5.3 Экономическая эффективность результатов собственных исследований
Экономическую эффективность полученных результатов определяли на основании «Методики определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» утверждённой Главветупром МСХ и П Республики Беларусь 10. 05 2000 г..
Убытки от яловости коров каждой группы исчисляли по следующей формуле:
СУ = НТ + НМ + ИС, где
НТ - недополучение телят
НМ - недополучено молока
ИС - издержки на содержание
При подсчете недополученных телят определяли, какая часть теленка приходится на 1 день стельности. Если взять продолжительность стельности коров в среднем 285 дней, то на 1 день стельности приходится 0,0035 теленка (1 : 285 = 0,0035).
Каждый день яловости - это потеря одного дня стельности или 0,0035 теленка.
НТ = ТЯ х 0,0035 х СТ, где
ТЯ - число дней яловости по 1 группе коров
СТ - стоимость одного теленка приравнивается к стоимости 1,5 центнера молока
Стоимость одного центнера молока равна 30000 рублей
,5 х 30000 = 45000
АТ = 772 х 0,0035 х 45000 = 121590 рублей
Среднесуточный надой на 1 корову в год за 2003 год составил 11,5 кг, значит на 1 день яловости недополучено 11,5 кг молока.
НМ = ТЯ х СМ х 11,5
НМ = 772 х 300 х 11,5 = 2663400 рублей
НМ = 2663400
Убытки от издержек на содержание яловых коров в течении суток в среднем составляет 2000 рублей.
ИС = ТЯ х 2 = 772 х 2 000 = 1544000
СУ = 121590 + 2663400 + 1544000 = 1931930 рублей.
Так как в первой группе для лечения применялся эстрофантин рассчитываем затраты на лечение.
ВВ = М х С = 25 х 2900 = 72500 рублей.
Где, М - количество коров в первой группе
С - стоимость лечения
Общая сумма ущерба по первой группе составляет:
У = 1193930 + 72500 = 1266430 рублей.
На одну корову 1266430 : 25 = 506572 рубля.
Убытки по второй группе:
НТ = ТЯ х 0,0035 х СТ
НТ = 883 х 0,0035 х 45000 = 1390725 рубля.
НМ = 883 х 300 х 11,5 = 3046350 рублей.
ИС = 883 х 2000 =1766000 рублей.
СУ = 1390725 + 3046350 + 1766000 = 6203075 рубля.
На одну корову 6203075 : 25 = 248123 рубля.
Убытки на лечение коров первой группы меньше, чем на лечение одной коровы второй группы на:
- 506572 = 5696503 рубля.
На одну корову 506572 - 248132 = 258440 рублей.
Таким образом, при лечении коров эстрофантином сумма ущерба в первой группе на 5696503 рублей меньше, чем во второй группе и составляет на 1 корову ущерб меньше на 258440 рублей. это достигнуто путем сокращения количества дней бесплодия.
Определяем окупаемость лечения которая составит:
Су по второй группе минус сумму ущерба по первой группе, деленную на сумму затрат на лечение коров первой группы, то есть:
-1931930=4271145
:72500=58,9 рублей на 1 рубль затрат.
.4 Анализ полученных данных
Проводя анализ полученных результатов, можно сказать, в СПК Глинянский Кобринского района Брестской области имеет место нарушение в содержании и кормлении коров, особенно в зимне-стойловый период. Корма бывают низкого качества, не в полном объеме содержится переваримый протеин и каротин, недостает в рационе и поваренной соли.
Активным моционом животные не пользуются, а это важный элемент в предупреждении возникновения гинекологических заболеваний коров в хозяйстве. В помещении, где содержатся животные, сыро, имеются сквозняки, вентиляция находится в неисправном состоянии. Повышенное содержание углекислого газа и аммиака. Все эти факторы в большей мере сказываются и на воспроизводительной функции животных а в результате из 200 животных, дважды подвергнутых обследованию, нами была выделена 91 корова с гинекологическими заболеваниями. Из этого числа животных у 50 коров был поставлен диагноз - гипофункция яичников.
При клиническом и гинекологическом исследованиях существенных отклонений от описанных в литературе признаков, которые характеризуют гипофункцию яичников, нами не обнаружено.
При биохимическом исследовании крови коров с гипофункцией яичников установлено, что течение окислительно-восстановительных процессов, происходящих в организме, находится на нижних пределах физиологической нормы.
Недостаточное количество каротина в крови обусловлено тем, что его мало содержится в кормовом рационе.
Проведя эксперимент по изучению сравнительной эффективности применения гормонального препарата эстрофантина и ректального массажа матки и яичников при гипофункции яичников, мы убедились в том, что наибольшая терапевтическая эффективность достигается когда применяется эстрофантин. Применение препарата вызывает рост фолликулов в яичниках, а это в свою очередь вызывает у животных половую охоту и течку.
Таким образом, применение эстрофантина при гипофункции яичников биологически обосновано и практически подтверждено высоким терапевтическим эффектом на примере его использования в СПК Глинянский Кобринского района Брестской области.
Выводы и предложения
В условиях СПК Глинянский Кобринского района Брестской области гипофункция яичников у коров имеет место во время зимнего стойлового содержания, что обусловлено дефицитом некоторых питательных веществ в рационе животных и их безвыгульным содержанием.
В зимний период уровень основного обмена веществ у коров СПК Глинянский находится на нижних границах физиологической нормы и сопровождается недостаточным содержанием каротина в крови, что обусловлено низким содержанием его в используемых кормах.
Гормональный препарат эстрофантин является более эффективным средством стимуляции по сравнению с ректальным массажом матки и яичников при их применении коровам с гипофункцией яичников. При этом после применения эстрофантина в подопытной группе получена оплодотворяемость у 92% коров, а в контрольной группе, где был применен ректальный массаж, - 44% или на 48% ниже.
При подсчете экономической эффективности суммарный индекс показывает, что наибольший эффект при гипофункции яичников у коров достигается при применении эстрофантина по сравнению массажа матки и яичников.
Предложения производству
Для того, чтобы снизить гинекологические заболевания у коров в СПК Глинянский Кобринского района Брестской области, необходимо:
В зимний стойловый период обеспечить животных полноценным и сбалансированным кормлением, что приведет к снижению количества бесплодных коров в стаде.
Соблюдать правильность заготовки, закладки и хранения кормов.
Предоставить животным хорошие сухие, вентилируемые помещения, отремонтировать полы, освещение.
Ежедневно предоставлять животным в течении 3-5 часов активный моцион.
Еженедельно проводить клинический осмотр поголовья с целью своевременного выявления больных животных.
При выявлении коров с гипофункцией яичников, наряду с проведением других лечебных мероприятий, использовать гормональный препарат эстрофантин.
Список использованных источников
1. Алешин Б.В. Гипоталамическая регуляция половой функция // Акушерство и гинекология. - 1978. - N 10. - с. 3 - 10.
. Акатов В.А., Скрипицин Ю.А. Гинекологическая диспансеризация - эффективный метод профилактики и ликвидации бесплодия коров и телок. / Воспроизводство и профилактика бесплодия сельскохозяйственных животных. - М.: Колос. - 1976. - с. 125-139.
. Акатов В.А., Кононов Г.А., Поспелов А.И., Смирнов И.В. Ветеринарное акушерство и гинекология. - Л.: Колос, 1977. - с. 580 -583.
. Бороян П.Г. Простагландины: взгляд на будущее. - Москва.: Знание, 1983 - с 56-64.
. Бибилашвили А.С. Симтомологические и формологические изменения при гипофункции яичников у коров: Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук. - Л.: 1970. - с. 16.
. Бочаров И.А. Бесплодие сельскохозяйственных животных. - М., Л., Сельхозгиз, 1956. - 288 с.
. Бочаров И.А., Бесхлебнов А.В., Губаревич Я.Г., Заянчковский И.Ф., Соколов Н.И., Поспелов А.И. Акушерство, гинекология и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. - Л.: Колос, 1967. - с. 434 - 440.
. Бочаров И.А. Основные способы терапии и профилактики бесплодия и яловости. (Методическое пособие). - Л., 1967. - 42 с. (М-во с.-х. СССР, ленинградский ветинститут).
. Валюшкин К.Д. Влияние витаминов на половую функцию коров. / Молочное и мясное скотоводство. - 1969. - №9. - с. 39.
. Валюшкин К.Д. Воспроизводительная функция яловых коров-первоцёлок после инъекций витамина Е, карбахолина и крови жеребых кобыл. / Материалы итоговой научной конференции за 1969 год Витебского ветеринарного института. - Витебск, 1971. - с. 60 - 62.
. Валюшкин К.Д. Витамины и микроэлементы в профилактике бесплодия коров. - Мн.: Урожай, 1981. - 96 с.
. Валюшкин К.Д. Акушерско-гинекологическая диспансеризация коров и телок. - Мн.: Урожай, 1987. - с. 88-104.
. Валюшкин К.Д., Медведев Г.Ф. Акушерство, гинекология в биотехника размножения животных: Учеб. - Минск.: Ураджай, 2000. - С 543-544.
. Валюшкин К.Д. К структуре дисфункции яичников у коров. / Материалы научно-производственной конференции. - Смоленск, 2002. - с. 81-82.
