19. Применение методов ифа при оздоровлении растений от патогенов.

Все вегетативно размножающиеся растения поражаются вирусами и они могут передаваться при размножении.

После укуса тлёй вирусы распространяются по всему растению, их будет тысячи и сотни тысяч через 14 дней.

Предложен меристемный метод защиты от вирусов - в точке роста имеется зона свободная от вирусов. Размер 0,1-0,3 мм.

Меристему извлекают под микроскопом. Сажают на пит среду. Подвергают обследованию методом ИФА (Иммуно-ферментный анализ).

Оздоровление растений повышает урожай на 40%, повышает качество продукции.

На примере картофеля.

Подготовка оздоровительного материала.

* Термотерапия

* Химиотерапия

Отбираются растения менее зараженные. Летом-верхушки побегов. Зимой и весной - ростки с клубня.

Применяются 4 варианта оздоровления.

1. Термическая обработка растений и вычленение меристем.

2. Снятие ростков с клубней. Посадка InVitro. Вычленение меристем из пробированных растений.

3. Вычленение меристем из ростков.

4. Термообработка клубней. вычленение меристем из ростков.

Термотерапия

Примененяют t критические для раст., которые понижают концентрацию вирусов и увеличивают свободную безвирусную зону в меристеме до 0,3-0,5 мм.

Это приводит к возможности увеличить размер экспланта.

Режимы

1. InVitro 40-41 С. в верху пробирки, около корня 37 С.(для этого помещ. в воду). Продолжительность 25сут. Освещение 1 - 1,5 кЛюкс.

2. В горшках 37-39гр. освещ-е 4-6 кЛюкс. Влажность возд. 90-95%. 15-25 сут.

3. для клубней 37-38гр. освещ. 1-1,5 кЛюкс . Влажн.возд 80-90%. 10-20сут.

Два вируса у картофеля ВСЛК и ВМВК инактивируются при такой температуре.

Химиотерапия.

Основана на внесении в питательную ср.вещ-в ингибиторов вирусов.

1.Ферменты разл. РНК (РНК-аза)

2. Вирозол- подавляет вирусы.

Эти в-ва добавляют после стерилизации.

Они повыш.выход стерильных меристем в 2 раза.

Иногда применяют антибиотики.

Схема оздоровления.

Этапы: 1- Подготовка клубней, поращ-е и взятие ростков 1-2 см.

2-Вычленение из ростков меристем.

3- Размножение ИнВитро (ИВ). Проверка на вирусы методом ИФА, потомство каждой меристемы отдельно.Зараженные мерист. отбраковывают. Потомство без вирусов размножают.

4. ИнВиво

5. Высадка в грунт теплицы. Получ. тепличные клубни.

В поле оопред. зараженность вирусами м-дом ИФА.

20.Культивирование и слияние протопластов. Соматическая гибридизация.

П, пока не образ клет стенки, могу слив-ся, это процесс стимулир-я полиэтиленгликоля (ПЭГ), фьюзоген, индуктор слияния.

Проводят в р-ре хлористого кальция при pH 10 + импульсы электротока.

Слившиеся П в агар среду с t 45 и выращ-т до раст-й.

СГ. В П можно вводить чужеродное ядро и получать раст-я с измен-ми хоз признаками. В 1987 г. Малхерс слил протопласт томат+картофель.

Получены устойчивые к соли, гербицидам и т.д цибриды ( цибридные растения). Имеются межцарственные цибриды.

21. Создание ассоциаций клеток растений с микроорганизмами.

В природе существует симбиоз бобово-ризобиальный. С экол. точки зрения внесение минеральных азотных удобрений загрязняет окр. ср, а Азот биологический экологически чистый.

Для решения этих проблем БТ предлагает 2 пути:

1. Создать ассоциации азот-фиксирующих бактерий с клетками растений.

2. Генно-инжинерный:

Взять гены у азот- фикс.( их 17, nif-гены) и пришить к растению. Пока не достигнуто положительных результатов.