Определения групп крови моноклональными антителами

Цоликлон анти-А и анти-В наносят на планшетку или пластинку по одной капле (0,1 мл) под соответствующими надписями «анти-А» или «анти-В». Рядом наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле (0,01 мл). После их смешивания наблюдают 2,5 минуты.

Результаты:

1.Агглютинации нет (-) ни с Цоликлоном анти-А, ни с Цоликлоном анти-В. Следовательно, эритроциты не содержат антигенов А и В и кровь принадлежит к группе 0α_β(1).

2.Агглютинация (+) наблюдается только с Цоликлоном анти-А. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген А и кровь принадлежит к группе А_β (II).

3.Агглютинация (+) наблюдается только с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген В и кровь принадлежит к группе Вα (III).

4.Агглютинация (+) наблюдается как с Цоликлоном анти-А, так и с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат оба антигена (А и В) и кровь принадлежит к группе АВο (IV).

В случае установления АВο (IV) группы крови необходимо выполнение контрольного исследования для исключения неспецифической агглютинации: одну каплю (0,1 мл) изотонического раствора хлорида натрия смешать с маленькой каплей (0,01 мл) исследуемой крови. Реакция агглютинации должна отсутствовать.

Определения групп крови стандартными сывороткам

Набор:

набор стандартных сывороток, перчатки, маска, защитные очки, планшет подписанный карандашом (Фамилия, О-А-В, I-II), стеклянные палочки, кровь пациента, физ. раствор, часы.

Техника выполнения:

прежде чем приступить к исследованию, необходимо осмотреть стандартные изогемагглютинирующие сыворотки и убедиться, что они правильно расположены в штативе, прозрачны, не содержат осадка и срок их годности, указанный на этикетке, не истек. Ис­следование проводят при помощи двух серий стандартных сыворо­ток группы — Oαβ (I), A_β (II) и Вα (III). На левой стороне фар­форовой пластинки или тарелки подписывают Oαβ, в середине A_β, справа — Вα. По верхнему краю пластинки пишут фамилию и ини­циалы лица, у которого определяют группу крови. Под соответст­вующими обозначениями наносят по одной большой капле (около 0,05 мл) стандартных сывороток двух серий в соответствующем порядке: слева — Oα_β (I), в середине — A_β (II), справа — Вα (III). Таким образом, на пластинке получается 6 капель, которые образу­ют 2 ряда по 3 капле в каждом. Кожу пальца прокалывают стериль­ной иглой, затем исследуемую кровь по одной маленькой капле (около 0,005 мл) при помощи пипетки или стеклянной палочки переносят на пластинку (рядом с сывороткой), после чего каждую каплю крови и сыворотки перемешивают отдельной стеклянной палочкой. Соотношение объема исследуемой крови и сыворотки должно быть 1:10. Пластинку осторожно покачивают в течение 5 минут, затем учитывают результат. По мере наступления агглюти­нации, но не ранее чем через 3 минуты, в капли добавляют (при необходимости) по одной капле изотонического раствора хлорида натрия (около 0,05 мл комнатной температуры) (рис. 34).

Рис. 34. Определение группы крови стандартными сыворотками.

При оценке результатов определения группы крови могут быть получены следующие варианты:

а) стандартные сыворотки всех трех групп не вызывают агглютинации эритроцитов. Это указывает на то, что эритроциты не содержат агглютиногенов А и В, т. е. исследуемый образец крови относится к группе Оα_β (I);

б) стандартные сыворотки группы Oα_β (I) и Вα (III) агглютини­ровали эритроциты, а с сывороткой A_β (II) агглютинации не насту­пило. Исследуемая кровь содержит агглютиноген А, т. е. принад­лежит к группе А_β (II);

в) стандартные сыворотки Oα_β (I) и A_β (II) показали положи­тельную реакцию, а сыворотка Вα (III) — отрицательную. Эрит­роциты испытуемого образца крови содержат агглютиноген В, т. е. относятся к группе Вα (III);

г) стандартные сыворотки всех трех групп агглютинировали эритроциты; исследуемая кровь содержит агглютиногены А и В. Ее относят к группе АВο (IV). Однако для окончательного заключения о принадлежности к IV группе крови необходимо провести контрольное исследование на специфичность реакции со стандартной сывороткой АВο (IV). Лишь отсутствие агглютинации исследуемой крови с сыворот­кой группы АВο (IV) позволяет отнести кровь к четвертой группе.