. Воскобойников В.М., Валюшкин К.Д., Терешенков А.С. Борьба с яловостью коров. - МН.: Урожай, - 1976. - с. 155 - 162.
. Гончаров В.П. Акушерско-гинекологический статус и система лечебно-профилактических мер при бесплодии коров в промышленном молочном комплексе / Новые методы диагностики, лечения и профилактики неинфекционных и инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных: Научные труды МВА. - Т. 108.-1979. - с. 40-50.
. Гончаров В.А., Карпов В.А. Профилактика и лечение гинекологических заболеваний коров. - М.: Россельхозиздат, 1981. - 190 с.
. Гончаров В.А., Карпов В.А. Профилактика и лечение гинекологических заболеваний коров. - 2 -е изд., перераб. И доп. - М.: Россельхозиздат, 1991. - 190 с.
. Желев В.З., Черемисинов Г.А., Нежданов А.Г., Шаталов П. К. Влияние граво-гормона на яичники, матку и щитовидную железу коров. / Граво-гормон в животноводстве. - М.: Колос, 1975. - с. 134-135.
. Зверева Г.В., Хомин С.П. Гинекологические болезни коров. - Киев: Урожай, 1976. - с. 76-84.
. Мартыненко Н.А., Квасницкий А.В., Андриаш Л.Т., Кацы Г.Д. Стимуляция генеративной функции яичников у коров. // Ветеринария. - 1966. - №15. - с. 85-88.
. Полянцев Н.И. Практические советы по борьбе с яловостью коров. - Москва.: Россельхозиздат, 1986. - С. 98-101.
. Прокофьев М.И., Рябых В.П., Белевич В.П. Трансплантация зародышей крупного рогатого скота нехирургическим способом //Вестник с.-х. наук. - 1978. - N 11. - с. 64-72.
. Родин И.И., Смирнов Л.Н., Флегматов М.А. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. - Москва.: Колос, 1974. - С. 81-83.
. Николаева Н.И., Шишко Р.Я. Экономическая эффективность применения гормональных препаратов для повышения плодовитости коров. / Новые методы диагностики, лечения и профилактики неинфекционных и инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных: Научные труды МВА. - Т. 108. - 1979. - с. 54-55.
. Семенов Б.Я. влияние сезона года на воспроизводительную функцию коров в хозяйствах Белоруссии и применение элеутерококка с целью профилактики бесплодия: Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук. - Мн.: 1972. - с. 23.
. Семенов Б.Я., Ивашкевич О.П. Лавор А.Н., Лиленко А.В. Схема зооветеринарных мероприятий по борьбе с яловостью крупного рогатого скота в хозяйствах Минской области /Комитет по сельскому хозяйству и продовольствию миноблисполкома, БелНИИЭВ. - Минск. БелНЦИМ АПК, 1997. - 52 с.
. Студенцов А.П., Шипилов В.С., Суботина Л.Г., Преображенский О.Н. Ветеринарное акушерство и гинекология. - М.: Колос, 1986. - с. 383-384.
. Тарасевич А.Ю. Бесплодие с/х животных. - М.Л., Сельхозгиз, 1936. 316 с.
. Черемисинов Г.А. Разработка и совершенствование гормональных методов регуляции и стимуляции воспроизводительной функции коров: Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук. - Воронеж.: 1975. - с. 52.
. Эрнст Л.К., Сергеев Н.И. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. - Москва.: Агропромиздат, 1989. - с. 273-275.
Приложение
Утверждаю:
Председатель СПК «Глинянский»
Кобринского района Брестской области
___________________Ф.И.О.
«1» января 2003 года
ИНСТРУКЦИЯ ПО ОХРАНЕ ТРУДА ПРИ ЛЕЧЕНИИ КОРОВ БОЛЬНЫХ ГИПОФУНКЦИЕЙ ЯИЧНИКОВ.
. ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ.
1.1. К непосредственному внедрению лекарственных средств коровам допускаются ветеринарные специалисты.
.2. Для оказания помощи по фиксации животных могут привлекаться лица старше 18 лет, обученные методам фиксации и приемам обращения с животными и допущенные к работе с ними.
.3. Необходимо соблюдать правила внутреннего распорядка. Не допускать присутствие в рабочей зоне посторонних лиц, распитие спиртных напитков и употребление пищи, работа в болезненном и утомленном состоянии.
.4. При входе в каждое помещение с больными животными, а также внутри помещения между секциями, следует проходить через дезбарьеры или дезковрики.
.5. Работающий должен выполнять только ту работу, по которой прошел инструктаж и на которую выдано задание, не перепоручать свою работу другим лицам.
.6. При работе с крупным рогатым скотом представляют опасность следующие факторы: уровень напряжения в электрической цепи, движущиеся механизмы и машины, недостаточная освещенность рабочего места, скользкие и неровные полы.
.7. Спецодежда: халаты, шапочки (косынки), перчатки, сапоги, нарукавники должны храниться в специально отведенных местах с соблюдением правил гигиены.
.8. Ветспециалисты и обслуживающий персонал, участвующий в проведении ветеринарных обработок и оказании лечебной помощи животным, обязаны соблюдать правила личной гигиены и уметь оказывать первую доврачебную помощь пострадавшим от несчастного случая.
.9. В случае обнаружения неисправности оборудования, инструментов, при нарушении норм безопасности, пожаре, аварии или травмировании работников немедленно сообщить руководителю работ.
.10. Лица, нарушившие требования настоящей инструкции, несут ответственность в порядке, установленном законодательством.
2. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ПЕРЕД НАЧАЛОМ РАБОТЫ.
2.1. Прежде, чем приступить к работе, ветспециалисту необходимо пере одеться в спецодежду, которую хранят в специальных шкафах. Надеть спецодежду необходимо так, чтобы не было свисающих концов, волосы заправить в головной убор.
2.2. Осмотреть рабочее место. Пол должен быть чистым, нескользким, проверить исправность станков, ограждений, освещения. Убедиться, что проходы не загорожены кормами, инвентарем, транспортными средствами.
.3. Подготовить необходимые препараты, инструменты, средства фиксации. Ветаптечка должна содержаться в порядке и чистоте, не допускается наличие препаратов без надписей.
3. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ВО ВРЕМЯ РАБОТЫ.
3.1. Обращение с животными должно быть спокойным. Недопустимы грубые окрики, побои.
.2. При проведении ветеринарных обработок крупный рогатый скот фиксируют путем удержания одной рукой за ноздри, а другой - за рог животного в стоячем положении.
.3. Перед введением препаратов интрацистернально животных фиксируют с помощью веревок за рога и носовых щипцов. Тазовую конечность фиксируют путем пережатия рукой коленной складки.
.4. Во время введения полистиролового молочного катетера в сосковый канал вымени и наложения мази на поврежденную кожу вымени ветеринарный специалист должен стоять со стороны головы животного.
.5. При проведении внутримышечных инъекций использовать стерильные иглы и шприцы. Перед введением препарата место инъекции обработать антисептиком.
.6. Во время проведения ветеринарных обработок и оказания лечебной помощи животным запрещается отвлекать ветспециалиста и обслуживающий персонал.
.7. В процессе работы следить за соблюдением чистоты рабочего места, а также за поведением обработанных животных.
. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ В АВАРИЙНЫХ СИТУАЦИЯХ.
.1. Если у животных проявляется отрицательная реакция по отношению к обслуживающему его работнику, надо сменить спецодежду, перевести животное на новое место или заменить работника.
.2. В случае резкого выражения неповиновения животного применить для фиксации носовые щипцы.
. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ПО ОКОНЧАНИИ РАБОТ.
.1. Убрать рабочее место. Ремни, веревки, использованные при фиксации животных очистить, высушить и сдать на хранение.
.2. Инструменты, использованные при работе, вымыть водой; иглы и шприцы простерелизовать.
.3. Руки вымыть теплой водой с мылом, протереть чистым сухим полотенцем. При работе с вакцинами руки дезинфицируют 70% спиртом.
.4. Спецодежду снять, подвергнуть дезинфекции, выполнить требования личной гигиены.
