- •Е.Г. Доркина
- •Лекция №2 Структура бактериальной клетки.
- •Лекция №3 Особенности строения спирохет, актиномицетов, риккетсий, хламидий¸ микоплазм, грибов и простейших. Методы исследования и медицинское значение.
- •Лекция № 4 Особенности строения и жизнедеятельности вирусов и бактериофагов. Препараты бактериофагов для лечения и профилактики инфекционных заболеваний.
- •Строение вириона.
- •Взаимодействие вируса с клеткой.
- •Микроскопические методы обнаружения вирусов.
- •Морфология бактериофагов и особенности их взаимодействия с бактериальной клеткой.
- •Лечебно-профилактические препараты бактериофагов.
- •Лекция № 5 Физиология бактерий. Типы питания, дыхания. Рост и размножение бактерий. Ферменты бактерий. Методы изучения ферментативной активности бактерий.
- •Типы и механизмы питания бактерий.
- •Дыхание бактерий.
- •Размножение и рост бактерий.
- •Ферменты бактерий.
- •Методы изучения ферментативной активности бактерий.
- •Лекция № 6 Культивирование бактерий и вирусов.
- •Культивирование бактерий.
- •Методы создания бескислородных условий для культивирование анаэробов.
- •Культивирование вирусов.
- •Особенности культивирования риккетсий и хламидий.
- •Лекция № 7 Микрофлора почвы, воды, воздуха. Санитарно-показательные микроорганизмы. Методы санитарно-бактериологических исследований почвы, воды, воздуха.
- •Микрофлора почвы.
- •Микрофлора воды.
- •Микрофлора воздуха.
- •Нормативы.
- •Лекция №8 Нормальная микрофлора организма человека. Дисбактериозы. Пробиотики.
- •Микрофлора кожи.
- •Микрофлора верхних дыхательных путей.
- •Микрофлора пищеварительного тракта.
- •Значение микрофлоры человека.
- •Дисбактериоз (дисбиоз).
- •Препараты для лечения дисбактериозов.
- •Лекция №9
- •Методы контроля микробной чистоты растительного сырья.
- •Микрофлора готовых лекарственных форм.
- •Методы определения микробной загрязненности готовых лекарственных препаратов.
- •Оценка микробной загрязненности нестерильных препаратов.
- •Лекция № 10 Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы. Стерилизация. Методы и аппаратура. Контроль качества стерилизации. Понятие о дезинфекции, асептике и антисептике.
- •Действие физических факторов на микроорганизмы.
- •Действие химических факторов на микроорганизмы.
- •Действие биологических факторов на микроорганизмы.
- •Стерилизация.
- •Стерилизация лучистой энергией и ультразвуком.
- •Стерилизация фильтрованием.
- •Химическая стерилизация.
- •Контроль стерилизации.
- •Дезинфекция.
- •Антисептика и асептика.
- •Консервация.
- •Лекция № 11 Химиотерапия. Химиотерапевтические препараты и антибиотики. Классификация и способы получения антибиотиков. Побочное действие антибиотиков и меры профилактики.
- •Свойства химиопрепаратов.
- •Антибиотики.
- •Классификация антибиотиков.
- •Побочное действие антибиотиков и меры профилактики.
- •Лекция № 12 Лекарственная устойчивость. Определение активности антибиотиков и чувствительности бактериальных культур к антибиотикам. Механизмы развития устойчивости микробов к антибиотикам.
- •Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.
- •Биологическая активность антибиотиков.
- •Методы определения активности антибиотиков.
- •Лекция № 13 Учение об инфекции. Понятие инфекция, инфекционный процесс, инфекционная болезнь.
- •Свойства возбудителей.
- •Свойства макроорганизма, влияющие на течение инфекционного процесса.
- •Влияние факторов окружающей среды на течение инфекционного процесса.
- •Формы инфекционного процесса.
- •Элементы эпидемиологии.
- •Лекция№14 Понятие об иммунитете. Виды иммунитета. Неспецифические факторы резистентности. Антигены, антитела. Понятие об иммунитете.
- •Виды иммунитета.
- •Факторы неспецифической защиты организма.
- •Антигены.
- •Антигенная структура бактериальной клетки.
- •Антитела.
- •Виды антител.
- •Лекция№15 Иммунная система организма человека. Антителообразование. Аллергия.
- •Лекция № 16 Реакции иммунитета.
- •Реакция агглютинации.
- •Реакция преципитации.
- •Реакция гемолиза.
- •Реакция связывания комплемента.
- •Лекция № 17 Иммунобиологические медицинские препараты.
