Качественные показатели спермы

Произво-ди­тель	Объем эякулята, мл		Число спермиев в 1 мл, млрд.		Подвижность спермиев по 10-балльной сис­- теме (минимально допустимая)	Максима-ль­ный процент патологи-чес­ких спермиев	Максималь­ный процент незрелых спермиев
	сред-ний	максима-льный	среднее	макси-маль-ное
Бык 4-5 20 1-2 6 8 18 2
Баран 1-2 5 2-4 8 8 14 2
Хряк 250 1200 0,1-0,2 1 7 20 10
Жеребец 50-100 600 0,1-0,2 0,8 5 25 10
Северный 0,3 1,2 1-2 - 8 15 4
олень

Микроскопическое исследование спермы.При микроскопическом исследова­нии, прежде всего, определяют густо­ту и подвижность (актив­ность) спермиев. По густоте спермы ориентировочно устанавливают насыщенность ее спермиями, относя к густой (Г), средней (С) или редкой (Р). У быков оценка Г ставится, если все поле зрения микроскопа заполнено спермиями и в пространстве между ними не укладывается длина одного спермия. Средней считают сперму, ког­да между спермиями хорошо выражены промежутки, равные приблизительно длине спермиев. В редкой сперме рас­стояние между спермиями превышает их длину.

Сложнее определять густоту спермы производителей с маточным типом осе­менения, так как у них секреты прида­точных желез очень сильно разбавляют спермиев. У всех видов животных оцен­ка по густоте не позволяет точно устано­вить насыщенность спермы спермиями, поэтому с переходом на использование разбавленной спермы при оценке эякулята определяют концентрацию спер­миев.К использованию допускают сперму быков, хряков и жеребцов с оценкой Г и С, а у баранов — только Г.

Подвижность спермиев оценивают по 10-балльной системе. Каждый балл равен 10 % спермиев, об­ладающих поступательным движением. Если спермии имеют манежное движе­ние (по кругу) или только колеблются, качество спермы оценивают буквой К (колебательное движение). Сперму с не­подвижными спермиями обозначают буквой Н (некроспермия).

Подвижность неразбавленной спер­мы быка определяют при температу­ре 40 С. На теплое предметное стек­ло наносят каплю спермы и 2—4 капли 3%-ного раствора цитрата натрия, пере­мешивают, накрывают покровным стек­лом и просматривают не менее трех по­лей зрения. Поскольку оценка спермиев по подвижности достаточно субъектив­на, то для контроля в необходимых слу­чаях можно определять количество жи­вых и мертвых спермиев.

При оценке спермы на густоту и подвижность спермиев применяют комплексное обозначение, позволяю­щее удобно отражать ее качество. Например, Г-10 баллов означает, что ис­следуемая сперма густая и 100 % спермиев обладают головным прямолиней­ным, движением; Г-9 баллов означает 90%, 8—80, Г-7—70% подвижных спермиев и т. д.

Концентрацию спермиев (количество в 1 мл эякулята) наибо­лее точно определяют в счетной камере Горяева или другого автора (см. Практи­кум по акушерству). Это один из основ­ных показателей качества спермы, на который ориентируются при разбавле­нии эякулята.

Для определения концентрации спермиев жеребцов Г. В. Паршутин и Е. В. Румянцева сконструировали специальные стандарты. Они представ­ляют собой запаянные пробирки, содер­жащие жидкость, имеющую цвет, соот­ветствующий той или иной известной концентрации спермы. Для определе­ния концентрации исследуемую сперму наливают в пробирку с диаметром стан­дартных пробирок, устанавливают ря­дом с ней пробирки стандарта и подби­рают наиболее подходящий по виду стандарт, на котором отмечено количе­ство спермиев в 1 мл спермы.

Концентрацию спермиев в эякулятах хряка удобно определять оптическим стандартом С. И. Сердюка.

