biohimiyа

3.В каких органах происходит образование мочевины? Дальнейшие пути ее транспортировки у различных животных. На чем основано кормовое использование мочевины? Ее превращение в пищеварительном тракте.

4.Окисление пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Назовите конечные продукты пуринового обмена у разных животных.

5.Биохимические механизмы образования и обезвреживания скатола и индола.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Определение концентрации мочевины в биологических жидкостях.

Мочевина образует с диацетилмонооксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа красный комплекс.

1. В три пробирки внесите реактивы согласно следующей таблице:

	Раствор	Опытная проба,	Калибровочная	Контрольная
		мл	проба, мл	проба, мл
	Исследуемый образец	0,02	–	–
	Реактив 1	–	0,02	–
	Дистиллированная вода	–	–	0,02
	Реактив 2	4	4	4

2.Пробирки закройте алюминиевой фольгой и поместите на кипящую водяную баню точно на 10 мин.

3.После этого пробирки быстро охладите проточной водой и измерьте

оптическую плотность опытной пробы (D1) и калибровочной (D2) против контрольного раствора при 580-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете толщиной слоя 10 мм. Измерение следует провести до 15 мин после охлаждения.

4.Рассчитайте концентрацию мочевины по формуле:

	ñ( мочевины )	D1	Xммоль / ë
		D2

где Х концентрация мочевины в калибровочной пробе.

Сравните полученные значения с нормальными величинами. О чем свидетельствует снижение (повышение) количества мочевины в сыворотке крови у животных?

81

Опыт 2. Обнаружение индикана в моче.

Количество индикана в моче является постоянной величиной у здоровых животных. Увеличение индикана моче наблюдается при воспалении мышц, обширных травмах и при избытке триптофана в рационе животных.

Определение индикана в моче базируется на гидролизе его соляной кислотой с последующим окислением хлорным железом индоксила и тимола в соединение розово-фиолетового цвета.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2.Набор пипеток.

3.Стаканчик.

4.Фильтр.

5.Стеклянная воронка.

Реактивы. 1. Моча.

2.Ацетат свинца, 10%-ный раствор.

3.Хлороформ.

4.Тимол, раствор в 96о этаноле.

5.Реактив Жолеса (0,5 г хлорида железа (III) в 100 мл концентрированной соляной кислоты).

1.20 мл мочи смешайте с 10 мл раствора уксуснокислого свинца. Встряхните. Фильтруйте смесь.

2.К 10 мл фильтрата добавьте 1 мл раствора тимола и 10 мл реактива Жолеса.

3.Через 15 минут в смесь внесите несколько капель хлороформа. Взболтайте и произведите оценку результатов исследования.

В норме отмечают розово-фиолетовое окрашивание хлороформа, интенсивность которого при выраженной диканурии повышается до краснофиолетового.

Запишите Ваши результаты. Продуктом метаболизма какой аминокислоты является индикан? Напишите структурную формулу индикана.

Опыт 3. Определение концентрации мочевой кислоты в моче.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2.Набор пипеток.

3.Установка для титрования.

Реактивы. 1. Моча.

2.Карбонат натрия, 20%-ный раствор.

3.Реактив Фолина.

4.Гексацианоферрат калия, 0,01 н раствор.

82

1.К 1,5 мл мочи и прибавьте 1 мл 20%-ного раствора карбоната натрия и 1 мл реактива Фолина. Перемешайте. Развивается синяя окраска.

2.Титруйте содержимое пробирки 0,01 н раствором К3[Fe(CN)6] до исчезновения синего окрашивания.

3.Рассчитайте содержание мочевой кислоты (в мг) в суточной моче по формуле:

Мочевая.кислота, мг / сут 0,8 а в ,

1,5

где а – количество К3[Fe(CN)6] пошедшего на титрование, мл; в – суточный диурез, мл; 1,5 – объем пробы, мл.

Коэффициент пересчета в единицы СИ 0,0059.

Напишите схему синтеза и формулу мочевой кислоты. Сравните полученные значения с нормальными величинами. О чем свидетельствует снижение (повышение) количества мочевой кислоты в моче у животных?

Опыт 4. Качественная реакция на наличие гемопротеинов.

При окислении бензидина пероксидом водорода появляется синее окрашивание. Эта реакция используется в судебно-медицинской практике для выявления пятен крови.

1.На фильтровальную бумагу капнуть каплю разбавленной крови, раствор хлорида железа и воды из-под крана.

2.Добавьте 1 каплю 5%-ного свежеприготовленного спиртового раствора бензидина и 1 каплю 3%-ного раствора пероксида водорода.

Запишите Ваши результаты. О каком фрагменте гемопротеинов можно судить по данной реакции?

83

Опыт 5. Определение сорбционной способности эритроцитов.

Способность эритроцитов сорбировать на своей поверхности метиленовый синий зависит от функционального состояния клеточной мембраны эритроцитов и отображает ее свойство адсорбировать токсичные молекулы.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2.Набор пипеток.

3.Центрифуга.

4.ФЭК

Реактивы. 1. Кровь.

