38 Общий принцип сатурационного анализа. Ионно-метрическое определение электролитов биожидкости. Этапы сатурационного анализа:

I этап: Добавление биологической жидкости меченого гормона

между не-/меченым гормоном происходит конкуренция за место связывания с антителом/другим белком, для образования связи гормон - специфический белок. В случае, если в пробы с биологической жидкостью, с различным содержанием анализируемого гормона добавляется одинаковое количество меченого гормона, то его связывание с антителом во многом будет определятся исходной концентрацией гормона исследуемой жидкости. Чем выше содержание в биологической жидкости исследуемого гормона, тем в большей мере он будет препятствовать связыванию меченого гормона со специфическим белком. В случае применения радиоактивного гормона для метки, создается свободный гормон. Радиоактивность определяется после отделения от него комплекса гормон – специфический белок. По предварительной калибровочной кривой судят о концентрации анализируемого/меченого гормона.

II этап: Инкубация

Время, в результате которого происходит установление равновесия в системе. В результате равновесия количество связываемого с антителом меченого антигена будет находится в обратной пропорциональности с концентрацией антигена, внесенного в систему в составе анализируемой пробы.

Для определения меченого антигена, связанного с антителом, оставшемся в свободном виде производная делится на связанные и свободные его формы. Добавление сипарирующего агента, производится центрифугирование, что ведет к разделению осадка и жидкости, что позволяет подсчитать радиоактивность осадка и остаточной жидкости. Осадок=антиген+антитело, остальное – антиген в свободном виде.

Применение радионуклидов в качестве антиген, использование высокоспецифичных антител к исследуемому веществу позволяет определить высокое качество веществ с высокой чувствительностью (~10^-15 г/л)

Достоинства радиоиммунологического анализа перед биохимическим: 1)большая чувствительность;

2) высокая специфичность, обусловленная применением иммунологических реакций антиген–антитело;

3) большая точность;

4) удовлетворительная воспроизводимость метода;

5) относительная простота выполнения,

6) значительная пропускная способность;

7) отсутствие лучевой нагрузки на организм исследователя;

8) позволяет производить количественное определение в биологических жидкостях любого химического вещества, в котором можно получить специфические антитела.

Учёт результатов при сатурационном анализе.

На ряду с оценкой радиоактивности, проводят радиометрию, контроль общей активности Т–меченных антиген. Используют также контроль активности связывания В–меченных антиген и разведённую сыворотку. Далее – выполняют расчёт.

Если обозначить свободную фракцию F, то выполняется В/F,B/T

B/B0 – отношение радиактивной фракции, связанной с антителами, к радиоактивной фракции, связанной с антителами при нулевой концентрации стабильного антигена (B0)

Реактивы могут применяться и адаптироваться к двум группам приборов:

1) на основе применения жидкофазных гомогенных систем c применением неспецифических адсорбентов комплекса антигена–антитело и отделения их центрифугированием;

2) гетерогенные системы с использованием твердофазных специфических реагентов для связывания антигенов и антител без центрифугирования.

Сатурационный анализ позволяет на ранних стадиях распознавать онкозаболевания.

Ионно-метрической определение электролитов плазмы в биожидкости

Служит для определения содержанияв биожидкостях ионов (Na+, K+, Cl–)

Суть: измеряется электрохимический потенциал ионоселективного электрода, погруженного в исследуемый раствор. Электрическая схема прибора включает электрод сравнения (платиновый, потенциал которого известен) и индикаторный ионоселективный электрод (потенциал которого измеряется и его значение позволяет судить об активности присутствующих в растворе ионов)

Существуют различные ионоселективные анализаторы, с помощью которых можно устанавливать концентрацию свободных, несвязанных с белком, функционально активных ионов.

В РБ есть ионоселективный анализатор «АНИОН»