В настоящее время станции искусст­венного осеменения пользуются фотоэлектроколориметрическим (ФЭК) методом, основанным не на прямом подсчете спермиев, а на учете степени оптичес­кой плотности спермы, т. е. мутности. Этот метод позволяет быстро (2—3 мин) определить концентрацию спермиев в сперме, но так как ФЭК создан для анализа истинных ра­створов, а сперма является взвесью и в ней содержится большее или меньшее количество эпителиальных и других клеток, то результат нередко может быть неточным.

Определение количе­ства мертвых спермиев. В. А. Морозов предложил использовать красители, которые окрашивают спер­миев только мертвых и с колебательны­ми движениями. Самый простой способ определения на скоростном (за 37— 40 с) авто­матическом счетчике клеток — целлоскопе. С этой целью можно использовать и венгерский прибор «Пикоскель». Способ окраски спермы быков следующий. Ис­следуемая сперма должна иметь кон­центрацию спермиев 0,2—0,4 млрд./мл, при более высокой концентрации эякулят разбавляют 3%-ным раствором цит­рата натрия до указанного показателя. Готовят 1—5%-ный раствор эозина водо-растворимого на 3%-ном растворе ли­моннокислого натрия. На чистое обез­жиренное теплое (35 ± 2 °С) предметное стекло наносят каплю спермы, добавля­ют 2—3 капли краски, подогретой до 30 °С, смешивают 2—4 с и делают три тонких мазка, которые высушивают.

Определение содержа­ния патологических форм спермиев и включений спермы у быков проводят в мазках, окрашенных азур-эозином или другими красителя­ми, где подсчитывают 100—200 сперми­ев и различные включения. Среди нор­мальных спермиев всегда находится бо­лее или менее значительное количество патологических форм. Чаще аномалии выявляются в хвостовой части сперми­ев, основании головки и шейки. С воз­растом к моменту физиологической зре­лости производителя количество ано­мальных спермиев уменьшается. Могут встречаться самые различные патологи­ческие формы спермиев: гигантского размера или карликовые, спермии с дву­мя-тремя головками, но общим хвос­том, с двумя хвостами, с укороченным хвостом, его деформацией или отсут­ствием, с цитоплазматической капелькой, слишком большой или маленькой головкой и другие формы. Иногда встречаются спермии, лишенные голов­ки, но способные двигаться.

Л. А. Черномаз отмечает как признак патологических спермиев слабо выра­женный перфораторий или его отсут­ствие. Нарушение структуры перфоратория и оболочки спермия — признак начальных изменений спермиев при их хранении.

Большое количество патологических спермиев свидетельствует о нарушении спермиогенеза, о вредном влиянии па­тологически измененных секретов при­даточных половых желез и мочевых пу­тей или, наконец, указывает на наруше­ние правил получения спермы и ее хра­нения во внешней среде от выделения до исследования.

В качестве конкретных причин обра­зования уродливых форм спермиев от­мечают: слабо развитые семенники; по­ражения семенника и придатка (гигант­ские и карликовые спермии), длитель­ные промежутки между коитусами, обусловливающие старение и распад спермиев в придатке (отдельные голов­ки, изолированные хвосты), половое ис­тощение производителя вследствие большой половой нагрузки или недоста­точного кормления (спермии с цитоплазматическими капельками в области шейки, тела и хвоста — незрелые спер­мии). Чем ближе к головке расположена капелька, тем моложе спермии.

Большое значение в образовании па­тологических форм спермиев придается нарушению терморегулирующей функ­ции мошонки.

Закручивание хвостов спермиев в сторону происходит при смешивании спермы с гипотоническим раствором (неправильная подготовка разбавите­лей, попадание воды).

При микроскопическом исследова­нии спермы выявляются следующие включения: клетки плоского, переход­ного эпителия, клетки семенных канальцев (зернистые), форменные эле­менты крови — эритроциты и лейкоци­ты, гиалиновые шары, круглые или овальные, иногда слоистые и напомина­ющие зерна крахмала, амилоидные тельца, сильно блестящие — лецитиновые зернышки, кристаллы спермина и др. Если примесей в сперме мало, это считается нормой. Если примесей мно­го, необходимо выявить их источник и причину. Значительное количество патологи­ческих спермиев следует, безусловно, расценивать как признак наступающей импотенции.