.5. Сообщить руководителю работ обо всех недостатках, имевшихся во время работы.
|
Наименование проекта Лечение смежных метритов и персистентных желтых тел у коров | ||||||||||||||||||||||||
|
Назначение Оздоровление дойного стада | ||||||||||||||||||||||||
|
Рекомендуемая область применения При лечении коров | ||||||||||||||||||||||||
|
Описание Описание к ИЛ 68-116-00 Причиной ассоциированных метритов и персистентных желтых тел являются воспалительные процессы в гениталиях животных и ряд факторов, обуславливающих их возникновение. Для лечения было отобрано 12 коров с персистентным желтым телом и одновременно - с острым эндометритом и 12 коров с персистентным желтым телом и хроническим эндометритом. Животных с одинаковыми заболеваниями разделили на две группы - опытную и контрольную. Коровам опытной группы с острым эндометритом внутриматочно вводили смесь 5-процентной настойки йода с 5-процентным раствором ихтиола в соотношении 1:30 -по 30 мл один раз в день. Первые три дня процедуру повторяли ежедневно, а затем -через день (3 - 4 раза). Смесь в матку вводили по принципу цервикального осеменения с ректальной фиксацией шейки матки, используя полистироловую пипетку и 50-миллилитровый стеклянный шприц. Животным контрольной группы по той же схеме вручную через влагалище вводили в матку по две фуразолидоновых палочки (свечи). Всем коровам после введения в матку препаратов делали массаж матки и яичников через прямую кишку по 3-5 минут. В начале лечения коровам обеих групп внутриматочно 1-2 раза с интервалом в 3-4 дня вводили бициллин-3 в дозе 8 тыс.ЕД на 1 кг массы. Коровам опытной группы с хроническим (скрытым) эндометритом вводили в шейку матки смесь скипидара с 10-процентным ихтиолом в соотношении 1:10 - 10 мл; контрольной - 10-процентный раствор ихтиола без скипидара - по 10 мл в течение двух недель. Всем коровам делали массаж матки и яичников по 3-5 минут 1-2 раза в день и один раз внутримышечно вводили бициллин-3 по 8 тыс. ЕД/кг. Таблица Эффективность лечения ассоциированных метритов и персистентных желтых тел у коров
Из таблицы видно, что при лечении острого эндометрита эффективность внутриматочного применения смеси настойки йода и ихтиола, по сравнению с введением в матку фуразолидоновых свечей, выше на 30-34%. В первые 30 дней после лечения забеременело из числа опытных 4 коровы (66,6%), а из контрольных - 2 (33,3%), не пришли в охоту в первый месяц после лечения 1 опытная (16,7%) и 2 (33,3%) контрольных коровы. При лечении хронических эндометритов результаты в опытной группе коров также были лучшими. При наблюдении за животными с острым эндометритом и персистентным желтым телом установлено, что количество и характер гнойно-катаральных выделений в первые 3-4 дня мало изменились. Затем выделения резко уменьшались, становились слизистыми и светлыми. К 11-12 дням выделения у всех коров полностью прекращались. Отсутствовали они и после массажа матки через прямую кишку. Шейка матки плотно закрывалась. У коров с хроническим эндометритом и персистентным желтым телом после введения в шейку матки скипидара с ихтиолом наблюдали гиперемию слизистой оболочки влагалища, устья шейки матки и незначительное беспокойство, увеличение гнойно-катаральных или - при скрытом процессе - слизистых выделений в первые 3-4 дня. Такое обострение хронического процесса вызвано действием скипидара. При этом усиливалось отторжение клеток и пролиферация здоровых клеточных элементов. У всех опытных коров желтые тела полностью рассасывались к 8-10 дню, у контрольных - к 10-12 дню. У всех коров начинали прощупываться растущие фолликулы. Таблица | ||||||||||||||||||||||||
|
Преимущества перед известными аналогами Более высокая, в сравнении с другими способами, эффективность лечения животных. | ||||||||||||||||||||||||
|
Стадия освоения Опробовано в условиях опытной эксплуатации | ||||||||||||||||||||||||
|
Результаты испытаний Технология обеспечивает получение стабильных результатов | ||||||||||||||||||||||||
|
Технико-экономический эффект Лечение обеспечивает повышение выздоровляемости на 30%; увеличение числа коров, забеременевших в первые 30 дней после лечения на 16,5-33,3%. | ||||||||||||||||||||||||
Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Функциональная морфология желтых тел яичников коров в норме и при патологии
На правах рукописи
Шарипов Ансар Радикович
Функциональная морфология желтых тел яичников коров в норме и при патологии
16.00.02 - патология, онкология и морфология животных
АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Уфа-2004
Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»
Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор
Сковородин Евгений Николаевич
Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук, профессор
Галеев Рафаэль Фаррахович
кандидат ветеринарных наук Буканов Азамат Мухтарович
Ведущая организация — ВГО «Башкирский институт перепод-
готовки и повышения квалификации кадров АПК»
Защита состоится «22» декабря 2004 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 220.003.02 при ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» 450001, г. Уфа, ул. 50 лет Октября, корпус 4.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Башкирский государственный университет»
Автореферат разослан «_18 » ноября 2004 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, доцент
Каримов Ф. А.
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Изучение функциональной морфологии органов размножения сельскохозяйственных животных в норме и при патологии является одной из наиболее сложных и актуальных проблем биологии и ветеринарной медицины (Шипилов, 1977; Соколовская, Милованов, 1981; Буянов, 1986; Эрнст, Сергеев, 1989; Валюшкин, Гуков, 1998; Миролюбов, 2003; Нежданов, 2003; Hammond, 1927; Hunter, 1980). Большой интерес к ним не исчерпывается чисто теоретическими соображениями, поскольку достижения в данной области непосредственно связаны с кардинальными вопросами воспроизводства, находят прямой и эффективный выход в практику (Полянцев, Синявин, 1989; Зверева, 1991; Иноземцев, Таллер, 1997; Шутов, Буканов, 2001; Пронин, 2003; Noakes, 1986).
Среди работ, раскрывающих проблемы функциональной морфологии яичников крупного рогатого скота (Хватов, 1955; Литвинова, 1964; Хонина, 1984; Курило, 1985; Еремин, 1987; Садирова, Хрусталева, 1993; Свиридов, 1993; Ско-вородин, 1999; Еремин, 2004; Erickson, 1966; Guraya, 1977; Singh, Roy, 1999), недостаточно исследований касающихся строения желтых тел и других лютеи-низированных структур яичников (Киршенблат, 1973; Долинина, 1977; Пономарева, 1981; Середин, 1998; Грига, 1999; Gasse, 1983; Konsaka et al. 1982; Weber et al., 1993; Singh, Roy, 1999). Дефицит информации, относящийся к морфологическому эквиваленту функции этой эндокринной железы, не позволяет эффективно решать целый ряд современных задач, поставленных практикой, таких как трансплантация эмбрионов, синхронизация охоты, профилактика симптоматического бесплодия, дифференциальная диагностика болезней органов размножения, их профилактика и лечение, разработка лютеолитических препаратов. По данным многих исследователей (Кононов, Буянов, 1973; Долинина, 1977; Муруев, 1985; Полянцев, Калашник, 1991; Середин, 1998; Грига, 1999; Нежданов, Душкаева, 1999; Jabb et al., 1985) персистентное желтое тело - одна из причин симптоматического бесплодия. Существующие в настоящее время методы диагностики, основанные на клиническом и, прежде всего, ректальном исследовании, не отражают всей сложности патологических процессов, происходящих в овариальных железах и матке при этой патологии. Не выяснены механизмы лютеинизации и лютеолизиса (Carlson et al., 1989; Bove et al., 2000; Murphy, 2000). Практически не изучены другие типы лютеиновых структур яичников, не выяснена их роль в патологии овариальных желез.
Цель и задачи исследований. Изучить функциональную морфологию желтых тел и лютеиновых структур яичников коров в норме и при патологии. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи.
1. Провести макроскопическое исследование органов размножения коров на протяжении стельности и полового цикла, при дисфункциях овариальных желез.
2. Определить органометрические показатели яичников коров и находящихся в них желтых тел на протяжении стельности и полового цикла, при дисфункциях яичников.
3. Изучить гистологические, гистохимические и гистоэнзиматические показатели желтых тел яичников стельных и циклирующих коров, персистент-ных желтых тел.
4. С помощью электронной микроскопии определить ультраструктурные показатели желтых тел яичников стельных и циклирующих коров, перси-стентных желтых тел.
5. Исследовать морфологию лютеолитических процессов в яичниках коров при беременности, половом цикле, персистенции желтых тел, а также в эксперименте после введения синтетического аналога простагландина Р2о (эстуфалан) с использованием биопсии желтого тела яичника. Научная новизна настоящей работы заключается в том, что впервые с
помощью комплекса клинико-гинекологических, патанатомических, макроскопических, морфометрических, гистологических, гистохимических, электронно-микроскопических методов, а также биопсии проведено исследование органов размножения и желтых тел яичников стельных и циклирующих коров, животных с дисфункциями овариальных желез на фоне патологии матки.
Подробно описаны макроскопические и морфометрические изменения в желтых телах яичников коров на протяжении беременности, полового цикла и при персистенции.
Дана подробная гистологическая, гистохимическая и ультраструктурная характеристика клеток, соединительной ткани, межклеточных взаимодействий, сосудов микроциркуляторного русла активно функционирующих желтых тел беременности, полового цикла, а также персистентных желтых тел яичников коров.
С помощью биопсии и исследования послеубойного материала показано ведущее значение нарушений микроциркуляторного русла, формирования внутриклеточных и мезенхимальных дистрофий, а также роль макрофагов в лютеолитических процессах, развивающихся в норме и при патологии в желтых телах яичников коров, а также при экспериментальном введении аналога про-стагландина Р2а (эстуфалан).
Практическая ценность работы. Описана морфология яичников коров в норме и при дисфункциях яичников. Установленные макроморфологические критерии структуры желтых тел яичников крупного рогатого скота в разные сроки стельности, полового цикла и персистенции можно использовать с целью установления состояния репродуктивной системы в норме и при патологии.
Доказана возможность проведения биопсии желтого тела яичника для диагностики дисфункций овариальных желез и при экспериментальном изучении действия лютеолитических и других биологически активных препаратов на структуру овариальных желез.
Результаты диссертационной работы, иллюстративный материал используются в учебном процессе на кафедре акушерства, патанатомии и хирургии Башкирского государственного аграрного университета.
