Титрование бактериофага

осуществляется по количеству активных корпускул фага, содержащихся в 1 мл исследуемого фильтрата и обеспечивающих лизис тест-культуры.

Титр выражают отрицательным логарифмом, в котором степень указывает на разведение фага (10 ^-4, 10 ^-7).

1 .Титрование бактериофага по Аппельману:

• составить ряд из 8 сухих чистых пробирок;

• пипеткой налить в каждую из пробирок по 9 мл МПБ;

• в первую пробирку влить 1 мл фильтрата бактериофага (разведение 1:10 или 10^-1) после чего 1 мл из нее перенести во вторую (разведение 10^-2);

• процедуру повторять до 8 пробирки включительно. Из нее для уравнивания объемов 1 мл вылить в дез. раствор;

• 8 пробирка - контроль с МПБ без бактериофага;

• в каждую пробирку ряда налить по 0,5 мл известной тест-культуры;

• поставить в термостат при +37 С⁰ на сутки;

• учесть результаты титрования.

2. Постановка реакции нарастания титра фага (РНТФ) осуществляется с известным бактериофагом и его титром. Бактериофаг вносится в анализируемый объем с предполагаемым инфектом. Через сутки контакта из объекта выделяют бактериофаг и определяют его титр. При отсутствии инфекции титр бактериофага падает, при наличии - растет, а РНТФ соответственно отрицательная и положительная.

Приложение 3

Методика фаготипирования бактерий

Испытуемую суточную бульонную культуру в количестве 0,5 мл ввести в пробирку с рас плавленным 0,7% и охлажденным до +45 с МПА, перемешать и равномерно распределить по поверхности 2% МПА в чашке Петри.

После застывания среды с культурой чашку слегка подсушить в термостате, затем разделить по дну на сектора или квадраты), пастеровскими пипетками раскапать различные бактериофаги.

После суточной инкубации следует посмотреть чашку и отметить те квадраты, в которых имеется лизис бактерии.

Фаготип бактерий определяют по фагу, вызвавшему их лизис.

Приложение 4

ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ БАКТЕРИОФАГИ

I. Кишечные бактериофаги.

1. Бактериофаг дизентерийный - активен в отношении дизентерийных бактерий видов Флекснера, Зонне, биовара Ньюкасл. Используют для профилактики и лечения.

2. Бактериофаг брюшнотифозный - это смесь фагов, активных в отношении всех фаговаров возбудителей брюшного тифа. Используют для профилактики заболеваний брюшным тифом в эпидемических очагах.

3. Бактериофаг сальмонеллезный групп АВСДЕ - смесь фагов, активных против сальмонелл паратифа А, В и т.д. (еще 8 видов). Применяют для:

• лечения детей и взрослых больных;

• санации носителей;

• профилактики (по эпидемическим показаниям, например работников мясокомбинатов).

4. Бактериофаг коли-протейный - смесь фагов, активных в отношении наиболее распространенных серологических групп энтеропатогенных кишечных палочек и протея. Применяют для лечения детей, больных кишечными заболеваниями, вызванными энтеропатогенными кишечными палочками, используют при дисбактериозе с преобладанием протея.

Кишечные лечебно-профилактические фаги выпускают нескольких форм: в жидком виде, в виде растворимых таблеток, покрытых кислотоустойчивой оболочкой, в ректальных свечах. Для детей фаг готовят с яблочным пектином (кислотоустойчивое покрытие).