Министерство здравоохранения Российской Федерации

Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт (ЦНИКВИ)

УТВЕРЖДАЮ

Председатель секции №14

Ученого Совета Минздрава РФ

по проблеме "Кожные болезни и

болезни, передаваемые половым

путем", директор ЦНИКВИ,

академик РАМН, профессор

Ю.К. Скрипкин

Лабораторная диагностика урогенитального хламидиоза пособие для врачей

Москва, 1999

Краткая аннотация.

Пособие предназначено для сотрудников дерматовенерологической лабораторной службы. Пособие для врачей посвящено методам диагностики урогенитального хламидиоза. Представлены краткие сведения об особенностях строения и жизненного цикла Chlamydia trachomatis, даны характеристики бактериологического, бактериоскопического, иммунологического и молекулярно-биологического методов диагностики урогенитального хламидиоза, проанализированы критерии оценки препаратов для постановки диагноза, область применения, достоинства и недостатки методов. Дана методика сбора материала, подготовки препаратов и окраски.

Авторы: докт. биол. наук проф. Дмитриев Г.А., докт. биол. наук, проф. Киселев В.И., канд. биол. наук Орлова О.Е. (клинико-лабораторный центр «Пастер»), канд. биол. наук Сидорович С.Ю., канд. биол. наук Брагина Е.Е., канд. биол. наук Коликова Т.Г, канд. биол. наук Вахнина Т.Е., докт. мед. наук Кисина В.И., Латыпова М.Ф.

ВВЕДЕНИЕ

Хламидиозы - разнообразные по патогенезу и клиническим проявле­ниям заболевания людей и животных.

В последние десятилетия в патологии человека неуклонно возраста­ет роль антропонозных хламидиозов. Особенно большое значение при­обретают урогенитальные хламидийные инфекции, которые относятся к числу наиболее распространенных заболеваний, передаваемых половым путем. Они поражают мужчин и женщин, все чаще регистрируются у но­ворожденных, оказывают негативное влияние на репродуктивное здоро­вье и часто являются причиной бесплодия.

Проблема хламидиозов имеет не только медицинское, но и социаль­но-экономическое значение. Успешная организация борьбы с этими за­болеваниями возможна лишь при условии их своевременного и полного выявления, а это, учитывая отсутствие патогномонической симптомати­ки, представляет значительные трудности. В этой связи решающее зна­чение в постановке диагноза приобретают методы лабораторной диаг­ностики.

В настоящих методических рекомендациях представлены основные методы лабораторной диагностики урогенитального хламидиоза с уче­том возможностей практической лабораторной службы.

1. Краткая характеристика хламидии

Хламидии - грамотрицательные бактерии с облигатным внутриклеточ­ным паразитизмом, характеризующиеся широким спектром естествен­ных хозяев. Биологическое своеобразие хламидий, выражаемое в энер­гозависимом паразитизме и уникальном цикле развития, определяет са­мостоятельное положение этих микроорганизмов в системе прокариотов.

Хламидии выделены в отдельный порядок Chlamydiales, включаю­щий одно семейство Chlamydiaceae, содержащее один род Chlamydia, состоящий из 4 видов: С/7. trachomatis, Ch. psittaci, Ch. pneumoniae, Ch. pecorum.

Вид Ch. trachomatis объединяет микроорганизмы, вызывающие за­болевания, главным образом у человека (антропонозные хламидиозы). Патогенные для человека Ch.trachomatis разделены на 3 биовара - воз­будители венерической лимфогранулемы, возбудители гиперэндемиче­ской трахомы, возбудители спорадических заболеваний глаз (паратрахома, конъюнктивит с включениями у новорожденных и взрослых) и уроге­нитального хламидиоза (НГУ, цервициты, сальпингиты, проктиты, простатиты, эпидидимиты, пневмонии новорожденных)

Хламидии - облигатные внутриклеточные паразиты, отличающиеся от других микроорганизмов уникальным жизненным циклом, который вклю­чает в себя последовательную смену двух высокоспециализированных форм, адаптированных для внутри- и внеклеточного существования. Вне­клеточные формы - инфекционные метаболически неактивные элемен­тарные тельца (ЭТ) диаметром 0,2 - 0,3 мкм, окружены ригидной мало­проницаемой клеточной стенкой, содержат плотный нуклеоид и обезво­женный протопласт, что обеспечивает резистентность к факторам внеш­ней среды при переносе от клетки к клетке и от хозяина к хозяину. ЭТ устойчивы к действию антимикробных препаратов. Клеточная стенка ЭТ имеет характерное для грам-негативных бактерий строение. Ригидность клеточной стенки обусловлена наличием множественных дисульфидных поперечных связей между богатыми цистеином белками. Эти белки важ­ны для обеспечения стабильности и непроницаемости ЭТ.