Полученные данные включены в монографию "Возрастная морфология органов размножения самок крупного рогатого скота" (Сковородин Е. Н., Мень-кова А. А., Брянск, 2002. 208 с.) и в учебное пособие «Руководство к лабора-
торным занятиям по патологической анатомии животных» (Кадыров У. Г, Ско-вородин Е. Н., Уфа, 2003.180 с).
Они также могут быть использованы для разработки способов диагностики болезней яичников у крупного рогатого скота и других видов животных, оценки фармакологических препаратов и рационов, а также в учебных целях по курсам анатомии, гистологии, акушерства и биотехнологии, патологической анатомии, при написании учебников и монографий по сравнительной и патологической морфологии, ветеринарной гинекологии.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и получили положительную оценку на Международной научно-практической конференции «Проблемы акушерско-гинекологической патологии и воспроизводства сельскохозяйственных животных», посвященной 100-летию А. П. Студен-цова (Казань, 2003), Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 2003), Международной научно-практической конференции «Проблемы и пути интенсификации племенной работы в отраслях животноводства» (Уфа, 2004), УИ Конгрессе Международной ассоциации морфологов (Казань, 2004), расширенном заседании кафедры акушерства, патанатомии и хирургии Башкирского государственного аграрного университета (Уфа, 2004).
Публикации. Положения диссертационной работы достаточно полно отражены в трех научных статьях.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 152 страницах машинописного текста, состоит из разделов «Общая характеристика работы», «Обзор литературы», «Собственные исследования», «Обсуждение полученных результатов», «Выводы», «Практические предложения», «Список литературы». Список использованной литературы включает 225 источников, в том числе 106 иностранных авторов. Диссертация содержит 4 таблицы, 80 рисунков, в том числе 8 макрофотографий, 12 микрофотографий, 55 электронно-грамм и 5 графиков.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
1. Макроскопическая и органометрическая характеристика овариальных желез и желтых тел яичников коров на разных сроках стельности и полового цикла, персистентных желтых тел.
2. Гистологическая и гистохимическая характеристика желтых тел яичников коров на первом-втором месяцах стельности, на 8 - 12-е сутки полового цикла, персистентных желтых тел разной морфофункциональной активности.
3. Ультраструктура лютеоцитов, межклеточных взаимодействий, элементов стромы и микроциркуляторного русла желтых тел яичников коров на первом-втором месяцах стельности, на 8 - 12-е сутки полового цикла, персистентных желтых тел разной морфофункциональной активности.
4. Морфологические проявления лютеолитических процессов в желтом теле полового цикла после экспериментального введения аналога простагландина Б (эстуфалан).
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материал и методы исследований
Работа выполнена в 2001 - 2004 годах на кафедре акушерства, патанато-мии и хирургии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет», в учебно-опытном хозяйстве БГАУ «Мидовское» Уфимского района Республики Башкортостан, в убойном цехе Уфимского мясоконсервного комбината, а также в лаборатории морфологии, гистохимии и электронной микроскопии Всероссийского центра глазной и пластической хирургии «Аллоплант».
В хозяйстве исследовали условия кормления, содержания и эксплуатации животных, анализировали воспроизводительную функцию коров с учетом распространенности патологии половых органов. Клиническое состояние животных определяли по общепринятым в ветеринарной медицине методам, а также выборочного биохимического исследования крови на содержание общего белка, неорганического кальция, фосфора, кислотной емкости и каротина.
На основании этих данных отбирали животных и делили их на следующие группы. Первая группа — 27 стельных коров (по три коровы на каждый месяц стельности). Вторая группа — 21 корова на разных стадиях полового цикла. Половой цикл условно дели на семь стадий (одна стадия составляла последовательно три дня). Третья группа - бесплодные коровы с дисфункциями яичников, а именно: с персистентным желтым телом (п = 10), с гипофункцией яичников (п = 5), с лютеиновыми и фоликулярными кистами яичника (п = 10).
На мясокомбинатах проводили тщательный послеубойное исследование органов коров с последующим макроскопическим, гистологическим, гистохимическим и электронномикроскопическим изучением полученного материала.
После извлечения проводили измерения различных отделов органов размножения. У коров яичники осматривали, отмечая их величину, наличие фолликулов, желтых тел, красных и белых атретических тел. Разрезали поперечно с помощью пластинчатого аппарата, состоящего из двух штоков от шприца типа "Рекорд-Правац" и закрепленных на них с помощью шайб лезвиями от безопасных бритв. Полученные пластинки осматривали и фиксировали в жидком азоте, жидкости Карнуа, 10% растворе нейтрального формалина, в охлажденном 2,5% глютаральдегиде.
Материал, зафиксированный в жидкости Карнуа или в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживали и заливали в парафин по схеме Г. А. Меркулова (1969). С помощью микротома получали срезы толщиной 5-6 мкм которые после депарафинации окрашивали гематоксилином и эозином, паноптиче-ским методом по A. Pappenheim. Коллагеновые волокна выявляли по ван Гизо-ну. Дезоксирибонуклеопротеиды (ДНП) и рибонуклеопротеиды (РНП) - по L. Einarson, по J. Brchet, гликоген и нейтральные гликозаминогликаны - по А. Л. Шабадашу, кислые гликозаминогликаны - по Н. F. Steedman. Из материала, фиксированного в формалине, срезы, полученные на замораживающем микротоме, окрашивали Суданом черным по Лизону, Суданом III по Дадди (Конон-ский, 1976).
Из кусочков яичников, фиксированных в жидком азоте, в криостате получали срезы толщиной 10 мкм и в них, по прописям Пирса (1962) и Лилли (1969), выявляли активность дегидрогеназ сукцината (СДГ), лактата (ЛДГ), ни-котинамидадениндинуклеотидфосфата восстановленного (НАДНгДГ), никоти-намидадениидинуклеотидфосфата восстановленного щелочной и
кислой фосфатазы по Берстону в модификации Лойда и др. (1982).
Электронную микроскопию проводили по общепринятой методике. Материал фиксировали в охлажденном 2,5 % глютаральдегиде на фосфатном буфере с рН 7,3 с последующей дофиксацией 1% раствором осьмиевой кислоты на фосфатном буфере. Кусочки заливали эпон-аралдитной смесью. После получения и окраски полутонких срезов, блоки окончательно затачивали и готовили ультратонкие срезы на ультратоме LKB-III-8800A (Швеция), монтировали их на опорные сетки и контрастировали цитратом свинца по Е. Reynolds (1963). Просматривали на электронном микроскопе JEM-100CXII при увеличениях на 6000-27000.
В криостатных срезах материала, фиксированного в жидком азоте, изучали активность окислительно-восстановительных и гидролитических ферментов. Гистохимическую активность энзимов оценивали по В.В.Семеновой-Тян-Шанской и ЛАСайковой (1977) с использованием микроскопа МБР-3 (ок.7, об. 90), для чего в тубус микроскопа вставляли измерительный окуляр с сегкой, содержащей 16*16 квадратов (8*8 мм), и с ценой деления квадрата 0,5*0,5 мм. Сетку накладывали на различные участки срезов желтых тел, подсчитывали количество зерен продукта гистохимической реакции.
В поперечных срезах яичника, проходящих через весь орган вплоть до брыжейки, подсчитывали число лютеиновых образований, а также фолликулов с учетом их состояния. При этом использовали Международную гистологическую номенклатуру (1983) и классификацию овариальных фолликулов, предложенную Л. К. Эрнстом и др. (1980) с учетом особенностей ее приложения к гистологическим срезам. Количество гликогена, нуклеопротеидов, гликозами-ногликанов и липидов оценивали по балльной шкале.
Изучение морфологического проявления лютеолитической активности синтетического аналога простогландина Fzu (эстуфалан) было проведено на 24 коровах с использованием биопсии желтого тела яичника. 18-ти коровам опытной группы эстуфалан вводили однократно внутримышечно в дозах 250, 500 и 1000 мкг на восьмые-двенадцатые сутки полового цикла на фоне активно функционирующих желтых тел. Биопсию желтого тела яичника проводили двукратно через 48 часов (девять коров) и 96 часов (девять коров) после введения препарата. Коровам контрольной группы (шесть коров) вводили физиологический раствор и проводили биопсию желтого тела двукратно через 48 часов (три коровы) и 96 часов (три коровы).
Биопсию желтого тела яичника осуществляли следующим образом. Корову фиксировали. Место пункции, находящееся в области средней трети линии, соединяющей наружный бугор подвздошной кости с кожной подхвостовой складкой, выстригали и дезинфицировали. При исследовании правого яичника левую руку вводили в прямую кишку. Правой рукой делали укол иглой с манд-
реном перпендикулярно поверхности крупа. Иглу продвигали вглубь тканей настолько, чтобы ее конец можно было обнаружить пальцем через стенку прямой кишки. Затем захватывали яичник, оттягивали его каудально и несколько вверх, к своду тазовой полости, где находится конец иглы. Правой рукой иглу вводили глубже, извлекали мандрен и прокалывали желтое тело. При этом небольшая часть ткани остается в просвете иглы. Иглу извлекали, ее содержимое помещали в фиксатор или на предметное стекло. При проведении биопсии левого яичника пункцию проводили левой рукой, а яичник через прямую кишку фиксировали правой.
Количественные данные подвергали математической обработке с помощью прикладных программ на персональном компьютере с использованием критерия Стьюдента.
