Техника анализа методом тсх
На чистые матовые стеклянные пластинки размером 1020 см, помещенные на плоскую подставку с упором, наносят слой адсорбента толщиной 1,0–1,5 мм. После этого специальным валиком разравнивают адсорбент, передвигая (но не прокатывая) его вдоль пластинки (рис. 3). Адсорбент перед использованием необходимо просеивать через тонкое сито для удаления крупных частиц.
По обеим сторонам пластинки должны оставаться зоны, свободные от сорбента, иначе может проявиться т.н. «краевой эффект», т.е. искажение Rf крайних пятен. На расстоянии 1,5–2,0 см от края пластинки натянутой тонкой нитью или волосом намечают поперечную линию, являющуюся линией старта, и на нее капилляром наносят капли раствора. После нанесения образца на сорбент растворителю дают испариться, а затем пластинку переносят и устанавливают в наклонном положении в кювете с налитым на дно растворителем слоем 1,5–2,0 см (рис. 4). Угол наклона должен быть небольшим, иначе сорбент может сдвинуться с пластинки. Стартовая линия не должна соприкасаться с элюентом. После того, как растворитель поднимется почти до верха пластинки, ее вынимают и отмечают на ней уровень растворителя. Для этого, слегка наклонив влажную пластинку, постукивают осторожно пальцем по ее краю, чтобы сухой адсорбент ссыпался на бумагу: фронтальная линия при этом четко обозначится. Во время хроматографирования кювета с пластинкой должна находиться в закрывающемся сосуде, чтобы препятствовать испарению элюента. Иногда в качестве элюента применяется смесь растворителей, поэтому важно сохранить постоянное соотношение растворителей во время хроматографирования.
1 – валик; 2 – стеклянная хроматографическая пластина; 3 – подставка
Рисунок 3 – Приспособление для нанесения незакрепленного слоя сорбента
.
1 – хроматографическая камера; 2 – стеклянная пластинка; 3 – слой сорбента; 4 – элюент; 5 – пришлифованная крышка, 6 – упор-подставка
Рисунок 4 – Хроматографическая камера с пластинкой
Детектирование исследуемых соединений на хроматограмме
Если вещества окрашены, то результат хроматографирования сразу виден. Бесцветные пятна проявляют, опрыскивая пластину соответствующими реактивами, дающими цветные реакции или помещают в камеру (эксикатор), заполненную парами йода. При этом в местах, где расположены бесцветные пятна, йод адсорбируется намного сильнее, поэтому на желтом фоне появляются более темные пятна.
Бесцветные пятна флуоресцирующих веществ можно обнаружить, освещая пластинку ультрафиолетовым светом. Если вещество обладает свойством гасить флуоресценцию, то в сорбент на стадии подготовки добавляют флуоресцирующие вещества, например, сульфид или силикат цинка. В первом случае при ультрафиолетовом облучении в темноте наблюдают яркие пятна флуоресцирующих компонентов на темном фоне, во втором случае – темные пятна компонентов на светящемся фоне флуоресцирующего сорбента.
Газовая хроматография
Метод газовой хроматографии отличается от тонкослойной хроматографии тем, что элюентом (подвижной фазой) в нём является газ, а не жидкость. Это означает, что исследуемые этим методом вещества должны обладать достаточной летучестью. Кроме того, они не должны заметно разлагаться при температуре кипения, так как в хроматографическую колонку они вводятся в виде газовой (паровой) «пробки». Обычно максимальной температурой кипения, которой могут обладать исследуемые соединения, считают 400 С, на которую рассчитано большинство серийно выпускаемых приборов. Это налагает определенные ограничения на этот метод анализа. В частности, он непригоден для полного изучения состава высокополимеров, липидов, пептидов и других соединений с высокой молекулярной массой. Тем не менее, метод нашел чрезвычайно широкое применение вследствие своей экспрессности, возможности автоматизации, высокой точности, сравнительно невысокой стоимости. Неподвижной фазой может быть активное твердое вещество или неподвижная жидкость. В соответствии с этим известны два основных типа газовой хроматографии:
Газоадсорбционная хроматография (ГАХ). Неподвижной фазой (сорбентом) служит твердое пористое вещество с очень высокой удельной поверхностью.
Газожидкостная хроматография (ГЖХ). Неподвижной фазой в этом методе является тонкая плёнка жидкости, нанесённая на инертное твёрдое вещество (твёрдый носитель; удельная поверхность последнего составляет 0,5–20 м2∙г–1). Ее называют неподвижной жидкой фазой (НЖФ).
Принципиальное отличие между этими типами заключается в том, что в первом случае происходит адсорбция анализируемого соединения на поверхности неподвижной фазы, а в другом – распределение его между подвижной и неподвижной фазами. Таким образом, по типу сорбента ГЖХ относится к распределительной хроматографии.