2.Цитрат натрия, раствор.

1.В центрифужную пробирку, содержащую 1 мл раствора цитрата натрия, поместите 4 мл крови.

2.Центрифугируйте 10 минут при 3000 об/мин.

3.Плазму удалите.

4.1 мл эритроцитарной массы поместите в центрифужную пробирку с 3 мл раствора метиленового синего.

5.Перемешайте содержимое пробирки и оставьте на 10-12 мин при комнатной температуре.

6.Затем снова центрифугируйте 10 мин. при 3000 об/мин.

7.Надосадочную жидкость налейте в кювету шириной 10 мм и определите оптическую плотность при 630 нм против воды.

	Расчет ведите по формуле	Х (%)	100 ( А1 *100 )
			А1

где A1 - оптическая плотность после инкубации с эритроцитами;

А2 - оптическая плотность исходного раствора метиленового синего против воды;

X - сорбционная способность эритроцитов, в %.

В норме эритроциты способны поглощать до 37,12 % красителя. Например, при гнойносептических состояниях показатель увеличивается до 69,9 %.

Сделайте вывод по полученным результатам.

84

Опыт 5. Проба Розина на билирубин.

Принцип метода основан на окислении билирубина мочи в биливердин под действием йода.

Приборы. 1. Штатив с пробирками. 2. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Моча.

2.Йод, 0,1%-ный спиртовой раствор.

1.В пробирку налейте 5 мл мочи.

2.Осторожно наслоите 1 мл 0,1% спиртового раствора йода. При наличии билирубина на границе между обеими жидкостями образуется зеленое кольцо (проба положительная). Подобный эффект наблюдается после приема антипирина и при наличии в моче крови.

Запишите полученные Вами результаты.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Занятие № 22. «Обмен нуклеиновых кислот и молекулярные механизмы синтеза белка»

Цель занятия: выделить дезоксирибонуклеотид; изучить его качественный состав; обобщить знания о нуклеотидах.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1.Нуклеотиды: строение и биохимические функции.

2.ДНК и РНК, строение, структура, биологическая роль.

3.Биосинтез ДНК (репликация), схема, ферменты.

4.Биосинтез РНК (транскрипция), схема, ферменты.

5.Биосинтез белка (трансляция), схема, ферменты.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Выделение дезоксинуклеопротеида.

Приборы. 1. Весы.

2.Ножницы.

3.Ступка для растирания.

85

4.Мензурка.

5.Центрифуга.

6.Центрифужные пробирки.

7.Химический стакан, 150-200 мл.

8.Деревянная палочка с насечками.

Реактивы. 1. Селезѐнка (печень, почки, поджелудочная железа).

2.Хлорид натрия, 5%-ный раствор.

3.Дистиллированная вода.

1.Взвесьте 2-2,5 г селезенки (печени, почек, поджелудочной железы).

2.Измельчите селезенку на маленькие кусочки.

3.Поместите селезенку в ступку для растирания.

4.Добавьте немного стеклянного порошка и измельчите селезенку в ступке с 10-15 мл 5%-ного раствора хлорида натрия.

5.Растирайте 12-15 минут до получения однородной массы, добавляя в процессе растирания раствор хлорида натрия. Всего расходуется раствора хлорида натрия около 80 мл.

6.Содержимое ступки разлейте в центрифужные пробирки. Центрифугируйте 10 мин при 3 тыс. об/мин.

7.Измерьте объем надосадочной жидкости, сливая ее в стеклянный цилиндр.

8.Возьмите стакан. Налейте в него дистиллированной воды, объем которой должен быть в шесть раз больше объема надосадочной жидкости.

9.Медленно помешивая в стакане деревянной палочкой с насечками, влейте в воду надосадочную жидкость. Дезоксинуклеопротеид (ДНП) выпадает в виде нитей и наматывается на палочку.

10.Выделенный ДНП перенесите в другую пробирку и используйте для дальнейшего анализа на составляющие компоненты.

Опыт 2. Качественное открытие ДНК.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2.Набор пипеток.

3.Стеклянная палочка.

4.Водяная баня, кипящая.

Реактивы. 1. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

2.Дифениламиновый реактив.

3.Сульфат меди, 2%-ный раствор.

1.Возьмите две пробирки.

2.Перенесите в каждую пробирку небольшое количество осадка ДНП (из опыта № 1).

3.Добавьте в обе пробирки для растворения ДНП 0,5-1 мл раствора гидроксида натрия.

86

4.В первую пробирку добавить равный объем дифениламинового реактива , перемешайте и поставьте на 15-20 мин в кипящую водяную баню.

5.Отметьте изменение окраски.

6.Ко второй пробирке добавьте равный объем 10%-ного раствора NaOH и несколько капель 2%-ного раствора CuSO4.

7.Отметьте появление окраски.

Оналичии каких компонентов структуры ДНП можно судить по результатам опыта? Можно ли подобным образом определить компоненты РНП? Каковы функции этих компонентов в структуре нуклеиновых кислот?