- •Вакцины.
- •Сыворотки и иммуноглобулины.
- •Возбудители эшерихиозов.
- •Лекция №2 Возбудители бактериальной дизентерии и холеры. Способы заражения, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, лечение и профилактика.
- •Характеристика возбудителей дизентерии
- •Возбудители холеры.
- •Характеристика возбудителей холеры.
- •Характеристика возбудителей
- •Лекция №4
- •Возбудители ботулизма.
- •Лекция №5 характеристика возбудителей стафилококковых инфекций.
- •Характеристика возбудителей.
- •Лекция №6
- •Возбудители газовой гангрены.
- •Возбудитель сибирской язвы.
- •Лекция №7 Возбудители сифилиса, гонореи, хламидиоза.
- •Возбудитель гонореи.
- •Возбудитель урогенетального хламидиоза.
- •Лекция №8 Возбудители менингита, туберкулеза и дифтерии. Возбудитель менингита.
- •Возбудители туберкулеза.
- •Возбудитель дифтерии.
- •Лекция №9 возбудители бактериальных респираторных инфекций: скарлатины, менингококковой инфекции, коклюша.
- •Возбудитель коклюша.
- •Лекция №10
- •Возбудитель туляремии.
- •Лекция №11 Возбудители эпидемического сыпного тифа и Ку-лихорадки
- •Лекция №12
- •Возбудитель вирусного гепатита е.
- •Возбудители полиомиелита.
- •Лекция №13 Возбудители спиДа, гепатитов в, с и д, бешенства. Возбудитель спиДа
- •Возбудитель гепатита в.
- •Возбудитель гепатита д (гепатит дельта).
- •Возбудитель гепатита с.
- •Возбудитель бешенства.
- •Лекция №14 возбудители острых респираторных вирусных инфекций: гриппа и кори.
- •Возбудители гриппа.
- •Возбудитель кори.
- •Характеристика возбудителей Таксономия
- •2) Тела;
- •3) Эпидермофитию стоп;
- •4) Ногтей.
- •Лекция №16 малярия, токсоплазмоз, амебиаз. Характеристика возбудителей. Способы заражения, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, лечение и профилактика заболеваний.
- •Характеристика возбудителей.
- •Возбудители амебиаза
- •Характеристика возбудителя.
- •Возбудитель токсоплазмоза
Методы определения микробной загрязненности готовых лекарственных препаратов.
Имеются определенные требования ВОЗ и фармакопеипо микробной загрязненности различных лекарственных средств.
Лекарственные средства для парентерального введения в виде инъекций, глазные капли, мази, пленки, средства для новорожденных, должны бытьстерильными.
Стерильные инъекционные растворы могут обладать пирогенными свойствами, т.е. вызывать повышение температуры тела. Это обусловлено наличием в них убитых бактерий или продуктов их распада. Пирогены – это сложные по своей структуре вещества, которые содержат протеины, липиды и полисахариды, и вызывают в макроорганизме комплекс изменений, характеризующихся повышением температуры тела, вазомоторными расстройствами, в тяжелых случаях – шоковым состоянием. Пирогенами являются бактериальные эндотоксины.Все растворы, предназначенные для инъекций не должны содержать пирогенов.Ноосвободитьот нихготовый продукт не удается, т.к. пирогены проходят через бактериальные фильтры и устойчивы к нагреванию.
Для этого необходимо соблюдать специальные требованияпри изготовлениистерильных лекарственных средств:
1) дистиллированная вода уже до стерилизации не должна содержать кишечной палочки;
2) общее количество микробов в воде не должно превышать 10 – 15 клеток на 1 мл;
3) препараты готовят в асептических условиях, пользуются стерильной посудой, соблюдают стерильность при их упаковке, после приготовления стерилизуют.
Проверку стерильностипроизводят в боксах со строгим соблюдением правил асептики. Делаютпосев на тиогликолевую среду(для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов) ипосев на среду Сабуро(для выявления грибов, г.о. рода Кандида). Если нет роста микробов на средах, то препарат является стерильным.
Если лекарственное средствообладаетантимикробнымдействием, тостерильностьопределяют путеммембранной фильтрации. После фильтрации исследуемого препарата фильтр делят на части и вносят для роста задержанных микроорганизмов в жидкие питательные среды. При отсутствии роста препарат считается стерильным.
Лекарственные средства, не требующие стерилизации, содержат микроорганизмы. Но их содержание не должно превышать предельно допустимых значений для различных лекарственных форм.
Оценка микробной загрязненности нестерильных препаратов.