Хламидии имеют сложную антигенную структуру. Выделяются три ос­новных антигенных комплекса: родоспецифический, видоспецифический и сероварспецифический. Как и у других грам-негативных бактерий, в клеточной стенке хламидий содержатся термостабильные липополисахариды (ЛПС), представляющие собой один из основных родоспецифических антигенов микроорганизма. Антигенный эпитоп, определяющий родоспецифичность, расположен в углеводном участке и представлен олигосахаридом из 3 мономеров.

Видоспецифические антигены определяют принадлежность штаммов хламидий к соответствующему виду, типоспецифические антигены по­зволяют дифференцировать различные серовары (серотипы) хламидий внутри вида. Антигенные детерминанты видо- и типоспецифических ан­тигенов локализованы в различных участках (доменах) богатого цистеи­ном основного белка наружной мембраны (ОБНМ) и достаточно хорошо изучены для Ch.trachomatis

ЭТ прикрепляются к чувствительным клеткам - мишеням и поглоща­ются ими с формированием внутриклеточной вакуоли. Они реорганизу­ются в метаболически активные неинфекционные внутриклеточные фор­мы - ретикулярные тельца (РТ), проходя стадию промежуточных телец (ПТ) через 6-8 час после инфицирования клетки-хозяина in vitro. Ретику­лярные тельца - вегетативная неинфекционная форма, пластичные сфе­рические клетки с диффузной укладкой ДНК нуклеоида и обводненным протопластом, содержащим рибосомы. Диаметр РТ 0.6-1.5 мкм. РТ де­лятся бинарным образом внутри образующейся эндосомы, которая пред­ставляет собой микроколонию и выявляется при микроскопировании как хламидийное включение. РТ используют субстраты клетки - хозяина для синтеза РНК, белка, протеинов, но не способны синтезировать энергети­ческие субстраты - АТФ, ГТФ, являясь "энергетическими паразитами". РТ чувствительны к действию антибиотиков. Во включениях, образованных Ch.trachomatis, через 30-60 час после инфицирования накапливается гликоген, достигая уровня, визуализирующего включение при окраске йодом, что является критерием при диффенциальной диагностике Ch.trachomatis и Ch. psittaci После периода роста и деления РТ под­вергаются обратной трансформации через стадию ПТ в ЭТ. Цикл разви­тия считается завершенным после выхода из клетки инфекционных ЭТ, что позволяет им вступать в новый жизненный цикл, распространяя ин­фекцию в еще не инфицированных клетках. Полный цикл развития хла­мидий при изучении in vitro на культуре чувствительных клеток длится 48-72 час, в зависимости от штамма хламидий, природы клеток-хозяев и условий среды. Цитоплазматические включения, содержащие хламидий, выявляются при световой, люминесцентной и фазово-контрастной мик­роскопии.

В последнее время появляется все больше данных о возможности существования латентных или персистирующих форм хламидий как при моделировании in vitro, так и в организме больного in vivo. Эти формы могут не отличаться по клинической картине вызываемых заболеваний, но биологически представляют собой результат нарушения жизненного цикла хламидий на различных фазах. Латентные формы хламидий на­блюдаются при ингибировании жизненного цикла на стадии ЭТ в тех слу­чаях, когда нет возможности вступления в новый цикл развития (напри­мер, сохранение ЭТ при отсутствии чувствительных клеток- мишеней). Ингибирование перехода внутриклеточных РТ в ЭТ приводит к персистированию атипичных включений с делящимися РТ хламидий. При моде­лировании персистенции in vitro показано, что персистирование хлами­дий может быть инициировано рядом факторов, таких, как действие ан­тибиотиков, недостаток ингредиентов питательной среды, действие цитокинов, например, интерферона. При этом отмечается изменение чув­ствительности хламидий к антибиотикам. Существование персистирую­щих форм затрудняет диагностику урогенитального хламидиоза и требу­ет комплексного применение методов лабораторной диагностики с уче­том давности заболевания и наличия симптоматики.