- •Частная микробиология
- •Противомикробные мероприятия.
- •Стерилизация
- •Дезинфекция
- •Антисептика
- •Асептика
- •Классификация питательных сред
- •Культуральный метод исследования
- •Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •Микроорганизмов к воздействию внешних факторов.
- •Ферменты-токсины
- •Оксидо-редуктазы
- •Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •Метод серийного разведения антибиотик в бульоне
- •Ускоренные методы
- •Методы генетического анализа микроорганизмов
- •Методы изучения нормальной микрофлоры
- •Диагностика брюшного тифа, паратифов а и в сальмонеллезов.
- •Лабораторная диагностика кишечного иерсиниоза
- •IV этап - Учет результатов и выдача окончательного ответа.
- •Оценка результатов
- •Лабораторная диагностика газовой гангрены
- •Бактериологический метод исследования.
- •Биологический метод исследования.
- •Лабораторная диагностика ботулизма
- •Диагностика столбняка
- •Лабораторная диагностика холеры
- •Серологическая диагностика сифилиса
- •Лабораторная диагностика хламидиозов
- •Лабораторная диагностика
- •1. Бактериоскопический метод - выявление хламидий, их морфологических структур и антигенов в пораженных клетках (клиническом материале).
- •Микоплазмы. Микоплазмозы
- •Выделение вирусов и методы их индикации
- •Принципы диагностики вирусных инфекций
- •Лабораторная диагностика вирусных гепатитов
- •Лабораторная диагностика спида
- •Возбудители мадуромикоза
- •Возбудитель пневмоцистоза
- •Возбудитель донованоза
- •Возбудитель язвы бурули
- •Возбудитель мелиоидоза
Методы выделения чистых культур микроорганизмов
-
Метод механического разобщения микроорганизмов.
а) Посев материала на чашки Петри шпателем или петлей (см. практикум).
б) Посев пластинчатыми разводками - делают в пробирках десятикратные разведения материала в расплавленном и остуженном до 45 5о 0С МПА, а затем выливают содержимое пробирок в стерильные чашки Петри, дают агару застыть и инкубируют чашки в термостате.
в) Разобщение на основе подвижности микробов. Материал засевают в каплю конденсационной жидкости скошенного МПА. При этом подвижные микробы как бы «мигрируют» вверх по агаровому скосу и вырастают в виде колоний, расположенных в верхней части агара. При 2-3-кратном пассировании этих колоний в конденсационную жидкость скошенного агара удается получить чистую культуру подвижного микроба (например, протея).
г) Разобщение на основе различий в размерах микроорганизмов. Для этого смесь микроорганизмов фильтруют через микро- и миллипористые фильтры. Чистые культуры получают, как правило, в фильтрах. Этот метод используют для получения чистых культур вирусов и микоплазм.
-
Метод заражения чувствительных лабораторных животных (биологический).
Основан на избирательной чувствительности организма животного к микробам различных видов, что выражается в быстрой скорости размножения определенного вида при попадании его в кровь и внутренние органы, откуда его и выделяют. В то же время другие виды микробов погибают под действием защитных факторов организма. Таким образом выделяют, например, чистую культуру пневмококков из организма белой мыши, палочки туляремии из организма морской свинки.
-
Методы, основанные на избирательной чувствительности
Микроорганизмов к воздействию внешних факторов.
а) Температуры: спорообразующие микробы выживают при нагревании смеси микробов, в то время, как неспорообразующие - гибнут.
б) Кислот: при обработке смесей кислотоустойчивых и неустойчивых к кислотам микробов, последние гибнут, а кислотоустойчивые остаются, как правило, в чистой культуре. Так выделяют возбудителя туберкулеза.
в) Антибиотиков: основан на избирательной чувствительности определенных видов микробов к отдельным антибиотикам. При посеве смеси микробов на среду с добавлением антибиотика, вырастают нечувствительные к нему микробы.
г) Анаэробных условий: дает возможность отделить группу анаэробных микроорганизмов от облигатных аэробов.
СХЕМА ИНДЕНТИФИКАЦИИ МИКРОРГАНИЗМОВ ПО ПРИЗНАКАМ |
(ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИДА) |
(СМ. ФАЙЛ «СХЕМА ИНДЕНТИФИКАЦИИ)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МИКРОБОВ
Этот метод предусматривает изучение ферментативной деградации различных субстратов (углеводородов, аминокислот и белков, мочевины, перекиси водорода и др.) с образованием промежуточных и конечных продуктов.
КАРБОГИДРАЗЫ - ферменты, разлагающие углеводы. Определяя карбогидразы, выявляют т.н. сахаролитические свойства микробов. С этой целью используют следующие среды:
а) Среды Гисса (жидкие и полужидкие с индикаторами). В качестве последних используют реактив Андреде, бромтимоловый синий или ВР. О ферментативной активности бактерий судят по изменению цвета среды и образованию газа.
б) Дифференциально-диагностические среды с лактозой (Эндо, Левина, Плоскирева и др.).
в) Полиуглеводные среды (типа Олькеницкого, Клиглера и др.).
ПРОТЕАЗЫ - ферменты, разлагающие белки.
а) Исследуемая культура может расщеплять белки субстрата с образованием пептона, альбумоз, аминокислот. Этот процесс идет за счет ферментов-протеиназ и пептидаз. Для выявления указанных ферментов исследуемую культуру засевают на ряд сред: свернутая сыворотка, столбик желатина (разжижение в положительных случаях), молочный агар в чашке Петри (в положительных случаях вокруг колоний появляются зоны помутнения).
б) Расщепление аминокислот микробами может идти путем декарбоксилирования, либо путем дезаминирования. В первом случае из той или иной аминокислоты образуются амины, которые выявляются либо методом элекрофореза, либо по подщелачиванию среды. О наличии дезаминаз у микроба судят по образованию аммиака в среде, как результат процесса дезаминирования аминокислоты.
в) Расщепление аминокислоты триптафана за счет действия фермента триптафаназы сопровождается образованием индола. Последний выявляется с помощью бумажки, смоченной щавелевой кислотой и укрепленной под пробкой над питательной средой. В положительных случаях бумажка краснеет.
г) Для выявления ферментов расщепления серосодержащих аминокислот (цистин, цистеин) ставят пробы на H 42 0S, как продукт расщепления этих аминокислот десульфуразами. Наличие H 42 0S выявляется и в среде Олькеницкого.
д) Для выявления уреазы - фермента, расщепляющего мочевину - в питательную среду нейтральной рН добавляют мочевину и индикатор. В положительных случаях среда изменяет цвет за счет сдвига рН в щелочную сторону в связи с образованием аммиака.
ЛИПАЗЫ - ферменты разложения липидов и липоидов. Чаще всего определяют лецитиназу посевом на желточный агар. Лецитиназа расщепляет лецитин на фосфохолин и диглицерид в этих случаях при росте колоний вокруг них появляются опалесцирующие зоны, отражающие лецитиназную активность.