2.2 Результаты собственных исследований
2.2.1 Макроскопическая характеристика яичников стельных и бесплодных коров
Масса яичника, содержащего желтое тело, изменяется на протяжении беременности. К концу первого месяца стельности этот показатель достигал 12,1 гр., к двухмесячному возрасту достоверно увеличивался на 20,7 % (14,6 гр.), к трем месяцам достоверно снижается на «27,4 % (10,6 гр.), а дальнейшем оставался относительно стабильным (9,3 — 10,1 гр.). Масса яичника, не содержащего желтое тело, на протяжении стельности остается относительно одинаковой (5,3 -6,3гр.).
Изменяется величина желтого тела беременности. К двухмесячному возрасту диаметр желтого тела достоверно увеличивается на 39,2 % и достигает в среднем 28,4 мм. К трехмесячному возрасту этот показатель достоверно снижается на 18,7 % (23,1 мм) и в дальнейшем, несколько снижаясь, остается относительно стабильным (18,9-21,4 мм).
Желтые тела беременности располагаются преимущественно в правом яичнике. Их локализация соответствует расположению плода. К двум месяцам оно возвышается над поверхностью яичника, в центре имеется углубление, под капсулой хорошо выражены кровеносные сосуды. В более поздние сроки кровеносные сосуды видны не так ясно, и поверхность желтого тела становится более гладкой.
Форма яичников стельных коров бугристая вследствие наличия не только желтого тела, но и полостных фолликулов различной величины, выступающих над поверхностью органа. В яичнике с желтым телом число небольших полостных фолликулов диаметром до 10 мм достоверно снижается к двухмесячному возрасту на 44,8 % (8,2), когда желтое тело беременности достигает своего расцвета, в дальнейшем достоверно повышается на 75,6 % (14,4), достигая своего максимума к четырем месяцам (20,1). В дальнейшем снижается к шести месяцам стельности, оставаясь в дальнейшие сроки относительно стабильным (8,1 -12,3). Аналогичная закономерность изменения количества полостных фоллику-
лов диаметром до 10 мм выявлена в яичнике без желтого тела.
На протяжении первых шести месяцев беременности в яичниках можно обнаружить один — два крупных полостных фолликула диаметром более 10 мм. В более поздние сроки эти структуры обнаруживаются чрезвычайно редко.
Число красных тел в обоих яичниках достоверно не изменяется на протяжении беременности. Мы рассматриваем их как остатки желтых тел предыдущей беременности или половых циклов.
Число белых атретических тел, достоверно увеличивается к двум месяцам стельности, когда количество полостных фолликулов снижается. К трем месяцам этот показатель достоверно снижается, а число полостных фолликулов повышается. К четырем месяцам достоверно увеличивается и, снизившись к пяти месяцам, остается стабильным. В яичнике без желтого тела наблюдается такая же закономерность, однако менее выраженная.
У коровы во время полового цикла яичники представляют собой парные органы, лежащие в тазовой или брюшной полости близко к яйцепроводу и рогам матки. Они имеют овальную форму, массу 20-25 г, объем 21-25 см3, длину 5-9 см. В связи с тем, что значительная часть яичника образована временными структурами, такими как фолликулы и желтые тела, относительные его размеры меняются в течение цикла.
ГТерсистентные желтые тела на фоне субъинволюции матки характеризовались крупными размерами (20 — 25 мм в диаметре), выступают на поверхность яичника на 5 — 8 мм, грибовидные, с углублением в центре. Яичник, содержащий желтое тело, обычно бобовидной формы, достигает массы 10-11 гр., длины 35 - 40 мм, высоты 20 - 25 мм, толщины 15-30 мм. Он содержит много фолликулов — от едва заметных глазом, до достигающих величины красных и белых атретических тел. Парный яичник массой 6-8 гр., веретенообразной формы, также может содержать более мелкие желтые тела и фолликулы, достигающие 9 мм в диаметре.
Персистентные желтые тала в яичниках животных с хроническим эндометритом располагаются внутри овариальной железы и имеют меньший размер (10-15 мм в диаметре). На поверхность яичника выступают незначительно, без грибовидного возвышения. Яичник, содержащий персистентное желтое тело длиной 34 - мм, высотой 20 - мм, толщиной 18 - мм, массой 5 - 8 гр. содержит умеренное количество фолликулов, некоторые из которых достигают 10 мм в диаметре. Парный яичник массой 3—6 гр., бобовидной формы, длинной 30 — 35 мм, высотой 15-20 мм, толщиной 5-10 мм, не содержит желтые тела.
У животных с клиническим диагнозом гипофункция яичников после убоя овариальные железы были небольшого размера. Их длина колебалась в пределах от 3 до 4,5 см, ширина - от 1,5 до 2,5 см, высота — от 1,5 до 2,5 см, а объем варьировал в диапазоне от 9 до 28 см3.
2.2.2 Гистологические и гистохимические показатели желтых тел яичников крупного рогатого скота
Поверхность желтого тела беременности покрыто соединительнотканной оболочкой, от которой внутрь его отходят перегородки, содержащие кровеносные и лимфатические сосуды. При окраске по Ван Гизону фуксинофильных волокон не выявляли. Паренхима желтого тела беременности состоит, в основном, из крупных лютеиновых клеток с зернистой цитоплазмой, редко с небольшими вакуолями. В среднем диаметр, лютеоцитов равнялся 27,1±5,3 мкм. Ядро у них крупное, светлое, гетерохроматин располагается по периферии кариоплазмы. Его средний диаметр равен 10,1±1,2 мкм. Встречаются клетки очень крупных размеров, с одним крупным ядром или двумя ядрами. Реже встречаются клетки несколько меньшей величины с крупными вакуолями и небольшим гиперхромным ядром.
Аргирофильные волокна образуют в желтом теле сеточку, в ячейках которой располагаются лютеиновые клетки. По ходу этих волокон располагаются тека-лютеиновые клетки, они более мелкие, вытянутой формы с небольшими ядрами. Их средний диаметр равняется 11,9+2,3 мкм и существенно не отличается от величины этих клеток в желтом теле полового цикла. Величина ядра в среднем составляет 8,5+1,2 мкм в диаметре.
Гликоген выявляли только в капсуле и стенках кровеносных сосудов желтого тела. Рибонуклеопротеиды в цитоплазме крупных лютеиновых клеток содержатся в среднем количестве. Нейтральных жиров в паренхиматозных элементах мало. В крупных лютеиновых клетках они располагаются пылевидно, а в тека-лютеиновых — в виде капель средней величины. Фосфолипиды распределены в паренхиме желтого тела беременности равномерно, в виде мелких капель.
Желтое тело полового цикла достигает максимального расцвета на деся-тые-двенадцатые сутки полового цикла. Оно покрыто соединительнотканной капсулой, от которой к центру направляются тонкие прослойки, содержащие кровеносные и лимфатические сосуды. В середине желтого тела располагается "сердцевина" или "ядро", сформированное из волокнистой соединительной ткани. В единичных случаях в середине желтого тела полового цикла мы обнаруживали полость диаметром от нескольких миллиметров до одного сантиметра. В полости находится мутная тягучая жидкость, содержащая клетки крови и слущенный эпителий. Полость выстлана плоским эпителием и окружена волокнистой соединительной тканью. Фуксинофильных волокон при окраске по Ван Гизону в строме желтого тела полового цикла не выявлено.
Между прослойками соединительной ткани располагаются паренхима желтого тела, представленная крупными лютеиновыми клетками, со средним диаметром 24,2+2,8 мкм. Они имеют зернистую цитоплазму и светлое округлое ядро, расположенное в центре. Средний его диаметр равнялся 9,4+0,9 мкм. Хроматин в виде мелких гранул располагается по периферии ядра. В центре находится крупное ядрышко. Иногда встречаются крупные лютеоциты с вакуоли-зированной цитоплазмой, в которой выявлялись липиды. По сравнению с жел-
тым телом беременности гистограмма распределения диаметров гранулезо-лютеиновых клеток свидетельствует о том, что в последнем больше относительно крупных клеток, хотя по средним показателям разница не достоверна.
По ходу соединительнотканных трабекул и вокруг крупных лютеиновых клеток располагаются мелкие тека-лютеиновые клетки. В среднем их диаметр равнялся 12,1+1,7 мкм. Форма клеток вытянутая или полигональная. Ядра относительно крупные - 8,1 ±0,9 мкм в диаметре, более темные вследствие равномерного распределения гранул хроматина.
Клеточный состав в различных участках желтого тела полового цикла: по периферии преобладают мелкие лютеоциты, а ближе к центру крупные. По мере инволюции желтого тела, деструктивные изменения прежде всего обнаруживаются в крупных лютеиновых клетках. Они выражаются признаками белково-жировой дистрофии, пикнозом ядра или развитием апоптоза. Участки, где располагались крупные лютеиновые клетки, заполняются соединительной тканью. Характерно, что на этом фоне мелкие лютеоциты сохраняются длительное время без видимых изменений. В стреме появляются фуксинофильные коллагено-вые волокна, утолщаются стенки кровеносных сосудов.
