- •Раздел I общая микробиология: морфология, физиология и генетика микроорганизмов
- •Тема 1 ветеринарно-бактериологическая лаборатория. Техника микроскопирования. Основные формы бактерий. Определение размеров микроорганизмов
- •Тема 2 бактериологические красители. Приготовление бактериальных препаратов для световой микроскопии. Простые методы окраски бактерий
- •Задание для самостоятельной работы
- •Контрольные вопросы
- •Тема 3 сложные методы окраски бактерий: окраска по методам грама и циля-нильсена
- •Тема 4 окраска бактерий с целью выявления спор, капсул, цитоплазматических включений. Методы обнаружения жгутиков. Метод прямого флуорохромирования бактерий
- •Тема 5 микроскопические грибы
- •Тема 6 стерилизация
- •Тема 7 питательные среды и культивирование микроорганизмов
- •Тема 8 техника посева, методы выделения чистых культур и культуральные свойства микроорганизмов. Определение количества бактерий
- •Контрольные вопросы
- •Тема 9 ферментативные (биохимические) свойства и принципы идентификации микроорганизмов
- •Тема 10 бактериофаги
- •Тема 11 антибиотики. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •Методические указания
- •Тема 12 генетика и генетические методы идентификации микроорганизмов
- •Раздел II инфекция и методы прикладной иммунологии
- •Тема 13 экспериментальное заражение лабораторных животных. Определение вирулентности и факторов патогенности микроорганизмов
- •Тема 14 методы определения факторов неспецифической резистентности и оценки иммунного статуса макроорганизма
- •Тема 15 серологические реакции: агглютинации (ра), непрямой гемагглютинации (рига), кумбса (рк). Оборудование для постановки серологических реакций
- •Тема 16 реакции преципитации (рп): кольцепреципитации (ркп), диффузионной преципитации (рдп); иммуноэлектрофорез
- •Тема 17 реакция связывания комплемента (рск)
- •Тема 18 метод флуоресцирующих антител (мфа). Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Тема 19 реакция нейтрализации (рн)
- •Тема 20 средства специфической профилактики, терапии и диагностики инфекционных болезней
- •Тема 21 отбор, консервирование, транспортировка и хранение материала для микробиологического исследования. Принципиальная схема микробиологической диагностики инфекционных болезней
- •Раздел III частная микробиология
- •Тема 22
- •Лабораторная диагностика стафилококкозов и стрептококкозов. Биопрепараты
- •Тема 23 лабораторная диагностика рожи свиней и листериоза. Биопрепараты
- •Тема 24 лабораторная диагностика туберкулеза, паратуберкулеза, актиномикоза. Биопрепараты
- •Тема 25 лабораторная диагностика сибирской язвы. Биопрепараты
- •Тема 26 лабораторная диагностика злокачественного отека, анаэробной дизентерии ягнят, брадзота, инфекционной энтеротоксемии, эмфизематозного карбункула. Биопрепараты
- •Тема 27 лабораторная диагностика столбняка, ботулизма. Биопрепараты
- •Тема 28 лабораторная диагностика некробактериоза и копытной гнили. Биопрепараты
- •Тема 29
- •Тема 30 лабораторная диагностика сальмонеллеза. Биопрепараты
- •Тема 31 лабораторная диагностика чумы верблюдов и человека, псевдотуберкулеза. Биопрепараты
- •Тема 32 лабораторная диагностика бруцеллеза, туляремии.
- •Тема 33 лабораторная диагностика пастереллеза, гемофилезного полисерозита и актинобациллезной пневмонии свиней. Биопрепараты
- •Тема 34 лабораторная диагностика сапа, мелиоидоза и псевдомоноза норок. Биопрепараты
- •Тема 35 лабораторная диагностика лептоспироза, кампилобактериоза и дизентерии свиней. Биопрепараты
- •Тема 36 лабораторная диагностика микоплазмозов, риккетсиозов и хламидиозов. Биопрепараты
- •Тема 37 лабораторная диагностика дерматомикозов, микозов, вызываемых плесневыми и дрожжеподобными грибами. Биопрепараты
- •Тема 38 лабораторная диагностика микотоксикозов, вызываемых грибами родов aspergillus, penicillium, fusarium, stachybotrys, dendrodochium
- •Тема 39 санитарно-микробиологическое исследование воды, воздуха и почвы
Тема 19 реакция нейтрализации (рн)
Цель занятия. Ознакомить студентов с реакцией нейтрализации (РН). Освоить технику постановки РН для обнаружения и идентификации бактериальных токсинов.
