Дифференциальная диагностика бактериального и вирусного менингитов

Лейкоциты < 800 в мкл Лейкоциты > 800 в мкл

лимфоциты > 50% нейтрофилы > 50%

ЛАКТАТ >> 4,2 ммоль/л ЛАКТАТ > 4,2 ммоль/л

Глюкоза ЦСЖ/плазма > 0,4 Глюкоза ЦСЖ/плазма < 0,4

Белок < 1г/л Белок > 1г/л

CРБ в норме СРБ повышен

Высокая вероятность вирусного Высокая вероятность

менингита (более 90% случаев) бактериального менингита (идентификация)

Ликвор – спинномозговая жидкость, образующаяся путём ультрафильтрации плазмы крови и секреции в сосудистых сплетениях желудочков мозга. К функциям ликвора относятся: транспортная (перенос различных веществ), экскреторная (выведение продуктов обмена), амортизационная (путём перераспределения давления предохраняет мозг при ударах), защитная (содержит иммуноглобулины), стабилизационная (не допускает быстрого изменения состава среды при резком изменении состава крови).

Ликвор берут путём антлантоокципитальной или люмбальной пункции. Жидкость, собранная каудальнее поражения, будет иметь большую диагностическую ценность, чем жидкость, собранная краниальнее поражения. Первую каплю необходимо спустить на салфетку, чтобы избежать попадания в пробирку путевой крови, которая значительно может повлиять на результат. Ранее в таких случаях предлагалось использовать формулы для коррекции общего числа клеток, но они оказались невоспроизводимыми и удовлетворительного результата не приносили, поэтому при подозрении на попадание путевой крови рекомендуется переделать пункцию. При этом лучше использовать новую иглу. Если три попытки взятия ликвора оказались неудачными, рекомендуется не делать пункцию в четвёртый раз из-за риска развития осложнений.

Не следует собирать ликвор в стеклянные пробирки, потому что лейкоциты могут прилипнуть к стеклу.

Если ликвор мутный или цвет его изменён, стоит отдельно собирать образец для клинического исследования (в пробирку с К3ЭДТА) и биохимического (в пробирку без антикоагулянта).

Обычно для исследования достаточно 1-1,5 мл. При этом не следует брать больше 4 мл ликвора от собаки, больше 0,5-1 мл от кошки и больше 10-20 капель от котёнка. Слишком быстрый отбор материала может представлять угрозу здоровью животного: за 30 секунд не стоить брать больше 1 мл.

Ликвор должен быть доставлен в лабораторию немедленно и исследован в течение 30-60 минут после получения. Это связано с тем, что в ликворе очень низкое содержание белка, и клетки в такой среде быстро подвергаются дегенерации и лизису (распаду).

В случае невозможности немедленного исследования материала допускается добавление 1 капли сыворотки крови животного к 0,25 мл ликвора и хранение при температуре 4°С до 48 часов. Разведение позволит сохранить морфологию клеток, но значительно повлияет на определение цитоза. При этом отдельную порцию ликвора оставляют для определения общего белка, так как его добавление, соответственно, вызовет повышение данного показателя при измерении.

Приготовление и окраска препаратов ликвора для цитологического исследования

Препараты для окраски азур-эозином можно приготовить из осадка после обычного центрифугирования ликвора, на цитоцентрифуге, цитоспине или с помощью седиментации на аппарате Сайка.

Для получения однослойных препаратов ликвора на цитоцентрифуге рекомендуется:

для стабилизации клеток к 0,5 мл ликвора сразу после пункции добавить 2 капли 22% раствора альбумина;

препараты, полученные на цитоцентрифуге, затем высушить на воздухе, зафиксировать и окрасить.

После центрифугирования на цитоцентрифуге 0,5 мл ликвора с цитозом 3-5 клеток в 1 мкл получается препарат, содержащий не менее 1500-2500 клеток.

Высохшие на воздухе мазки, сделанные из осадка ликвора, необходимо зафиксировать в метиловом спирте или с помощью фиксатора-красителя Мая-Грюнвальда и окрасить азур-эозином по Романовскому или Нохту. Рабочий раствор краски готовится ех tempore на буферной воде с рН 6,8-7,2 (смесь Вейзе), время использования рабочего раствора краски ограничено (60-90 мин), длительность окраски препаратов индивидуальная и отрабатывается предварительно для каждой серии препаратов.

Эти мазки можно зафиксировать и окрасить с помощью комбинированного фиксатора-красителя "Гемокрафикс" (фирма "Эко-Лаб"). Время фиксации и окраски одного мазка фиксатором-красителем "Гемокрафикс" на рельсах составляет 8-10 мин.

Метод окраски. Стекло с нефиксированным мазком положить на рельсы и залить 2 мл фиксатора-красителя "Гемокрафикс" на 3 мин, затем по каплям добавить на фиксатор-краситель такое же количество буферной воды с рН 7,0 и оставить на мазке еще на 5-7 мин. Краску с препарата слить и смыть остатки краски водопроводной водой с обратной стороны стекла.

Утверждение, что препараты, приготовленные из ликвора или его осадка, должны окрашиваться только специально приготовленными соотношениями гематологических красок (окраска по Возной или Розиной), на практике не подтверждается. Для хорошей окраски мазков ликвора, так же как для мазков крови и других цитологических препаратов, используются одни и те же соотношения азура и эозина, буферная вода, хорошая предварительная фиксация и соблюдение времени окраски.

При окраске на автоматах "Гема-Тек" или ПОМК-01 мазки ликвора фиксируются, окрашиваются, промываются и сушатся в течение 10 мин, так же как гематологические и другие цитологические препараты (мазки крови, костного мозга, выпотных жидкостей, спермы и др.).