II етап облік результатів посіву
Характер колоній, ферментація лактози |
Препарат, фарбування за методом Грама |
Серологічна ідентифікація: орієнтовна реакція аглютинації на склі - матеріал з лактозонегативних колоній та суміш шигельозних сироваток
Попередня відповідь |
П ересів лактозонегативних колоній на середовище Олькеницького
Визначення чутливості до антибактеріальних препаратів |
I II етап Ідентифікація чистої культури
Характер ферментації цукрі на середовищі Олькеницького |
Вивчення біохімічних властивостей: посів на середовища Хісса |
Серотипування
|
КІНЦЕВА ВІДПОВІДЬ |
Серодіагностика (ретроспективна діагностика): рра, рнга Сироватка крові план аудиторної самостійної роботи
Завдання 1. Дати відповіді на тестові завдання.
Завдання 2. Засвоїти перелік досліджуваного матеріалу від хворого на шигельоз.
Завдання 3. Засвоїти правила забору матеріалу від хворого на шигельоз для бактеріологічного дослідження та особливості посіву досліджуваного матеріалу.
Завдання 4. Засвоїти мікробіологічний метод діагностики шигельозу, використовуючи демонстрації до практичного заняття (розв‘язати ситуаційну задачу).
Задача. У інфекційну лікарню госпіталізували 7-річного хлопчика з клінічними ознаками гострого шигельозу. Пацієнт скаржився на біль внизу живота, напади блювоти, сильний пронос, тенезми. Випорожнення у хворого були знебарвлені, з грудочками слизу та домішками крові. Пацієнт отримує лікування упродовж 6 діб. Який матеріал від пацієнта лікар направив на мікробіологічне дослідження і як з‘ясувати вид збудника? Проведіть бактеріологічне та серологічне дослідження матеріалу, оформіть протоколи досліджень. Дайте відповідь лікарю щодо збудника захворювання.
Завдання 5. Охарактеризувати препарати для діагностики, профілактики та лікування шигельозу.
Аудиторна самостійна робота та рекомендації по виконанню практичної роботи
Завдання 1. Дати відповіді на тестові завдання.
Тестові завдання див. на с. , № 30-56, основні та № 30-54, додаткові.
Завдання 2. Засвоїти перелік досліджуваного матеріалу від хворого на шигельоз.
Методика.
Основним матеріалом для бактеріологічного дослідження при маніфестній та субклінічній формах шигельозу є фекалії. Досліджують також харчові продукти: молоко, сир, сметану, питну воду (при спалахах шигельозу) та секційний матеріал (шматочки товстої кишки, паренхіматозних органів, мезентеральні лімфатичні вузли). При підозрі на бактеріємію необхідно дослідити кров та сечу.
Завдання 3. Засвоїти правила забору матеріалу від хворого на шигельоз для бактеріологічного дослідження та особливості посіву досліджуваного матеріалу
Методика.
Для отримання позитивного результату бактеріологічного дослідження при заборі та посіві матеріалу необхідно дотримуватись певних правил:
1/ бактеріологічне дослідження матеріалу почати до застосування етіотропного лікування;
2/ посуд для взяття матеріалу ошпарити окропом, не застосовуючи дезінфікуючі розчини, до яких шигели дуже чутливі;
3/ досліджуваний матеріал необхідно терміново (навіть біля ліжка хворого) посіяти одночасно у збагачувальне та на диференціально-діагностичні середовища і негайно доставити до бактеріологічної лабораторії;
4/ при неможливості посіву випорожнень у лікарні та їх швидкої доставки до бактеріологічної лабораторії випорожнення необхідно зберігати у консерванті (30% гліцерину + 70% фосфатного буферу) при t=4-6°С не більше доби;
5/ секційний матеріал дослідити якомога швидше після смерті хворого.
Фекалії (1-2г) взяти скляною паличкою з судна або пелюшок, відбираючи грудочки слизу та гною (але не кров). Випорожнення можна брати з прямої кишки за допомогою стерильної петлі, не чекаючи акту дефекації. Якщо у випорожненнях хворого присутні слизово-гнійні грудочки – їх необхідно першочергово відібрати для бактеріологічного дослідження, промити у фізрозчині та посіяти на живильне середовище, втираючи скляним шпателем. При відсутності слизово-гнійних грудочок фекалії проемульгувати у фізрозчині (1:10). У збагачувальне середовище посіяти неемульговані випорожнення у співвідношенні 1:5.
Завдання 4. Засвоїти бактеріологічний метод діагностики шигельозу, використовуючи демонстрації до практичного заняття (розв‘язати ситуаційну задачу).
Задача. У інфекційну лікарню госпіталізували 7-річного хлопчика з клінічними ознаками гострого шигельозу. Пацієнт скаржився на біль внизу живота, напади блювоти, сильний пронос, тенезми. Випорожнення у хворого були знебарвлені, з грудочками слизу та домішками крові. Пацієнт отримує лікування вже упродовж 6 діб. Який матеріал від пацієнта лікар направив на мікробіологічне дослідження і як з‘ясувати вид збудника? Проведіть бактеріологічне та серологічне дослідження матеріалу, оформіть протоколи досліджень. Дайте відповідь лікарю щодо збудника захворювання.
Методика
Бактеріологічний метод
І етап – посів досліджуваного матеріалу.
Матеріал (фекалії, ректальні мазки, харчові продукти, секційний матеріал, сечу) при захворюванні на шигельоз посіяти одночасно на диференціально-діагностичні середовища Левіна2, Плоскирєва3 для отримання ізольованих колоній та у селенітове середовище для накопичення шигел. Посіви інкубувати у термостаті при t=37°С 18-24 години.
ІІ етап – виділення чистої культури збудника.
Вивчити культуральні властивості мікроорганізмів, які виросли на середовищах Левіна та Плоскирєва: шигели утворюють невеликі (1-1½мм), круглі, опуклі, з рівними краями, безбарвні колонії з блискучою поверхнею, напівпрозорі, м‘якої консистенції. S.sonnei утворює два типи колоній: невеликі гладкі колонії правильної форми та великі плескуваті колонії з нерівними краями. При достатній кількості типових колоній поставити орієнтовну реакцію аглютинацію на склі з полівалентною аглютинуючою сироваткою для ідентифікації шигел. Частину аглютинабельної колонії посіяти на середовище Олькеницького для вивчення певних властивостей та виділення чистої культури. Якщо на середовищах Плоскирєва та Левіна росту мікроорганізмів немає, або відсутні колонії, характерні для шигел, зробити висів матеріалу з селенітового бульйону на середовища Плоскирєва та Левіна. Всі посіви поставити у термостат та інкубувати протягом доби.
ІІІ етап – ідентифікація виділеної культури:
1/ за біохімічними властивостями: зробити облік росту шигел на середовищах Олькеницького та Хісса.
На середовищі Олькеницького шигели ферментують глюкозу без газоутворення, змінюючи колір стовпчикової частини середовища, а лактозу ─ переважно не ферментують (колір скошеної частини не змінюється). Сірководень шигели не утворюють (почорніння середовища не спостерігається).
Тестами для диференціації шигел є: здатність ферментувати глюкозу з газоутворенням, лактозу, маніт та утворювати індол.
За результатами вивчення біохімічних властивостей шигел на середовищах Хісса визначають вид збудника (табл.1).
Таблиця 1