Персистентные желтые тела имеют разную структуру и их можно разделить на два типа. У одних животных они состоят в основном из крупных клеток с темной эозинофильной вакуолизированной цитоплазмой. Соединительнотканные прослойки содержат мало фуксинофильных волокон. Характерно, что клетки располагаются неравномерно. В центре желтого тела группы клеток с пикнотизированными ядрами и темной эозинофильной цитоплазмой. Тека-лютеиновых клеток в этих участках относительно больше. По периферии люте-оцитов в состоянии жировой дистрофии меньше.
У других животных персистентные желтые тела имеют более толстую капсулу и соединительнотканные прослойки. Лютеиновые клетки сморщены и вокруг них образуются полости. Тека-лютеиновых клеток больше, и они содержат капли жира. Характерны выраженные фиброзные изменения кровеносных сосудов, накопление в их стенке кислых гликозаминогликанов, что свидетельствует о гиалинозе соединительной ткани. Тучные клетки многочисленны, гранулированы, в состоянии низкой морфофункциональной активности.
При гипофункции яичников структуры, напоминающие желтые тела, почти полностью состоят из грубоволокнистой, с участками гиалина, соединительной ткани и единично расположенными сморщенными лютеиновыми клетками. Кроме того, имелись структуры со своеобразным строением. Центр их заполнен грубоволокнистой соединительной тканью, волокна которой идут от белочной оболочки, и радиально отходящими от центра прослойками, между которыми располагаются сморщенные лютеиновые клетки.
В ферментном отношении более активными являются желтое тело беременности и циклическое желтое тело.
Проведенные исследования показали, что одной из причин симптоматического бесплодия коров является персистентное желтое тело яичника. Последнее по своим гистологическим, гистохимическим и гистоэнзиматическим свойствам отличается от желтого тела полового цикла и характеризуется атрофией и
жировой дистрофией лютеоцитов, нарастанием фиброзных изменений соединительной ткани и гиалинозом сосудов. Важную роль в этих процессах играет снижение активности окислительно-восстановительных и гидролитических ферментов, которое особенно ярко выражено в состоянии инволюции.
Для фолликулярных кист характерно не только лютеинизация отдельных участков стенки кист, но и наличие значительного количества лютеиновой ткани, расположенной в корковом веществе яичников и образованной вследствие лютеинизации крупных полостных фолликулов. Структура этой ткани имеет своеобразные черты, не обнаруживаемые при других состояниях яичника. Прежде всего, эти образования имеют сплющенную форму и располагаются между корковым веществом и кистой, что они происходят из лютеинизированных фолликулов, имевших полость, а не желтых тел возникающих в результате овуляции.
Гистологическая структура лютеиновой ткани характеризуется наличием хорошо сохранившихся крупных лютеиновых клеток диаметром в среднем 21,2±2,4 мкм. Они имеют вытянутую форму и крупные округлые светлые ядра. Лежат они в виде отдельных скоплений. В то же время мелких тека-лютеиновых клеток мало. Они заполнены пигментом и концентрируются преимущественно вокруг кровеносных сосудов и по ходу трабекул. Гистохимическая активность ферментов в этих структурах относительно высокая и приближается показателям в персистентных желтых тел.
2.2.3 Ультраструктурная характеристика желтых тел коров 2.2.3.1 Ультраструктурная характеристика желтых тел стельных коров
При ультраструктурном исследовании желтых тел коров двух месячной стельности (стадия расцвета желтых тел беременности) различали несколько типов лютеоцитов. Прежде всего, это крупные лютеиновые клетки. Они характеризуются следующими показателями: ядро крупное светлое, хроматин располагается по краям в виде глыбок, имеющих сетчатое строение, а также вокруг ядрышка. Иногда в ядрах можно обнаружить участки цитоплазмы, появляющиеся там в результате тангенциальных срезов инвагинаций, что свидетельствует об обширных контактах ядра и цитоплазмы. Ядерная мембрана имеет типичное строение и содержит большое количество пор.
Цитоплазма богата органеллами, имеющими характерное строение. Митохондрии в цитоплазме распределены относительно равномерно. В крупных лютеоцитах они чаще удлиненные, извитые или округлые, в зависимости от того, как прошел срез. На продольных срезах митохондрий их кристы обычно расположены перпендикулярно или под углом к внутренней митохондриальной мембране. Но иногда располагаются и параллельно ей. На поперечном срезе митохондриальные кристы расположены радиально. Кристы митохондрий, как правило, пластинчатого (ламеллярного) типа.
В цитоплазме достаточно много лизосомоподобных и плотных телец, которые располагаются по периферии клетки и контактируют с митохондриями и
эндоплазматическим ретикулумом. Последний образован мелкими округлыми пузырьками или небольшими уплощенными мешочками, наружная мембрана которых обычно не содержит рибосом. В то же время, цитоплазме крупных лю-теоцитов очень редко встречаются липосомы.
Между пузырьками эндоплазматического ретикулума и митохондриями располагаются группы свободных рибосом, образующих розетки. Количество таких групп в крупных лютеоцитах заметно большее, чем в других клетках. Ближе к ядру обычно располагаются узкие каналы гранулярного эндоплазматического ретикулума в виде локальных скоплений (эргастоплазма). Эти усыпанные рибосомами цистерны очень плотно упакованы и лежат параллельно друг другу.
Комплекс Гольджи крупных лютеоцитов хорошо развит и расположен вблизи ядра. Он представлен параллельно ориентированными ламеллами, небольшими вакуолями и микропузырьками, гладкими и окаймленными. Необходимо подчеркнуть, что комплекс Гольджи, в крупных лютеоцитах развит очень хорошо, часто встречается при просмотре ультратонких срезов. Вблизи комплекса Гольджи обнаруживается то большее, то меньшее количество плотных телец, имеющих различную форму и отграниченных четко выраженной однослойной мембраной. По своей ультраструктурной организации они соответствуют лизосомам. Иногда обнаруживаются вторичные лизосомы, образованные в результате слияния вакуолей с первичными лизосомами.
Вторая разновидность крупной лютеиновой клетки характеризуется наличием в цитоплазме липосом, часто контактирующих с гранулярным эндоплазматическим ретикулум. Ядро более темное. Митохондрий в цитоплазме меньше, они более мелкие, по форме чаще округлые или овальные. Локализуются в зонах, где отсутствуют липосомы. Групп свободных рибосом относительно мало. Комплекс Гольджи встречается реже, чем у предыдущего типа клеток. При этом, чем больше в клетке липосом, тем ярче выражены признаки низкой функциональной активности. Ближе к мембране клеток встречаются окаймленные пузырьки с «пушистой» оболочкой.
Третий тип клеток - тека-лютеиновые. Они характеризуются удлиненной формой. Ядро также удлиненное с выраженными инвагинациями и выпячиваниями. На некоторых срезах инвагинации напоминают внутриядерные включения. По периферии ядра хроматин расположен в виде относительно крупных глыбок, а в кариоплазме - он мелкогранулярный и пылевидный. Ядрышко располагается эксцентрично и имеет следующее строение: нуклеолонемная часть выражена хорошо, фибриллярные зоны невелики и не выделены в обособленные участки. Ядерная оболочка с хорошо выраженным трехслойным строением и многочисленными ядерными порами. Все это свидетельствует о высоком уровне синтеза белка.
Цитоплазма богата митохондриями, собранными группами у одного из полюсов ядра. Митохондрии округлые, овальные, мешковидные, реже - удлиненные. Их внутренняя структура характеризуется тем, что кристы обычно сконцентрированы в одной части органеллы. Они короткие и расположены перпендикулярно, под углом к внутренней митохондриальной мембране или
радиально. На поперечном срезе митохондриальные кристы расположены ра-диально. Кристы митохондрий, как правило, пластинчатого (ламеллярного) типа. Внутренняя часть крист светлая, а межкристное пространство темное, содержит пылевидную массу. В отдельных митохондриях обнаруживаются внут-римитохондриальные электронноплотные гранулы.
Между митохондриями и ядром располагаются профили гранулярного эндоплазматического ретикулума и хорошо развитого комплекса Гольджи. Между перечисленными органеллами располагаются округлые и вытянутые пузырьки гладкой эндоплазматической сети. Свободных рибосом мало. Характерно наличие единичных лизосом и электронноплотных телец.
Наружная плазматическая мембрана имеет глубокие впячивания и выросты, направленные в обширное межклеточное пространство, окружающее клетки. Часто с одной из сторон клеток идут нежные коллагеновые волокна и располагаются другие тека-лютеиновые клетки.
Частой находкой в строме желтых тел беременности являются малодиф-ференцированные клетки, фибробласты и макрофаги, расположенные в межклеточном веществе, содержащим многочисленные вакуоли и тельца различной электронной плотности.
Структуированные межклеточные контакты особенно выражены между крупными лютеоцитами и имеют вид простого контакта. При этом плазматические мембраны разделены пространством 15-20 нм. В некоторых участках устанавливали контакт в виде «замка», который представляет собой выпячивание поверхности плазматической мембраны одной клетки в инвагинат (впячивание) другой. На срезе такой тип соединения напоминает плотничий шов. Межмембранное (межклеточное пространство) и цитоплазма в зоне «замков» имеет те же характеристики, что и в зонах простого контакта.
Межклеточные контакты между крупными лютеоцитами и другими клетками простые, но с широкими межмембранными щелями (более 20 нм), содержащими межклеточное вещество, вакуоли и отростки, контактирующие между собой.