Дегидрогеназная активность спермы быка определяется скоростью обесцвечивания метиленовой сини в капилля­рах или в пробирках (метод Н. П. Шергина). Первый вариант получил более широкое распространение в практике. На предметное стекло, подогретое до 30—37С, наносят каплю спермы и до­бавляют теплой пипеткой каплю 0,01%-ного раствора метиленовой сини, подогретого до 30С. Капли тщательно перемешивают и набирают смесь в теп­лую (30—37 °С) стеклянную трубку дли­ной 5—6 см с внутренним диаметром 0,8—1 мм, чтобы высота столбика была 2—3 см. Заполненную смесью трубочку

кладут горизонтально на лист белой бу­маги в термостат с температурой 37 ± 0,5 С. Записывают время начала исследования и окончания обесцвечи­вания метиленовой сини. Дегидрогеназную активность спермы (Да) в условных единицах вычисляют по формуле:

Да=ПсtС/10,

где Пс—подвижность спермиев, баллы; t—вре­мя обесцвечивания метиленовой сини в опыте, мин; С — концентрация спермиев, млрд./мл; 10 — постоянный коэффициент.

Все исследования спермы проводят при строгом соблюдении действующих стандартов и инструкций по искусст­венному осеменению сельскохозяй­ственных животных.

В результате исследования могут быть установлены следующие недостатки:

асперматизм (Азм) — отсутствие спермы;

олигосперматизм (Озм) — малый объем эякулята;

аспермия (А) — отсутствие в сперме спермиев;

олигоспермия (О) — недостаточное число спермиев в эякуляте;

некроспермия (Н) — мертвые спермии;

тератоспермия (Т) — патологические спермии и др.

Производителя можно использовать для естественного или искусственного осеменения, если его сперма отвечает требованиям действующей инструкции по осеменению животных.

Биологическая проба спермы.Решаю­щее значение для оценки спермы имеет определение оплодотворяющей способ­ности спермиев. Установлено, что она может быть выявлена только в отноше­нии определенной группы самок, нахо­дящихся при конкретных условиях су­ществования и времени осеменения. Оплодотворение зависит от степени родства самки и производителя, состоя­ния их здоровья, упитанности, качества кормления и др. Поэтому для определе­ния оплодотворяющей способности спермы лучше всего использовать здо­ровых ремонтных телок. Правильно по­ставленная биологическая проба спер­мы на здоровых животных — самый на­дежный критерий ее оценки. Все другие методы являются только косвенными, т. е. они позволяют лишь условно судить об оплодотворяющей способности спермы. Сперма считается нормальной, если оплодотворяемость от первого осе­менения составляет не менее 70—75 %. Быки с пониженной оплодотворяющей способностью спермы дают маложиз­ненное потомство, и их нельзя исполь­зовать ни при искусственном, ни при ес­тественном осеменении.

Наблюдения показали, что даже все­стороннее лабораторное исследование спермы иногда не отражает ее качеств. От некоторых жеребцов с прекрасными лабораторными показателями спермы оплодотворяемость кобыл оказывалась низкой, если интервалы между садками были больше 48 ч. Осеменение кобыл через 24—36 ч этими же производителя­ми давало резкое повышение плодови­тости.

В жаркие летние месяцы оплодотворяемость коров от замороженной спер­мы, как правило, низкая. Наиболее бла­гоприятное время для заготовки заморо­женной спермы — весна и осень. Спер­ма некоторых быков плохо заморажива­ется.

Разработана методика замораживания| спермы жеребцов в гранулах или алюминиевых пакетах (Е. М. Платов и др.).

Оценка спермы на пунктах искусственного осеменения.

На пунктах искусственного осемене­ния оценивают только активность дви­жения спермиев. Для проверки качества спермы, сохраняемой при температуре 2—5С, открывают термос, берут из флакона каплю спермы, кладут на пред­метное стекло и исследуют под микро­скопом подвижность спермиев. Пробу надо брать быстро, чтобы не допускать нагревания спермы.

