4.3. Фиксация и консервация гельминтов

Обычным, наиболее широко употребляемым фиксатором для тотального изучения любых паразитов является 70°-й спирт. Перед фиксацией его можно подогреть до 40—50 градусов; теплый фиксатор быстро убивает паразитов и фиксирует их в расправленном состоянии. Количество фиксатора должно в 8-10 раз превышать объем фиксируемого материала. Можно пользоваться 4%-м формалином, однако для тотального изучения паразитов он непригоден. Для анатомо-гистологического изучения отдельных паразитов и кусочков ткани, пораженной ими, формалин, наоборот, более применим, чем 70°-й спирт.

Гельминты перед фиксацией должны быть умерщвлены. Сосальщиков и круглых червей с толстой кутикулой (аскаридат, спирурат и др.) помещают в воду и фиксируют сразу после их гибели (момент прекращения движений), так как в это время они хорошо расправляются. Мертвых червей долго держать в воде нельзя; они начинают разлагаться и материал оказывается непригодным для систематического изучения. Сосальщиков, извлеченных из печени, почек и кровеносных сосудов, а также круглых червей со сравнительно тонкой кутикулой (Filariata, Capillariidae и др.) в воду помещать нельзя, так как паразиты могут лопнуть от долгого пребывания в воде из-за разности осмотического давления; определение таких поврежденных червей практически невозможно.

У ленточных червей и скребней добиваются фиксации с вытянутыми хоботками, используя подогретые фиксаторы или фиксацию под стеклом. С этой целью червей помещают на предметное стекло и накрывают, в зависимости от величины объекта, покровным или предметным стеклом; затем, слегка надавливая на верхнее стекло, пипеткой подпускают под него 70°-й спирт или другую фиксирующую жидкость. Черви между стеклами должны находиться в фиксаторе не менее 1-2 час, поэтому нужно следить, чтобы фиксатор не испарился, и по мере надобности добавлять его (лучше всего помещать их в закрытые чашки Петри). Однако при таком способе фиксации нередко происходят изменения в форме тела и во взаиморасположении отдельных органов червей. Поэтому одновременно с фиксацией под стеклом часть того же материала для контроля следует фиксировать без стекла. Для этого оставляют цестод в воде (крупные стробилы) или в физиологическом растворе (нежные формы). Однако при этом необходимо часто проверять состояние стробил, так как сколекс может начать мацерировать и терять крючья до гибели всей стробилы, что затрудняет определение.

Мелких сосальщиков перед фиксацией без стекла рекомендуют помещать в пробирку с водой и сильно встряхивать в течение 5—10 мин. (метод Лоосса); при этом мышцы червей расслабляются и сосальщики фиксируются хорошо расправленными.

Скребней, как правило, всегда фиксируют под предметным стеклом, которым осторожно, с возрастающей силой надавливают на червя до полного выворачивания его хоботка. После того как хоботок червя удается вывернуть совсем, на верхнее стекло ставят небольшой груз (специально изготовленный или гирю весом 10—20 г) или стекла, между которыми находится паразит, перевязывают ниткой и под стекло пипеткой вводят фиксатор. В таком виде скребней нужно держать не менее 2-3 часов, поместив их предварительно в закрытую чашку Петри.

Для круглых червей лучшим фиксатором является жидкость Барбагалло (для получения растворяют 9 г поваренной соли в 1 л дистиллированной воды и к раствору прибавляют 30 см³ 40%-го раствора формальдегида). Этот фиксатор, как и спирт, удобен тем, что в нем объект сохраняют до лабораторной обработки.

При сборе материала из определенного органа сразу же под чашку Петри, куда помещают паразитов, подкладывают временную этикетку, написанную простым карандашом на обыкновенной белой бумаге. На временной этикетке должны быть указаны номер вскрытия животного, локализация паразита (орган, ткань, сосуд и т. д.) и дата вскрытия. Эта этикетка остается с паразитами в течение всего времени их промывки и фиксации и заменяется более подробной постоянной этикеткой только при перенесении материала для хранения в пробирки. Постоянную этикетку пишут на кальке или плотной белой бумаге несмываемой в спирте тушью или простым мягким карандашом. Размеры этикетки должны быть немного меньше площади сторон пробирок, в которые помещают паразитов. На этикетке параллельно длинной стороне указывают: в 1-й строке — вид животного и номер; во 2-й строке — место локализации паразита (орган, ткань и т. д.); в 3-й строке — название паразита (которое должно точно соответствовать тому, как оно записано в дневнике) и, в скобках, название фиксатора (если паразит зафиксирован сложным фиксатором для целей гистологического исследования); в 4-й строке — район исследования и место добычи птицы; в 5-й строке — дату вскрытия и фамилию сборщика.

Чтобы перечисленные сведения уместились на сравнительно небольшой площади этикетки, писать их следует мелко и разборчиво, пользуясь тонким чертежным пером иди остро отточенным карандашом. Некоторые слова в этикетке можно писать сокращенно, все сокращения, однако, должны быть понятными для всех. Допускается размещение надписей на обеих сторонах этикетки. Этикетку свертывают в трубочку и вкладывают в пробирку так, чтобы лицевая сторона плотно прилегала к стенкам пробирки и ее можно было бы прочесть не вынимая. Такое положение этикетки при лабораторной обработке облегчает разбор материала по группам паразитов и видам хозяев. Этикетку лучше вкладывать в еще пустую пробирку. Паразитов из каждого органа размещают в отдельной пробирке, заливая ее фиксатором доверху.

Пробирки упаковывают в материальные банки, куда их устанавливают обязательно в вертикальном положении в два или три ряда (в зависимости от их высоты и величины материальной банки). На дно банки и между рядами пробирок прокладывают слои гигроскопической ваты, которой плотно набивают также верхнюю незаполненную часть банки. В такой упаковке пробирки могут перевозиться на большие расстояния без риска быть разбитыми. Дальнейшая обработка материала проводится уже в лабораторных условиях.