Глава 2. Экспериментальная часть.

2.1. Цели и задачи исследования.

Целью данной работы является разработка метода укоренения микрорастений сортов земляники садовой ex vitro, то есть в нестерильных условиях.

В связи с этим ставятся следующие задачи:

1. Оценить сорта земляники по способности к микроразмножению.

2. Подобрать оптимальные концентрации ИМК для индукции ризогененза микрочеренков у изучаемых сортов.

3. Сравнить растения земляники, укорененные двумя способами: ex vitro и in vitro по морфологическим характеристикам (количество и длина корней, высота побега, количество листьев) и их укореняемости.

4. Определить экономическую эффективность укоренения микропобегов земляники садовой ex vitro.

2.2. Материалы и методы.

Объектами исследования служили сорта земляники садовой Королева Елизавета, Трибьют и Маковка.

Место проведения исследований: лаборатория плодоводства МСХА. Адаптацию проводили в зимних остекленных теплицах. Время проведения исследований: весна 2005 года.

Культуры помещали в световую комнату с интенсивностью света 2000 люкс, температурой 24 градуса и 16-ти часовым фотопериодом.

Для исследования использовали полученные ранее меристемные культуры земляники садовой вышеуказанных сортов. Растения были размножены на среде по прописи Мурасиге-Скуга (табл. ). Для снятия апикального доминирования использовали БАП в концентрации 0,4 мг/л.

Табл. 1. Состав питательной среды по прописи Мурасиге-Скуга.

Состав	Концентрация, мг/л
NH4NO3	1650
KNO3	1900
CaCl2*2H2O	440
MgSO4*7H2O	370
KH2PO4	170
H3BO3	6,2
MnSO4*4H2O	22,3
CoCl2*6H2O	0,025
CuSO4*5H2O	0,025
ZnSO4*7H2O	8,6
Na2MoO4*2H2O	0,25
FeSO4*7H2O	27,8
Na2 ЕДТА	37,3
КУ	0,83
Ca(NO3)2*4H2O, г/л	-
NaH2PO4	-
Na2SO4	-
Сахароза, г/л	30
Тиамин	0,5
Никотиновая кислота	0,5
Пиридоксин	0,5
Глицин	-
Инозит	100
Агар, г/л	5…8 (7)

Часть размноженных растений была высажена на питательную среду для укоренения in vitro, а часть была высажена для укоренения ex vitro. Растения для обоих вариантов высаживались одновременно. Свет и температура были такие же, как и во время пролиферации.

Для эксперимента были отобраны растеньица похожие по размерам и морфологии, имеющие не менее 4-5 листьев, с длиной черешка не менее 1,5 см.

Укоренение in vitro проводили на 1/2 МС. На стадии укоренения в качестве индуктора ризогенеза in vitro использовали ИМК в концентрации 0,7 мг/л.

Растения, укореняемые ex vitro, предварительно замачивали в растворе ауксина. Использовали растворы различной концентрации: 2 мг/л и 5 мг/л ИМК. Продолжительность обработки составила 7 часов. Затем растения были высажены в теплицу в кассеты размером 60х60 мм. Субстрат состоял из смеси верхового торфа и перлита в соотношении 1:1. Кассеты помещались в условия влажной камеры. Световой и температурный режим были аналогичны таковым в световой комнате (интенсивность света 3000 люкс, температура 24 градуса и 16-ти часовой фотопериод).

Данные снимались по истечении 4 недель в условиях in vitro и в теплице. Учитывали высоту побега, количество листьев и длину черешков побега, количество и длину корней. Объем каждого варианта составлял 20 растеньиц. Статистическую обработку данных проводили методом дисперсионного анализа с использование программного комплекса STRAZ.