Перспективы совершенствования лабораторной диагностики бессимптомных форм гонореи
А.Р.Мавзютов, З.Г.Габидуллин, Э.Д.Ахунов, М.М.Туйгунов, Д.Т.Гашимова, А.К.Булгаков, З.Р.Хисматуллина, В.З.Галимзянов.
Башкирский государственный медицинский университет, г.Уфа; УНЦ УрО РАН, г.Уфа; Республиканская клиническая больница им.Куватова, г.Уфа.
На современном этапе развития медицина сталкивается с рядом серьезных проблем, связанных с качественными и количественными изменениями инфекционной заболеваемости человека. В частности, с резким, и, в известной степени, неконтролируемым ростом случаев инфицирования Neisseria gonorrhoae, которые только по опубликованным данным зарубежных официально признанных научных изданий варьирует в пределах 14-29,2% в определенной зависимости от пола больных (2, 3, 9).
В основе, как полагают, могут лежать значительное снижение иммунореактивности (5), само- и/или неэтиотропное лечение и, конечно же, селекция антибиотикоустойчивых особей популяции возбудителя. Так, показано, что на фоне интенсивной химиотерапии in vivo происходит естественный отбор штаммов, отличающихся исключительно высоким уровнем резистентности. Установлено, что уже через 3 недели лечения эритромицином минимальная ингибирующая концентрация (МИК) для штаммов N.gonorrhoae, выделенных до начала лечения и по окончании курса терапии возрастает с 1 мг/л до 3 мг/л, а азитромицина - с 0,125 до 3 мг/л, т.е. в 24 раза. Это, по ряду публикаций, может носить сочетанный характер (4, 11).
Не исключена вероятность для N.gonorrhoae существования в виде некультивируемых форм возбудителя (1).
Как возможные следствия изложенного рассматривают изменение характера симптоматики и увеличение относительного числа атипичных, бессимптомных и стертых форм заболевания, в особенности среди женщин. Так, инкубационный период гонореи в настоящее время в 86,2% случаев превышает 14 дней, что не согласуется с общепринятыми представлениями о клинике указанного заболевания. Дизурия у больных фиксируется лишь в 33-52,8% случаев лабораторно подтвержденной гонореи. В 10,2% заболевание, по литературным данным, протекает при полном отсутствии соответствующих патогномоничных признаков (6-8, 10).
Исходя из вышеизложенного, целью настоящего исследования явился анализ случаев бессимптомной, латентной гонореи, и, в частности, вопросов касающихся изменения морфологии возбудителя и перспектив совершенствования лабораторной диагностики заболевания.
Материалы и методы исследования.
Проанализировано 10 случаев (5 женщин и 5 мужчин), при которых хроническая гонорея была заподозрена анамнестически у одного из половых партнеров, при абсолютном отсутствии у обследованных патогномоничной симптоматики. Вышеизложенное послужило основанием для дополнительного лабораторного исследования с включением в сферу внимания каждого из них.
Исследуемый материал:
Соскобы слизистой уретры и влагалища, осуществлялись при использовании одноразовых зондов (Швеция).
Световая микроскопия (СМ):
Материал наносили на обезжиренные стекла фирмы "Ниармедик +" (г.Москва), отличающиеся от обычных исключительным качеством шлифовки и стандартной толщиной пластины, что существенно облегчало процесс фокусировки на микроскопе "ЛЮМАМ Р-1". Увеличение 350-500 раз.
Препараты фиксировали "щадящим" химическим методом, обеспечивающим сохранение ультраструктуры соскоба крайне необходимым при микроскопической диагностике хронических форм патологии. Окрашивали стандартным методом Грама и метиленовой синью в модификации кафедры микробиологии БГМУ (пропись не раскрывается ввиду оформления соответствующей патентной документации).
Микрофотосъемку осуществляли на кафедре гистологии БГМУ на микроскопе фирмы "Karl Ceiss Iena" (Германия) при техническом содействии доцента кафедры - Мурзабаева Х.Х.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР):
Верификацию результатов проводили при использовании техники ПЦР.
Забор исследуемого материала.
Осуществлялся в специальные пробирки типа "Eppendorf", содержащие соответствующую буферную смесь.
Режим амплификации.
Денатурация - 93,0оС
"Отжиг" праймеров - 60,0оС
Амплификация - 72,0оС
Количество циклов - 35.
Анализ ДНК.
10 мкл реакционной смеси после амплификации анализировали электрофоретически в 1,5% агарозном геле. В качестве маркёров использовали ДНК фага ?, рестрицированную Bst E2, и положительный контроль ДНК N.gonorrhoae. ДНК окрашивали бромидом этидия и фотографировали при освещении ультрафиолетовыми лучами (494 нм) на трансиллюминаторе.