Между тека-лютеиновыми клетками эти пространства еще более широкие и менее электронноплотные. В них наряду с клеточными отростками можно обнаружить миелиноподобные тельцы, капли липидов, коллагеновые волокна.
Сосуды желтого тела беременности хорошо развиты. На полутонких срезах видно, что внутренняя оболочка артериол состоит из эндотелиальных клеток, для которых характерна выраженная неровность поверхности и выступающие в просвет сосуда.
При ультраструктурном исследовании кровеносных капилляров хорошо видно, что его стенка состоит из эндотелиальных клеток, образующими между собой стыки по типу «замка» и зоны слипания. Эндотелиальные клетки расположены на хорошо выраженной базальной мембране, контактирующей с отростками окружающих лютеоцитов, фибробластов, коллагеновыми волокнами и аморфным веществом, что свидетельствует о высокой проницаемости капилляра. Хорошо выражены фенестры. Ядра эндотелиальных клеток характеризуются крупными размерами относительно цитоплазмы. Примерно половина их
объема заполнена хроматином. Хроматин располагается по периферии ядра, а в центральной части он мелкодисперстный. Цитоплазма светлая. Органеллы немногочисленны и располагаются в околоядерной зоне.
Цитоплазматическая мембрана, расположенная внутри капилляра, покрыта слоем гликопротеидов (параплазмолеммальный слой) и образует хорошо выраженные «ворсинки» которые увеличивают поверхность эндотелия. Все это свидетельствует об интенсивном транспорте веществ через стенку капилляра. Кроме того, вдоль внутренней и наружной поверхностей эндотелиальных клеток располагаются пиноцитозные пузырьки, отображающие трансэндотелиаль-ный транспорт различных веществ и метаболитов.
Очень хорошо выражены цитоплазматические выросты. Наружная поверхность сосудов снабжена хорошо выраженными отростками, цитоплазма которых содержит свободные рибосомы, а на мембране ядра эндотелиоцита заметны инвагинации и выступы, многочисленными поры.
Строение капилляров желтого тела имеет органные особенности которые характеризуются наличием многочисленных и узких капилляров. На своей лю-минальной поверхности они несут большое число микроворсинок, разнообразных по величине и форме, которые в некоторых случаях образуют ундулирую-щие мембраны. Характерны выросты и на базальной поверхности, которые перфорируют межклеточный компонент базального слоя и вступают в контакт с клетками окружающей паренхимы. Капилляры можно отнести ко второму типу - фенестрированный тип с локальными истончениями (фестрами) цитоплазмы эндотелия, что характерно для органов с выраженной эндокринной активностью.
2.2.3.2 Ультраструктурная характеристика желтых тел полового никла
Изучали ультраструктурную характеристику желтых тел коров на восьмые — двенадцатые сутки полового цикла. Установили, что крупные лютеоциты содержат ядро с большим количеством хроматина. Последний расположен не только по периферии, но ив других частях ядра в виде глыбок. Ядро обычно несколько вытянутое. При этом ярко выражена инвагинации оболочки ядра, по сравнению с желтыми телами стельных коров. Ядрышко небольшое, расположено в центре ядра, с хорошо выраженными фибриллярной и гранулярной зонами.
В цитоплазме число митохондрий снижено, но они более крупные. Встречаются гипертрофированные митохондрии с аномальной внутренней структурой, содержащей крупные вакуоли и электронноплотные включения. Преобладают митохондрии округлой формы, реже — овальной или вытянутой. Внутренняя структура митохондрий несколько меняется. Появляется значительное число органелл с трубчатыми кристами с расширенными профилями и прозрачным содержимым.
Гладкий эндоплазматический ретикулум образован мелкими округлыми пузырьками или небольшими овальными мешочками, наружная мембрана которых не содержит рибосом. Характерно, что эти структуры очень хорошо раз-
виты в инвагинациях ядра. Между пузырьками эндоплазматического ретикулу-ма и митохондриями располагаются группы свободных рибосом, образующих розетки. Этих структур относительно много. Гранулярный эн'доплазматический ретикулум умеренно развит и представлен короткими профилями, расположенными в перинуклеарной зоне клетки.
Комплекс Гольджи крупных лютеоцитов хорошо развит и расположен вблизи ядра. Он представлен параллельно ориентированными плотно расположенными ламеллами с узкими профилями.
Число плотных телец, имеющих различную форму и отграниченных четко выраженной однослойной мембраной, значительное. Во всех клетках, но в разной степени распространенности встречаются липосомы и аутофагосомы.
Четкой дифференциации между крупными лютеоцитами с разной синтетической активностью нет. Различия выражены между функционирующими клетками и гибнущими, структура которых описана ниже.
Тека-лютеиновые клетки желтого тела полового цикла содержат ядро вытянутой формы с хроматином, расположенным по периферии. В других зонах клетки он менее конденсирован и лежит в виде мелких гранул или пылевидной зернистости. Ядрышко хорошо выражено, располагается эксцентрично. Ядерная оболочка с хорошо выраженным трехслойным строением и многочисленными ядерными порами.
Цитоплазма бедна митохондриями, которые собраны группами у одного из полюсов ядра. Но как и в случае с крупными лютеиновыми клетками они очень крупные, с трубчатыми кристами. Внутренняя часть крист светлая, а межкристное пространство темное, содержит пылевидную массу. В отдельных митохондриях обнаруживаются внутримитохондриальные электронноплотные гранулы.
Между митохондриями и ядром располагаются профили гранулярного эндоплазматического ретикулума. Комплекс Гольджи обнаруживается в виде расположенных в узкой части цитоплазмы диктиосом. Это удлиненные, плотно расположенные мембранные структуры, практически не имеющие прослойки гиалоплазмы. Гладкая эндоплазматическая сеть умеренно развита и представлена округлыми, чаще вытянутыми структурами. Свободных рибосом не много. Встречаются единичные лизосомы, электронноплотные телеца, липосомы.
Наружная плазматическая мембрана имеет неглубокие впячивания и выросты, направленные в расширенное межклеточное пространство.
Строма желтого тела полового цикла богата фибробластами, фиброцитами, малодифференцированными макрофагами. Последние содержат части гибнущих клеток и липиды.
В желтом теле полового цикла межклеточные контакты между крупными лютеоцитами имеют вид простого контакта с широкими пространствами. Это характерно и для взаимодействий лютеоцитов не только между собой, но и с другими клетками. В межклеточных пространствах содержатся межклеточное вещество, вакуоли и отростки, редко контактирующие между собой.
Между гибнущими клетками эти пространства еще более широкие и менее электронноплотные. В них наряду с клеточными отростками можно обна-
ружить миелиноподобные тельца, капли липидов, коллагеновые волокна, фрагменты мембран и ультраструктур.
Строма желтого тела полового цикла представлена более грубыми колла-геновыми волокнами, расположенными в виде плотных пучков, по ходу которых расположены фибробласты, фиброциты и малодифференцированные макрофаги.
Сосуды желтого тела полового цикла развиты. Но капилляры находятся в разном морфофункциональном состоянии. Одни из них сильно расширены, кровенаполнены, в некоторых участках разрушены. Фенестры выражены плохо. Ядра эндотелиальных клеток пикнотизированы, гиперхромные. Цитоплазма также темная. Органеллы малочисленны и представлены единичными митохондриями с темным матриксом, лизосомами и темными профилями эндоплаз-матической сети. Вокруг таких сосудов отмечается выраженный периваскуляр-ный отек.
Часть капилляров, напротив сужены до исчезновения внутреннего просвета. Рисунок микроворсинок сглажен и цитоплазма эндотелия практически не содержит пиноцитозных пузырьков. Выросты и на базальной поверхности эн-дотелиоцита отсутствуют, и межклеточный компонент базального слоя частично разрушен. В некоторых случаях, наряду с периваскулярным отеком, наблюдается контакты с макрофагами. Последние, вероятно, участвуют в разрушении базальной мембраны и стенки капилляра.
Можно описать механизмы лютеолизиса. Прежде всего, это упрошение межклеточных контактов с развитием широких пространств. Таким образом клетки изолируются друг от друга и не способны кооперироваться для выполнения своей функции. Не последнюю роль играет соединительная ткань, которая фиброзно изменяется, становится грубоволокнистой и приводит к атрофии паренхимы железы.
Несомненна роль в лютеолизисе нарушений циркуляции крови в регионе микроциркуляторного русла. Расширение или сужение сосудов, дистрофия, разрушение их стенок и базальной мембраны с последующим фагоцитозом, пе-риваскулярные отеки и нарушения реологических свойств крови, очевидно, является пусковым механизмом последующих атрофических, дистрофических процессов в паренхиме и фиброзных изменений стромы железы.
По нашим данным ранними признаками начавшейся гибели клетки являются: расширения цистерн эндоплазматической сети, отделение рибосом от мембран шероховатой эндоплазматической сети и диссоциация полисом в моносомы. В дальнейшем на поверхности клеток образуются выпячивания, содержащие только цитозоль, происходит потеря микроворсинок.
В цитоплазме клеток и вне их появляются миелиновые фигуры, формирующиеся из вещества цитоплазмы клеток и мембран органелл, наблюдается набухание митохондрий. Все эти описанные изменения обратимы. Необратимые изменения морфологически ассоциируются с выраженной вакуолизацией митохондрий и их крист, повреждением плазматических мембран и набуханием лизосом. Эти картины, наблюдающиеся преимущественно в крупных лютсино-вых клетках, описаны нами выше.