Задание 1. Заполните таблицу, обобщающую сведения о механизмах синтеза нуклеиновых кислот и белка.

	Процесс	Репликация	Транскрипция	Трансляция
1.	Субстраты
2.	Ферменты
3.	Локализация
процесса
4.	Направление
синтеза новых
цепей
5.	Этапы про-
цесса
6.	Характери-
стика продукта

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

1 г дифениламина растворить в 100 мл ледяной уксусной кислоты. К раствору добавить 2,75 г концентрированной серной кислоты.

87

Занятие № 23-24. «Биохимия крови. Контроль практических навыков биохимического анализа»

Цель занятия: закрепить приобретенные практические навыки качественного и количественного биохимического анализа.

Определите в предложенном вам биологическом образце содержание:

1)Глюкозы,

2)Общего белка,

3)Мочевины,

4)Холестерина,

5)-липопротеидов

6)Активность трансаминаз,

Запишите полученные результаты в таблицу:

	Исследуемый показатель	Полученное	Физиологическая	Вывод
		значение	норма
	Глюкоза
	Общий белок
	Мочевина
	Активность трансаминаз
	Холестерин
	-липопротеиды

Сделайте вывод о клиническом состоянии животного на основании полученных результатов. Укажите предполагаемые причины, оказавшие влияние на исследуемые показатели.

Дата выполнения ____ Балл ___ Подпись преподавателя______

88

Занятие № 25. Коллоквиум III: «Азотистый обмен и биохимические механизмы синтеза белка».

1.Источники и пути использования аминокислот в организме.

2.Пути образования и устранения аммиака в организме различных животных.

3.Механизмы трансаминирования и дезаминирования.

4.Биохимические механизмы протеолиза белков в желудочно-кишечном тракте.

5.Участие трансаминаз в метаболизме.

6.Биохимические механизмы синтеза мочевины.

7.Участие нуклеотидов в метаболизме.

8.Строение и структурная организация ДНК.

9.Биохимические механизмы репликации.

10.Биологическая роль и биохимические механизмы репарации.

11.Строение и структурная организация РНК.

12.Биохимические механизмы транскрипции.

13.Посттранскрипционная модификация РНК.

14.Генетический код и его свойства.

15.Биохимические механизмы трансляции.

16.Механизмы регулирования синтеза белков.

17.Посттрансляционные механизмы формирования структуры белков.

18.Метаболические функции серосодержащих аминокислот.

19.Метаболические функции ароматических аминокислот.

20.Биохимические механизмы детоксикации в организме. 21.Конечные продукты азотистого обмена у разных видов животных. 22.Пути сопряжения азотистого обмена с энергетическим. 23.Особенности азотистого обмена жвачных животных.

24.Конечные продукты пуринового обмена у разных видов животных. 25.Особенности метаболизма птиц.

Дата выполнения _____ Балл _______ Подпись преподавателя ____________

Занятие № 26-27. Семинар:

«Биологические основы, опыт и перспективы использования в животноводстве ферментных препаратов, витаминов и микроэлементов. Взаимосвязь углеводного, липидного и азотистого обменов. Биохимическая адаптация»

Цель занятия: ознакомиться с последними достижениями науки и практики в области биогенных соединений и их практической значимости.

СПИСОК ТЕМ ДЛЯ ДОКЛАДОВ И ОБСУЖДЕНИЯ:

89

1.Ферментные препараты в подготовке кормов.

2.Ферментные препараты при выращивании и откорме животных.

3.Влияние ферментных препаратов на метаболизм.

4.Влияние ферментных препаратов на качество продуктов животноводства.

5.Использование ферментных препаратов для обработки продуктов животноводства.

6.Влияние витаминов на обмен веществ различных животных.

7.Теоретические основы использования антиоксидантов в практике животноводства.

8.Биохимические функции переходных металлов.

9.Биохимические функции фтора и его место в питании животных.

10.Биохимические функции йода и его место в питании животных. 11.Биохимические функции селена и его место в питании животных.

12.Синергизм и антагонизм воздействия микроэлементов на обмен веществ.

13.Токсическое действие микроэлементов при передозировке.

14.Зависимость потребности животных в микроэлементах от возраста и уровня продуктивности.

15.Факторы, определяющие доступность микроэлементов для усвоения организмом животных.

16.Методы выделения и очистки различных по химической природе биологических субстратов.

17.Особенности протекания биохимических процессов у трансгенных животных.

18.Влияние остаточных количеств фармакологических препаратов на углеводный, липидный и азотистый обмены.

19.Пути влияния на взаимосвязь различных обменов веществ.

20.Особенности обмена веществ животных различных климатических зон, экологических ниш.

21.Роль печени в обмене веществ.

22.Влияние стрессов на качество животноводческой продукции.

23.Приспособленность биохимических процессов живых организмов к изменениям температуры окружающей среды.

24.Влияние факторов кормления на согласованность биохимических процессов организма животных.

25.Факторы, приводящие к производству опасных продуктов животноводства.

По желанию студентов могут быть приняты к обсуждению и другие темы в пределах данной проблемы.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

90