Исследуют сперму при температуре 40—41С, для этого используют обогре­вательные столики различных конст­рукций (В. А. Морозова и др.) или тер­мостаты. Нельзя подогревать предмет­ное стекло на пламени спиртовки или другими методами без контроля темпе­ратуры. При активности спермиев быка ниже 7 баллов, барана — 8, жеребца — 5 и хряка — 6 баллов сперму не использу­ют для осеменения.

Порядок оттаивания замороженной спермы. Оттаян­ную сперму в любой расфасовке выни­мают из водяной бани и оставляют при температуре 18—20°С до использова­ния, но не более 10—15 мин. Вновь за­мораживать оттаянную сперму нельзя. Подвижность спермиев в оттаянных необлицованных гранулах определяют так же, как в сперме, сохраненной при температуре 2—5° С. Оболочку упаков­ки доз спермы в облицованных гранулах 2после оттаивания гранул насухо выти­рают марлевой салфеткой, край упаков­ки зажимают между двумя предметными стеклами с помощью специальных зажимов или бельевых прищепок, ставят на обогре­вательный столик микроскопа под ма­лое увеличение и просматривают спермии через пленочную упаковку. Допускается использование оттаянной спер­мы с подвижностью спермиев не ниже 3—4 баллов для коров и телок, 4 баллов для овец и 2 баллов для кобыл.

Оттаивание замороженной спермы.
Вид животного	Фасовка спермы и доза	Температура оттаивания С	Порядок оттаивания	Продолжительность оттаивания, сек
Бык	Необлицованные мелкие гранулы по 0,1-0,2 мл Необлицованные крупные гранулы Облицованные гранулы по 0,25 мл Соломинки по 0,25 мл	40-42 40-45 40 38	Ампулу или флакон с 0,8-1мл 2,9% стерильного раствора цитрата натрия помещают в водяную баню на 2-3 мин, затем в теплый раствор опускают одну гранулу Выдержав в водяной бане 2—3 мин стерильный флакон, в него опускают две гранулы Дозу спермы пинцетом с широкими браншами опускают в во­дяную баню Соломинки погружают в водяную 10—11 баню заводской пробкой вниз, ос­тавляя верхний конец ее на 0,5— 1 см выше поверхности воды	5-8 90-120 8-10 10-11
Баран Гранулы по 0,2 мл 70—80	Гранулы по 0,2 мл	70—80	В разогретый водяной или электрический отгаиватель засыпают одновременно до 20 гранул; оттаявшая сперма стекает в стерильный флакон	До полного оттаивания
Жеребец	Алюминиевые пакеты Гранулы по 0,5 мл	40 40	Удерживают пакет пинцетом, его погружают в водяную баню. В стерильную колбу насыпают гранулы, погружают в водяную баню	45-50 До полного оттаивания

Техника безопасности при работе с жидким азотом и сосудами Дьюара.

При искусственном осеменении жи­вотных все шире используют сперму, замороженную при —196°С, которую хранят в жидком азоте в специ­альных емкостях—сосудах Дьюара.

В животноводстве используют различные типы со­судов отечественного и импортного производства. Наи­большее распространение получил сосуд отечественного производства СД 50 емкостью 52 л.

При работе персонала с жидким азотом и сосудами Дьюара возможны:

• обмораживание открытых участков тела при контак­те с охлажденными -поверхностями или попадании жидкого азота;

• головокружение, обморок или удушье в результате снижения концентрации кислорода в воздухе при ис­парении большой массы жидкого азота;

• взрыв сосуда Дьюара вследствие внезапной потери вакуума, быстрой десорбции газов при отогревании сосуда, а также из-за испарения азота при герметично закрытой горловине;

• конденсация на охлажденных жидким азотом по­верхностях кислорода воздуха и возгорание при кон­такте с горючими материалами.