Оборудование и материалы. Бульонные токсинсодержащие культуры С. perfringens, центрифуга, центрифужные пробирки, стерильные бактериологические пробирки, стерильный физиологический раствор, воронки, ватно-марлевые фильтры, стерилизатор со шприцами и инъекционными иглами, диагностические антитоксические сыворотки С. perfringens, белые мыши массой 16...18 г.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Реакцию нейтрализации относят к иммунологическим реакциям, в которых, например, учитывают потерю биологической активности антигена при взаимодействии с гомологичными антителами. Если антигеном служит бактериальный экзотоксин, то он теряет свои токсические свойства (нейтрализуется), вирус как антиген теряет в этом случае инфекционное действие и т. д.
В бактериологических диагностических исследованиях наиболее часто используют РН как метод обнаружения и идентификации бактериальных токсинов.
РН бактериального экзотоксина. Используют при диагностике таких бактериозов, как ботулизм, инфекционная энтеротоксемия овец и др., возбудители которых (С. botulinum, С.perfringens) синтезируют сильный экзотоксин. Для постановки диагноза на эти бактериальные инфекции достаточно обнаружить экзотоксин в РН. Рассмотрим технику постановки РН на примере обнаружения токсинов С. perfringens. Для постановки РН необходимы диагностические иммунные сыворотки, содержащие антитела к определенному бактериальному токсину, — антитоксические сыворотки, Такие диагностические сыворотки получают путем гипериммунизации животных-продуцентов анатоксинами, токсинами инактивированными (формальдегидом), но сохранившими свои иммуногенные свойства. С. perfringens продуцирует шесть типов экзотоксинов, различающихся по антигенной структуре (А, В, С, D, Е, F).
Исследуемый материал, в котором предположительно находится токсин (содержимое кишечника), разводят физиологическим раствором в соотношении 1:1, экстрагируют при комнатной температуре 1 ч, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и центрифугируют при 5000 мин-1 20 мин. Надосадочную жидкость вводят внутрибрюшинно или внутривенно по 0,5 мл двум белым мышам массой 16... 18 г. При наличии токсина в исследуемом материале животные погибают в течение 12 ч. После обнаружения токсина его идентифицируют в реакции нейтрализации.
Схема постановки РН на примере определения типа токсина С. perfringens показана в таблице 14. Диагностические антитоксические сыворотки (типов А, С, D, Е) предварительно разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации 10 ед/мл.
Содержимое каждой пробирки после инкубирования вводят внутривенно или внутрибрюшинно по 0,5 мл двум белым мышам. Наблюдение за животными ведут в течение 48 ч. Если токсин принадлежит С. perfringens, то мыши, получившие смесь токсина с гомологичной антитоксической сывороткой, остаются живы (табл. 15).
Другие варианты РН. При помощи нейтрализации антителами гемолизинов, продуцируемых различными штаммами бактерий одного вида, можно подтвердить антигенную однородность гемолизина или доказать, что данный вид бактерий синтезирует несколько антигенных вариантов гемолизина.
В вирусологических исследованиях широко используют реакцию нейтрализации инфекционного действия вируса при помощи гомологичной иммунной сыворотки. Факт нейтрализации вируса антителами устанавливают, заражая различные чувствительные биологические объекты: лабораторных животных, куриные эмбрионы, культуры клеток. Технические детали РН в вирусологической практике подробно изложены в соответствующем курсе.
ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
Освоить технику постановки реакции нейтрализации по выявлению и идентификации токсинов С. perfringens.
Контрольные вопросы
В чем сущность реакции нейтрализации?
Какие применяют варианты реакции нейтрализации?
Каким образом устанавливают тип бактериального токсина в РН?