1.5. Диагностика

Диагноз на лептоспироз ставят путем проведения микроскопических, бактериологических, серологических и гистологических исследований с учетом эпизоотологических, эпидемиологических, клинических и патологоанатомических данных..

Диагностика лептоспироза осуществляется в специализированной лаборатории, где проводят микроскопические, бактериологические, серологические исследования, постановку биопробы.

Для прижизненной диагностики направляют нативную или цитрированную кровь, мочу, околоплодные воды, абортированный плод; для посмертной диагностики - трупы мелких животных, от крупных животных кусочки паренхиматозных органов, транссудат грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь.

Мочу собирают при естественном мочеиспускании, исследуют в «темном поле» микроскопа не позднее 6-12 часов хранения при 4°. Остальной патологический материал - не позднее 6 ч. в летнее время и 10-12 ч. - в зимнее время.

В сопроводительном документе к пробам патологического материала должно быть указано время гибели животного или время взятия проб при жизни.

Бактериологический метод заключается в обнаружении лептоспир в исследуемом материале путем микроскопии в темном поле иммунофлюоресцирующим методом или в окрашенных препаратах, в выделении культур в специальных средах, постановке биопробы на лабораторных животных, идентификации и дифференциации выделенных культур.

Микроскопическое исследование проводят методом раздавленной капли. Мочу, околосердечную жидкость, транссудаты из грудной и брюшной полостей в нативном состоянии или в виде осадка после центрифугировария (8-10 тыс об/мин в течение 30 мин), суспензии из почек, легких, печени предварительно отстаивают, далее после центрифунгирования отбирают для исследования надосадочный слой. Просматривают из каждого материала не менее 10 препаратов, до 50 полей зрения для обнаружения характерных подвижных лептоспир (А.Ф. Карышева, С.В. Карышев, 1989 г).

В кислой моче с рН 5,0-6,0 лептоспиры быстро утрачивают подвижность и погибают. Лептоспиры необходимо дифференцировать от нитей фибрина, обломков хвостовых частей спермиев, разрушенных эритроцитов, спириллоподобных, вибриоподобных микроорганизмов (Ю.А. Малахов, 1993 г).

При бактериологическом исследовании проводят выделение чистой культуры путем посева патологического материала на специальные питательные среды. Инкубируют при 28-30°С. Далее 5-10 суточную культуру типируют (не менее 50 лептоспир в поле зрения микроскопа, без признаков агглютинации и лизиса) с групповыми агглютинирующими сыворотками в РМА, в реакции иммуноадсорбции или РМА с моноклональными сыворотками (определение серовара).

Серологическое исследование предусматривает постановку РМА с сыворотками крови животных. Для этого исследуемую сыворотку разводят физиологическим раствором от 1:50 до 1:1000. Антигенами служат живые музейные культуры. Реакцию ставят в плексигладовом планшете в объеме 0,1 мл разведенной сыворотки и 0,1 мл антигена. Далее пластины встряхивают, ставят в термостат при 30°С на 1 ч. Контролем служит смесь каждого антигена с равным объемом физраствора. Учет реакции - по четырехкрестовой системе.

Диагностическим титром считают 1:50 и выше (Ю.А.Малахов, 1993, 2000 гг; А.Ф. Карышева, С.В. Карышев, 1989 год).