При турбидиметрии

1-источник световой энергии; 2-полосовой фильтр, в некоторых случаях фильтр отсутствует, и измерение проводится в «белом» свете; 3-кювета; 4-фотоприемник; Ф₀ -падающий поток световой энергии; Ф_р -поток световой энергии, рассеянный жидкой дисперсной системой; Ф-поток световой энергии, прошедший раствор; Δλ — полоса пропускания светофильтра

Индикаторные методы

К группе индикаторных методов относятся иммунохимические методы определения концентрации Ig, использующие в качестве меченых агентов различные варианты маркерных веществ, позволяющих количественно регистрировать с высокой точностью образовавшиеся комплексы «АГ-АТ».

Радиоиммунный анализ (РИА). Этот высокочувствительный метод разработан более 40 лет назад и сначала использовался для определения концентрации инсулина и других гормонов. Существует несколько модификаций метода. Одна из них основана на конкурентном связывании меченного радиоактивным изотопом и немеченого АГ с АТ.

Принцип метода заключается в следующем: 1) известное количество АТ смешивают с известным количеством меченого АГ и исследуемой пробой (содержащей неизвестное количество АГ); 2) АГ, содержащийся в пробе, и стандартный меченый АГ связываются с АТ, 3) чем выше содержание немеченого АГ, тем меньше меченого АГ свяжется с АТ.

Концентрацию АГ в исследуемой пробе оценивают по уровню радиоактивности ИК. Тот же подход может быть использован для определения концентрации АТ в пробе. В этом случае известное количество АГ смешивают с известным количеством стандартных меченых АТ и исследуемой пробой (содержащей неизвестное количество АТ). Другая модификация метода основана на иммобилизации АГ или АТ на твердой подложке.

Основные недостатки метода — необходимость дорогостоящего оборудования и реактивов, а также условий для работы с радиоактивными изотопами.

Иммуноферментный анализ (ИФА). В середине 60-х годов для идентификации и локализации АГ в гистохимических препаратах и выявления полос преципитации в иммунодиффузионных и иммуноэлектрофоретических методах в качестве высокочувствительной метки было предложено использовать молекулы ферментов. Являясь по своей природе мощными химическими катализаторами, ферменты способны эффективно осуществлять наработку легко детектируемого продукта, что делает возможным определение ферментной метки в весьма малых концентрациях (до 10-12 М и ниже). В настоящее время иммуноферментные методы анализа являются наиболее широко используемыми в лабораторной практике.

Основные принципы ИФА:

• комплекс АГ-АТ можно выявить, если ввести в состав одного из участников иммунной реакции - ковалентно присоединить - одну или несколько молекул фермента. Причем процесс конъюгирования с ферментом ни на промежуточных (в процессе конъюгирования), ни на финальной стадии (конъюгат антигена или антитела с ферментом) не должен изменять иммунные свойства фермент-меченого участника иммунной реакции;

• проявление ИК осуществляется с использованием способности фермента расщеплять субстрат, который при ферментативной модификации изменяет свой цвет. Способ детекции – спектрофотометрический;

• ИК можно выявлять как в растворе, так и при адсорбции (или ковалентной иммобилизации) на твердом носителе.

Выделяют следующие виды ИФА: твердофазный (иммобилизированные антитела сорбированы на твердом носителе, например, полистерольном планшете), гомогенный (в гомогенном растворе), флуоресцентный (с использованием флуоресцентных меток). В зависимости от стадийности выполнения различают прямой, непрямой ИФА и ИФА с комплементом.

В иммунодиагностике ИФА нашел широкое применение для количественного анализа субклассов Ig. Иммуноферментный анализ, основе которого лежит применение антител, связанных с ферментом, в англоязычной литературе получил название ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay).