- •Основы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний Учебно-методические указания для студентов Киров - 2002
- •Содержание
- •Введение
- •1. Основы микробиологической диагностики
- •2. Техника сбора патологического материала от больного для бактериологического исследования
- •2.1. Взятие крови
- •2.2. Взятие спинномозговой жидкости
- •2.3. Взятие желчи
- •2.4. Взятие мочи
- •2.5. Взятие отделяемого дыхательных путей
- •2.6. Взятие отделяемого открытых инфицированных ран
- •2.7. Взятие отделяемого глаз
- •2.8. Взятие отделяемого женских половых органов
- •2.9. Взятие материалов при аутопсии
- •2.10. Взятие рвотных масс
- •2.11. Взятие промывных вод желудка
- •2.12. Взятие испражнений
- •2.13. Сопроводительный документ (направление)
- •Методы микробиологической диагностики инфекционных
- •Бактериоскопический (микроскопический) метод.
- •Бактериологический метод.
- •3.3. Биологический метод
- •Серологический метод исследования
- •Аллергологический метод
- •Претесты
- •Правильные ответы
- •Новые термины
- •Опорные вопросы
- •Ситуационные задачи
3.3. Биологический метод
В некоторых случаях для оптилизации диагностики инфекционных заболеваний применяется биологический метод (биопроба), предусматривающий заражения лабораторных животных. При этом перед исследователем могут стоять различные цели:
воспроизведение клинической и патологоанатомической картины заболевания (например, при диагностике столбняка, лептоспироза);
выделение в короткие сроки чистой культуры возбудителя (при диагностике пневмококковой инфекции);
определение вирулентности и патогенности возбудителя (при диагностике туберкулеза);
определение вида и типа токсинов (при диагностике ботулизма)
Для диагностики инфекционных заболеваний используют различных животных. Выбор их определяется видовой восприимчивостью к различным этиологическим агентам. Например, мыши чувствительны к пневмококковой инфекции, сибиреязвенной, столбнячной; морские свинки – к возбудителям туберкулеза, бруцеллеза, туляремии; кролики – к стафилококкам, стрептококкам, ботулизму. Для исследования отбираются только здоровые животные определенного возраста и массы тела.
Перед введением материала, животных фиксируют. Мелких животных держит экспериментатор, для крупных используют специальные приспособления. Место введения обрабатывают спиртом или йодом. Инфицированный материал вводят в зависимости от особенностей патогенеза изучаемого заболевания подкожно, накожно, внутривенно, внутрибрюшинно, интрацеребрально и т.д.
При накожном методе заражения предварительно выстригают шерсть, скарифицируют кожу и втирают материал.
Подкожный метод: кожу животных захватывают в складку, лучше пинцетом, вводят иглу до половины, после инъекции накладывают ватку со спиртом и извлекают иглу.
Внутримышечный метод: материал вводят в мышечную ткань верхней части задней конечности.
Внутрибрюшинный метод: животное держат вниз головой, чтобы не поранить кишечник. Инъекцию делают в нижней части живота, сбоку от средней линии. Брюшную стенку прокалывают толчкообразным движением, шприц под прямым углом.
В ток крови: мышам, крысам – в хвостовую вену и внутрисердечно. Кролику – в ушные вены, которые поверхностно расположены и хорошо видно (лучше в наружную вену). Место введения после инъекции зажимают ватой со спиртом, чтобы не было кровотечения. Морским свинкам при внутрисердечном заражении: вкалывают иглу на высоте «толчка» сердца в межреберный промежуток. Если игла введена правильно, в шприце появится кровь.
Подготовка инструментов и материалов: шприцы, скальпели, иглы стерилизуются кипячением. В шприц набирают материал (немного больше, чем необходимо ввести), поворачивают вертикально вверх, покрывают иглу стерильной ваткой и выталкивают поршнем из шприца пузырьки воздуха. Эту манипуляцию проводят над дезраствором.
При диагностике инфекций, обусловленных действием токсина (ботулинического, сибиреязвенного) материал, предположительно содержащий возбудителя и токсины, помещают в физиологический раствор, затем фильтруют через бумажный фильтр, натертый тальком (он хорошо адсорбирует токсин). Чувствительных животных заражают смывами с фильтров. В некоторых случаях, когда патогенез заболевания обусловлен патогенными свойствами самого возбудителя, животных заражают микробной взвесью.
Зараженных белых мышей маркируют и помещают в специальные стеклянные банки; на них наклеивается бирка с указанием даты заражения и вида микроорганизма, с которым проводилась работа. Точно также подписывают клетки с зараженными кроликами или морскими свинками. За животными наблюдают. В случае гибели их сразу же вскрывают.
Перед вскрытием белых мышей животных предварительно умерщвляют парами эфира. Мышей ненадолго погружают в дезраствор и затем фиксируют в кювете брюшком вверх за лапы. Отмечают наличие или отсутствие внешних патологических изменений. Разрез кожи делается продольно от лобка до нижней челюсти и поперечно – по направлению к лапам. Отмечают изменения в кожной клетчатке и состояние лимфоузлов. Из последних делают мазки-отпечатки. Для осмотра грудной полости удаляют грудину, надрезав ножницами ребра с обеих сторон. После внешнего осмотра отрезают кусочки сердца и помещают в МПБ. Делают посев непосредственно на МПА и мазки-отпечатки из сердца, легких.
Вскрывают брюшную полость, при внешнем осмотре отмечают состояние внутренних органов (величину, цвет, консистенцию, наличие гнойных очагов). Делают посевы печени, селезенки и мазки отпечатки.
Работа проводится стерильными инструментами, после каждого взятия органа пинцет и ножницы опускаются в стакан со спиртом и обжигают.
После вскрытия труп и кювету, где производилось вскрытие, заливают дезраствором на сутки.
Посевы инкубируют в течение 24 часов (при необходимости и более) при 370С. Затем их просматривают, выделяют чистую культуру возбудителя и осуществляют его идентификацию, при помощи бактериологического метода.
Достоинства метода: достоверность полученных результатов, отсутствие необходимости в сложной аппаратуре.
Недостатки: дороговизна, ограниченность применения, опасность инфицирования.