Определяют:
1) количество жизнеспособных бактерий в 1 г или 1 мл препарата;
2) количество жизнеспособных грибов в 1 г или 1 мл препарата;
3) кишечную палочку и представителей семейства энтеробактерий, синегнойную палочку и золотистого стафилококка, которые не должны присутствовать в нестерильных лекарственных средствах.
Методы определение микробной загрязненности лекарственных средств, не обладающих антимикробным действием.
От каждой серии препарата отбирают 10 проб из 10 разных упаковок, в целом не меньше 50 г или мл. На анализ берут 30 г т(мл), разделив на 3 части по 10 г (мл).
Определение общего количества бактерий и грибов. 10 г (мл) разводят в 10 раз 0,1 М раствором фосфатного буфера, доводя конечный объем до 100 мл. Делают посев по 1 мл разведенного препаратадвухслойным агаровым методомв 2 чашки Петри с МПА, содержащим 0,1% глюкозы для определения бактерий и по 1 мл в 2 чашки Петри со средой Сабуро с антибиотиками для грибов. Чашки с МПА для определения бактерий инкубируют при 37С 5 дней, а со средой Сабуро для определения грибов при 24С 5 дней. Затем подсчитывают число колоний, находят среднее арифметическое для 2-х чашек и высчитывают количество бактерий и грибов в 1г (мл) отобранного на анализ образца.
Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae. Следующие 10 г(мл) образца вносят в 90 мл среды обогащения, перемешивают и инкубируют при 37С 24 – 48 час. При наличии роста делают пересев на среду Эндо и висмут-сульфитный агар. Инкубируют при 37С 24 – 48 час. На среде Эндо бактерии семействаEnterobacteriaceaeобразуют малиновые колонии с металлическим блеском. На висмут-сульфитном агаре – черные или зеленовато-бурые, светло-зеленые или коричневые колонии. Колонии исследуют микроскопически и выявляют грам «-» неспоровые палочки. Подозрительные колонии пересевают на скошенный в пробирках МПА с 0,1% глюкозой и инкубируют при 37С 24 час. Из каждой пробирки с чистой культурой делают пересевы на :
1) среду с глюкозой и феноловым красным ( энтеробактерии ферментируют глюкозу и среда становится желтой);
2) среду с нитратом калия (энтеробактерии восстанавливают нитраты в нитриты и не имеют фермента цитохромоксидазы).
Если в образце обнаружены грам «-» неспоровые палочки, которые дают отрицательную реакцию на цитохромоксидазу, ферментируют глюкозу и восстанавливают нитраты в нитриты, то делают вывод, что исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae.
Определение бактерий S. aureus и P. aeruginosa. Следующие 10 г(мл) образца вносят в 90 мл накопительной среды и инкубируют при 37С 24 – 48 час. При наличии роста делают пересев петлей на чашки Петри с солевым агаром с маннитом для стафилококка и на чашки Петри со средой для идентификации синегной палочки. Инкубируют при 37С 24 – 48 час. Стафилококк на солевом агаре образует желтые колонии, окруженные желтыми зонами. При микроскопии обнаруживаются грам"+" кокки. С чистой культурой стафилококка ставят реакцию плазмокоагуляции. Для этого в пробирку с 0,5 мл разведенной (1:4) плазмой крови человека или кролика вводят петлю агаровой культуры стафилококка и инкубируют 1-24 час при 37С. Стафилококк коагулирует плазму.
P.aeruginosaна диагностической среде образует зеленые флюоресцирующие колонии. Их идентифицируют микроскопически и биохимически. Под микроскопом бнаруживают грам «-» палочки. Реакция на цитохромоксидазу положительна (бумажка с индикатором синеет).
Нормативы. В нестерильных лекарственных средствах для приема внутрь в 1 г (мл) должно быть не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов, а также должны отсутствовать патогенные и условно-патогенные микроорганизмы - представители семейства энтеробактерий, синегнойная палочка и золотистый стафилококк.
Лекарственные средства для местного применения (полость уха, носа, интравагинально) не должны содержать более 100 (суммарно) микробных клеток в 1 г (мл).
В таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тыс. микробных клеток на 1 таблетку.
Бактериологический контроль соблюдения санитарно-гигиенического режимаизготовления лекарственных препаратов на предприятиях и в аптеках осуществляется исследованиями смывов с рук персонала, посуды, поверхности столов, оборудования. Смывы высевают на различные питательные среды и определяют общую микробную обсемененность, наличие кишечной палочки, золотистого стафилококка, патогенных энтеробактерий, грибов рода Сandida, энтеровирусов.