, введенное подкожно морской свинке массой 250 г, приводит к ее гибели в течение 4 дней;

Lf- доза или единица флоккуляции. Это количество токсина, которое в смеси с одной единицей антитоксина даёт самую быструю (начальную) флоккуляцию.

Приложение 8

1. Определение активности анатоксина по известной антитоксической сыворотке (титр 200 ае в 1 мл) в реакции флоккуляции

Ингредиенты	Номера пробирок и их содержимое
	1	2	3	4	5	6	7	8	9
Анатоксин, мл	0,1	0,15	0,2	0,25	0,3	0,35	0,4	0,45	0,5
Физ. раствор, мл	0,9	0,85	0,8	0,75	0,7	0,65	0,6	0,55	0,5
Антитоксин 200 АЕ в 1 мл (1:200)	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
5´ 10´инициальная флоккуляция 15´		+	+ +	+

Инициальная флоккуляция наступила в пробирке № 3

В 1 мл антитоксина содержится 1 АЕ.

В 0,2 мл анатоксина содержится, следовательно, 1 IЕ, титр анатоксина: 1 х 5 = 5IЕ/мл.