Гилберт с. Биология развития: в 3-х т. Т. 2: Пер. С англ. – м.: Мир, 1994. – 235 с.

148_______________ ГЛАВА 12__________________________________________________________

*—

Рис. 12.l1. Протокол идентификации двух отдельных энхансерных элементов, контролирующих тканевую специфичность транскрипции желточных белков. Гены желточных белков и их 5'-фланкирующие элементы отделяли друг от друга с помощью рестриктаз (Hind III) обозначена как Н). Затем эти гены модифицировали присоединением добавочной ДНК к экзону и клонировали в мобильном Р-элементе. В синцитиальную бластодерму с помощью микроинъекции вводили рекомбинантный Р-элемент, который включался в некоторые ядра. Иногда Р-элемент попадал в клетки зародышевой линии. Такие мухи затем спаривались с интактными особями. Потомство, которое получило гены Р-элемента, можно было идентифицировать по окраске глаз (благодаря генетическому маркеру в Р-элементе), а отдельные органы могли быть тестированы на присутствие транскриптов ур1 и ур2.

фланкирующей последовательности к гену ß-галактозидазы E. coli. Полученные гены клонировали в Р-элементе. который затем вводили зародышам, как это было описано ранее. Потомство тех зародышей, которые включили Р-элемент, окрашивали на ß-галактозидазу (Garabedian et al., 1986). Результаты можно видеть на цветной фотографии, помещенной на одной из сторон обложки книги. В жировом теле и яичнике в отсутствие 5’-фланкирующей области ß-галактозидаза не выявляется.

Гилберт с. Биология развития: в 3-х т. Т. 2: Пер. С англ. – м.: Мир, 1994. – 235 с.

________________ МЕХАНИЗМЫ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ ГЕНОВ_____________________________ 149

Рис. 12.12. Локализация энхансерных элементов желточных белков. А. Экспрессия гена бактериальной ß-галактозидазы с присоединенным участком от —44 до –350 с 5'-стороны гена ур2 в яичниках Drosophila. Клетки, экспрессирующие ß-галактозидазу, окрашены в темный цвет. Б. Схема энхансеров желточных белков у дрозофилы. (Полученные сравнительно недавно данные предполагают также наличие третьего элемента, расположенного между положениями —100 и +1 гена ур2 и увеличивающего транскрипцию обоих генов.) (Фотография с любезного разрешения P. Wensink.)

Если добавляли целую 5'-фланкирующую область гена ур1, то жировые тела, но не яичник, окрашивались в черный цвет (только у самок). Эта специфическая транскрипция сохранялась, когда использовали фрагмент от –321-го до –196-го положения. Следовательно, специфичная для жирового тела транскрипция регулируется участком ДНК, длиной 125 пар оснований, который расположен между –196-м и –321-м положениями. Сходным образом последовательность энхансера, отвечающего за спе-

Рис. 12.13. Протокол определения сайта энхансера глюкокортикоидов. Подробности см. в тексте.