В связи с этим обращаться с сосудами Дьюара не­обходимо осторожно, в строгом соответствии с инструк­цией по их эксплуатации. При падении, ударах, резких толчках может произойти нарушение целостности на­ружного кожуха или внутреннего сосуда, что сопровож­дается потерей вакуума. Признаком такой неисправнос­ти является быстрое испарение жидкого азота и обле­денение наружного кожуха. Эксплуатировать или ото­гревать в рабочих помещениях неисправные сосуды Дьюара категорически запрещается. Потерявший ва­куум сосуд Дьюара надо освободить от хранимой спер­мы и жидкого азота, а затем поставить на отогревание в течение трех суток в помещение, куда запрещен дос­туп людей.

Закрывать сосуды Дьюара можно только предназ­- наченными для них крышками. Запрещается плотно закрывать горловину сосуда; испарение части жидкого азота создает внутри сосуда избыточное давление, по­этому внутрь сосуда не может попасть кислород из наружного воздуха. Кроме того, повышение давления создает опасность повреждения сосуда или выброса жидкого азота.

При транспортировке сосуды Дьюара и находящие­ся рядом предметы необходимо надежно закреплять во избежание падений, повреждений.

Заливать жидкий азот в сосуд Дьюара надо через гибкий металлорукав диаметром 18 мм, давление по манометру в транспортной цистерне должно быть не более 0,5 атм. Гибкий металлорукав должен быть опу­щен в сосуд до дна, чтобы струя азота не выбросила рукав из горловины, так как могут пострадать работа­ющие рядом люди. Из сосуда Дьюара в сосуд заливку ведут через широкую металлическую воронку.

В процессе заливки категорически запрещается за­глядывать в сосуд для определения уровня жидкости. Заправка считается законченной при появлении из гор­ловины первых брызг жидкости. Особую осторожность следует соблюдать во время заполнения теплых сосу­дов Дьюара, то есть новых или отогретых. Заполнять сосуды Дьюара жидким азотом в одиночку запреща­ется.

Вводить пинцет, канистры и другие предметы в жидкий азот надо медленно во избежание разбрызгива­ния, вызванного «кипением» жидкости при контакте с теплыми предметами. Чтобы сперма всегда находилась в жидком азоте, сосуды Дьюара, предназначенные для ее хранения, периодически дозаправляют, при пониже­нии уровня жидкого азота до емкости сосуда. Контроль за уровнем азота проводят периодическим погру­жением в азот металлической или деревянной линейки. Жидкий азот как более летучий компонент постепенно обогащается кислородом — примесью в техническом продукте. Недопустимо в смеси свыше 15% жидкого кислорода, так как такая смесь может воспламениться при контакте с органическими продуктами. Содержание кислорода контролируют газоанализатором типа ГХП-3. При отсутствии газоанализатора после каждых 12 доза­правок жидкость из сосуда Дьюара сливают и сосуд за­полняют свежим азотом. Слив проводят на открытой специальной площадке в безопасном месте. Вблизи мест слива не должно быть деревьев, бумаги, асфальта и других органических продуктов.

Чтобы предотвратить загрязнение сосуда, гибкие металлорукава и воронки хранят в чехлах. Для удале­ния «ила» или твердых частиц необходимо слить со­держимое сосуда, промыть сосуд чистым жидким азо­том и поставить на отогрев. Не ранее чем через трое суток после слива сосуд промывают теплым (до +30°) водным раствором моющего средства ОП-7, а затем ополаскивают водой (не выше +70°). Промывку и очистку сосудов проводят на госплемпредприятиях и госплемстанциях. Нельзя нагревать сосуды. Такая опе­рация может привести к взрыву.

Персонал, работающий с сосудами Дьюара и жид­ким азотом, обязан надевать защитные 'очки (лучше щитки из органического стекла), перчатки или рукави­цы. Одежда должна быть без карманов, брюки — без манжет и закрывать верх обуви. Рукавицы должны быть свободными, чтобы при необходимости их можно было легко сбросить. При попадании жидкого азота на кожу пораженный участок немедленно обильно об­мыть водой.

Помещение, где работают с жидким азотом или хра­нят сосуды Дьюара, должно быть оборудовано приточно-вытяжной принудительной вентиляцией, обеспечиваю­щей содержание кислорода в воздухе не менее 19%.