- •3.3.9. Цитохимические исследования
- •Эритроцитов
- •Фетальный гемоглобин. Метод Ветке.
- •3.4.5. Цитохимические исследования
- •35 Мл буферного раствора.
- •1969, № 1, С. 377—383; Шубич м. Г., Нестеро-
- •Пероксидаза (миелопероксида-
- •5 П/р в. В. Меньшикова 129
- •Кислая а-нафтилацетат-эстераза.
- •Нафтол-as ацетат-эстераза. Метод
- •Нафтол-as d-хлорацетат-эстера-
- •Метод Пигаревского (модифицированный).
- •Метод с бромфеноловым синим (по м. Г. Шу-
- •Окраска судаком 111 (метод Гольдмана).
- •0,9 % Раствора хлорида натрия. 2. 0,1 % вод-
Метод Пигаревского (модифицированный).
П р и н ц и п . Избирательная окраска кат'ион-
ного белка гранулоцитов прочным зеленым при
рН 8,1—8,2.
Р е а к т и в ы . 1. Спиртовой раствор форма-
лина (1 мл формалина и 19 мл абсолютного
этилового спирта). 2. 0,2 М раствор триса: 24,2 г
триса (оксиметил) аминометана растворяют в
1 л дистиллированной воды. 3. 0,1 н. НС1. 4. Ме-
таноловый трис-буфер (25 мл реактива № 2
смешивают с 22,5 мл реактива № 3 и 52,5 мл
метанола). 5. Забуференный спиртовой раствор
прочного зеленого (рН 8,1—8,2): 100 мг прочно-
го зеленого растворяют в 100 мл реактива № 4.
Определяют рН через сутки после приготовле-
ния реактива и выравнивают его добавлением
в раствор порошка сухого триса (при рН ниже
8,1) или слабого раствора НС1 (рН выше 8,2).
Установленная величина рН стабильна при ра-
боте в течение 4 мес. Раствор хранить в стеклян-
ной посуде с притертой пробкой (можно при
комнатной температуре). 6. 0,25 % водный раст-
вор азура А: 250 мг азура А растворяют в 100 мл
дистиллированной воды. Краситель стойкий.
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1.
рН-Метр. 2. Весы.
Х о д о п р е д е л е н и я . Высушенные на
воздухе мазки фиксируют в спиртовом растворе
формалина 10—15 с. Во избежание фоновой
окраски можно использовать свежеприготовлен-
ные нефиксированные мазки (не позже чем через
48 ч после приготовления, препараты более дли-
тельного срока необходимо фиксировать). Маз-
ки окрашивают забуференным спиртовым раст-
вором прочного зеленого (реактива № 5) в те-
чение 20 мин. Быстро ополаскивают дистиллиро-
ванной водой. Окрашивают водным раствором
азура А в течение 15—20 с. Смывают мазки
дистиллированной водой и высушивают. При
микроскопии с желтым или оранжевым свето-
фильтром катионный белок в цитоплазме клеток
имеет вид ярко-зеленых гранул.
В о с п р о и з в о д и м о с т ь м е т о д а : ко-
эффициент вариации V = 2,9 % для нормальных
134
величин и 5,2 % для патологических (не превы-
шает допустимой величины).
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У взрослых
в возрасте 20—30 лет СЦК равен для мужчин
1,58 + 0,01 и для женщин 1,58 + 0,03. Более вы-
сокие значения получены у детей в возрасте
1 — 12 мес (1,89,03) и 1—3 лет (1,96 + 0,03).
Метод с бромфеноловым синим (по м. Г. Шу-
бину). П р и н ц и п . Избирательная окраска ка-
тионного белка бромфеноловым синим.
Р е а к т и в ы . 1.5% раствор сульфосалици-
ловой кислоты (5 г сульфосалициловой кислоты
растворяют в 95 мл дистиллированной воды).
2. 0,05 М раствор буры рН 9,55 (19,1 г буры
растворяют в 1 л дистиллированной воды).
3. 0,1 М раствор однозамещенного фосфата
калия (13,6 г КН2РО4 растворяют в 1 л дистил-
лированной воды). 4. 0,05 М боратный буфер
рН 8,2 (6,13 мл реактива № 2 добавляют 3,87 мл
реактива № 3, а затем доводят реактивом 3 до
рН 8,2). 5. 0,1 % раствор бромфенолового си-
него в 0,05 М боратном буфере (100 мг сухого
бромфенолового синего растворяют в 100 мл
реактива № 4). 6. 1 % водный раствор сафра-
нина или 0,05 % раствор основного фуксина.
Последний готовят перед употреблением: рас-
творяют 50 мг основного фуксина в 100 мл кипя-
щей дистиллированной воды.
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1.
рН-Метр. 2. Весы. 3. Газовая или электрическая
плитка.
Ход о п р е д е л е н и я . Фиксируют мазки
в 5 % растворе сульфосалициловой кислоты
в течение 60—90 с. Тщательно промывают дис-
тиллированной водой и высушивают. Окраши-
вают 0,1 % раствором бромфенолового синего
в боратном буфере (реактив № 5) в течение
1—2 мин. Промывают в трех сменах 0,05 М бо-
ратного буфера (реактив № 4) по 1—3 мин.
Высушивают и докрашивают 1 % раствором
сафранина в течение 30—60с или 0,05 % раство-
ром основного фуксина в течение 1—2 с. Промы-
вают проточной водопроводной водой и высу-
шивают. Катионный белок выявляется в цито-
плазме клеток в виде синих гранул.
В о с п р о и з в о д и м о с т ь м е т о д а . От-
носительная стандартная ошибка для группы
здоровых составила 5,2 %.
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоровых
в нейтрофилах обнаружено 123+1,5 ед. или
СЦК 1,23 + 0,015, при этом не отмечено разли-
чий у здоровых обоего пола. Протеинположи-
тельные нейтрофилы составляют у мужчин
83+1,4 %, у женщин 86 + 0,6 %.
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение
катионного белка в нейтрофилах характерно
для острого воспалительного процесса; наблю-
дается в разгаре различных инфекционных за-
болеваний бактериальной и вирусной этиоло-
гии. Период выздоровления сопровождается
нормализацией показателя. Изменения содер-
жания лизосомального катионного белка кор-
релируют со степенью тяжести заболевания.
Л и т е р а т у р а . Мазинг Ю. А., Старосель-
ская И. Я. Лаб. дело, 1981, № 10, стр. 582—
584; Нагоев Б. С. Катионный белок лейкоцитов
и его значение: Методические указания.— Наль-
чик, 1982.— 67 с.; Пигаревский В. Е., Ма-
зинг Ю. А. Лаб. дело, 1981, № 10, с. 579—582;
Шубин М. Г. Цитология, 1974, № 10, с. 1321 —
1322.
ЛИПИДЫ локализуются в цитоплазме кле-
ток главным образом в мембранах органелл и
обнаруживаются преимущественно в нейтро-
фильных гранулоцитах. Играют важную роль,
в проницаемости мембран. Цитохимическое ис-
следование основано на применении красящих
веществ, растворяющихся в жирах (судан I I I ,
судан IV, черный судан и др.). Для выявления
нейтрального жира пользуются судаком I I I , ок-
рашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды
выявляются лучше Суданом черным (черное ок-
рашивание).