Наряду с этими изменениями, связанными с нарушениями микроцирку-ляторного русла, вызванного гормональными изменениями (простагландины и т.п.), мы наблюдали гибель клеток путем апоптоза.
При этом наиболее характерными признаками являются конденсация и фрагментация ядерного хроматина, а также сморщивание клетки с сохранением целостности органелл. В дальнейшем клетка распадается на апоптозные тельца, представляющие собой мембранные структуры с заключенными внутри органеллами и частицами ядра. Затем апоптозные тельца фагоцитируются и разрушаются при помощи лизосом окружающими клетками-макрофагами.
2.2.3.3 Ультраструктурная характеристика персистентных желтых тел
Крупные лютеиновые клетки персистентных желтых тел характеризуются небольшим ядром с глубокими и широкими инвагинациями, что придает ему своеобразное крупнолопастное строение. Хроматин расположен по периферии в виде крупных глыбок или заполняет почти всю кариоплазму. Ядрышки обнаруживаются редко и представлены преимущественно гранулярным компонентом. Поры в оболочке ядра обнаруживаются с трудом.
Цитоплазма содержит много жировых капель, представляющих собой нейтральные жиры. Митохондрии гиперплазированные, содержат вакуолизиро-ванные или разрушенные кристы, темные включения, иногда занимающие почти всю органеллу. Гладкий эндоплазматический ретикулум представлен расширенными профилями. Шероховатый эндоплазматический ретикулум не обнаруживается, а рибосомы в небольшом количестве располагаются в цитоплазме в виде небольших скоплений полисом.
Тека-лютеиновые клетки характеризуются вытянутой формой и эксцентрично расположенным ядром. Ядро неправильной формы, с небольшими инвагинациями, глыбками хроматина, расположенного по периферии, и мелкозернистой структурой в центральных зонах кариоплазмы. Ядрышко темное, представлено фибриллярным компонентом.
Цитоплазма содержит капли липидов темного цвета и более светлые лю-теосомы. Митохондрий немного, они располагаются по одной - две в участках цитоплазмы, не содержащей липиды. Митохондрии небольшого размера с трубчатыми или разрушенными кристами. Рядом с митохондриями располагаются единичные, короткие профили шероховатого эндоплазматического рети-кулума. В других участках цитоплазмы встречаются небольшие скопления полисом. Гладкий эндоплазматический ретикулум встречается в виде единичных округлых структур. Клеточная мембрана неровная, клетки располагаются на значительном расстоянии друг от друга.
Тека-лютеиновые клетки почти сплющенной формы, содержат вытянутое ядро с глубокими инвагинациями, узким ободком цитоплазмы бедной органел-лами и содержащей капли липидов.
Для персистентных желтых тел характерно обилие клеток соединительной ткани: фибробластов, фиброцитов, макрофагов различной степени диффе-
ренцировки. Между клетками формируются своеобразные взаимоотношения. С одной стороны, характерны широкие межклеточные пространства между крупными лютеоцитами. Тека-лютеиновые клетки имеют тенденцию близко располагаться к крупным лютеоцитам и образовывать с ними или другими текалю-теиновыми клетками в небольших участках цитоплазмы простые межклеточные контакты.
В персистентных желтых телах мы обнаружили ярко выраженную активность макрофагов. Макрофаги внедряются в разрушающуюся по типу липофа-нероза крупную лютеиновую клетку. У макрофага клеточная мембрана сохраняется, то у лютеиновой клетки она видна только в отдельных участках межклеточного взаимодействия.
Необходимо подчеркнуть, что гибель клеток в персистентных желтых телах развивается по типу дистрофии, а затем некроза. В начале отмечаются обратимые изменения органелл, в дальнейшем разрушение клеточных мембран, прежде всего у митохондрий, появление крупных капель нейтральных жиров. В дальнейшем развивается фокальный некроз цитоплазмы лютеоцитов, который заканчивается гибелью клетки с последующим фагоцитозом ее остатков макрофагами.
Строма персистентного желтого тела хорошо развита, рост соединительной ткани прогрессирует, в связи с чем ею заполняются пространства атрофирующих и гибнущих клеток. Она представлена активно синтезирующими фиброцитами и фибробластами, грубыми коллагеновыми волокнами и межклеточным веществом.
Ультраструктура микроциркуляторного русла свидетельствует о том, что кровоснабжение железы недостаточное. Капилляры спавшиеся, пустые или содержат единичные клетки крови. Ядра эндотелиоцитов темные, цитоплазма бедна органеллами и почти не содержит пиноцитозных пузырьков. Внутренняя поверхность сосуда без выраженных микроворсинок. Базальная мембрана в отдельных участках разрушена, вокруг капилляра отсутствуют клеточные элементы и развивается отек.
2.2.4 Экспериментальное изучение лютеолитических процессов
Ко вторым суткам после введения препарата в дозе 250 мкг в яичниках отмечаются процессы инволюции желтого тела, проявляющиеся появлением уплотненных пикнозных ядер лютеоцитов, в их цитоплазме образуется большое количество разнообразных по форме и объему вакуолей, которые при окраске суданами содержат фосфолипиды и нейтральные жиры. К четвертым суткам после введения препарата лизис лютеиновых клеток усиливается и у одного животного наступила инволюция функционирующих желтых тел, лютеини-зация и облитерационная атрезия крупных и средних фолликулов. В это же время активируется рост и созревание других фолликулов, в результате чего проявляется половая охота.
Препарат в дозе 500 мкг у коров вызывают более интенсивные процессы инволюции желтого тела, пикноз и лизис ядер, вакуолизацию цитоплазмы лю-
теиновых клгток. У всех животных желтые тела к четырех дневному сроку после введения препарата подвергаются лизису.
У коров указанный препарат в дозе 1000 мкг уже через двое суток после введения препарата вызывают глубокие литические процессы. В лютеиновых клетках, в теке и гранулезе третичных фолликулов, яйцеклетках и в интерсти-циальной ткани яичника наблюдается распад ядер и цитоплазмы. Это явление сопровождается выраженной сосудистой реакцией, гемостазом, инфильтрацией форменных элементов крови в окружающую ткань яичника, фолликулы. Вследствие этого лизис клеток желтых тел к этому времени завершается, стадия возбуждения полового цикла, сопровождающаяся лютеинизацией, геморрагической и кистозной атрезией крупных фолликулов.
Таким образом, большие дозы препарата (1000 мкг) наряду с чрезмерной активацией литических процессов в желтом теле вызывают и лизис текалютеи-новых клеток в сформированных фолликулах, что приводит к образованию кист, в связи с чем препарат в этих дозах не может быть рекомендован для вызывания инволюции желтых тел полового цикла.
Полученные данные указывают на то, что отечественный препарат эсту-фалан обладает лютеолитическим воздействием на лютеиновые структуры и ткани яичника у животных. Исходя из полученных данных, наиболее оптимальными дозами эстуфалана для коров являются 500 мкг.
Электронномикроскопически установили, что при использовании оптимальной дозы препарата (500 мкг) лютеолитические процессы в тканях желтого тела напоминают таковые желтых телах полового цикла, но с более выраженными дистрофическими процессами в лютеиновых клетках, активацией макрофагов, уничтожающих погибающие клетки. Это происходит вследствие развития анемии и ишемии сосудов железы. В тоже время фиброзные процессы в желтом теле выражены слабо, что приводит к быстрому рассасыванию желтого тела без его персистенции и образования лютеиновых рубцов.
1. Масса яичника, содержащего желтое тело беременности, увеличивается к двухмесячному сроку стельности, достигая в среднем 14,6±0,8 гр., снижается к трем месяцам стельности до 10,6±0,7 гр. и в дальнейшем этот показатель остается относительно стабильным. К двухмесячному сроку стельности диаметр желтого тела беременности увеличивается и достигает в среднем 28,4±3,1 мм (стадия расцвета), а к трем месяцам стельности этот показатель снижается до 23,1 ±1,2 мм (стадия уменьшения) и в дальнейшем, несколько уменьшаясь, остается относительно одинаковым (стадия стабилизации). В яичниках стельных коров на протяжении первых шести месяцев беременности обнаруживаются единичные полостные фолликулы диаметром более 1 см. Число полостных фолликулов диаметром до 1 см снижается к двухмесячному сроку беременности, в дальнейшем повышается, достигая своего максимума к четырем месяцам стельности, после чего снижается, достигая двухмесячного уровня. Число красных лютеиновых телец в обоих яичниках достоверно не изменяется на протя-
жении беременности. Число белых атретических телец увеличивается к двум месяцам стельности, когда количество полостных фолликулов снижается. К трем месяцам беременности этот показатель повышается, а к четырем месяцам достоверно увеличивается и, снизившись к пяти месяцам, остается стабильным.
2. На протяжении полового цикла происходят закономерные изменения макроскопических характеристик желтого тела. В первые десять суток полового цикла желтое тело увеличивается в размерах, формируются его строма и паренхима, васкуляризация (стадия формирования). На десятые-двенадцатые сутки полового цикла желтое тело достигает наибольшего развития (стадия максимально