- •Раздел I.
- •Действие мутации на трансляцию:
- •Виды мутантов:
- •Генетические взаимодействия между вирусами:
- •Негенетические взаимодействия вирусов:
- •Дефектные вирусные геномы:
- •Раздел II.
- •Механизмы
- •Метод е-рок (е-розеткообразующих клеток)
- •Рбтл (реакция бласттрансформации лимфоцитов
- •Ртмл (реакция торможения миграции лейкоцитов)
- •Раздел III.
Действие мутации на трансляцию:
1. Бессмысленные (missens) мутации
2. Frame-shiftмутации – со сдвигом считывания и изменением всех последующих кодонов.
3. Супрессорные – восстан. функции генов, инактив-ых предыдущей мутацией
4. Мутации на клеточном уровне – можно выявить, если вызывает фенотипические изменения
5. Мутации с приобретением (способности синтезировать активный фермент), лаг-фазам между мутацией и синтезом фермента отсутствует.
6. Мутации с утратой – вызывает прекращение синтеза к.-л. фермента, а клетка сохраняет функц. активность. Если рост клетки продолжается, то кол-во фермента умен-ся с каждым делением в 2 раза.
7. Изменения в виде трансдукции, трансформации, коньюгации.
31. Генетические рекомбинации (трансдукция, конъюгация, трансформация).
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ РЕКОМБИНАЦИИ у эукариот совершаются в процессе полового размножения путем взаимного обмена фрагментами хромосом, при этом из двух родительских хромосом образуются две рекомбинантные, т.е. возникают две рекомбинантные особи.
У прокариотов нет полового размножения в результате внутригеномных перестроек: изменение локализации генов в пределах хромосомы, или при проникновении вреципиента части ДНК донора → формирование мерозиготы, т.е. образуется только ОДИН РЕКОМБИНАТ.
ГенР происходят при участии ферментов в пределах отдельных генов или групп сцеплений генов. Существуют специальные REC–ГЕНЫ, определяющие способность бактерий к рекомбинациям. Передача генетического материала от Б! к Б! происходит путем трансформации, трансдукции и конъюгации, а плазмидных генов - путем трансдукции и конъюгации.
ТРАНСФОРМАЦИЯ –непосредственная передача генетического материала (фрагмента ДНК) донора Рец. (Впервые Гриффитс – опыт с живым авирулентным бескапсульным штаммом пневмококка, к/й стал вирулентным при обработке экстрактом убитых капсульных пневмококков.)
С донорной ДНК в реципиентную клетку обычно передается только один ген, т.к. фрагмент ДНК, который может проникнуть в Рецочень маленький. Трансформации поддаётся только часть клеток Б!! популяции – КОМПЕТЕНТНЫМИ. Состояние компетентности (когда стенка Б! проницаема для высокополимерных (Мг=0,5–1 млн) фрагментов ДНК) возникает обычно в конце LOG–ФАЗЫ.
Фазы процесса трансформации:
адсорбция ДНК-донора на Рец;
проникновение ДНК внутрь Реци деспирализация ДНК.
соединение любой из двух нитей ДНК донора с гомологичным участком хромосомы реципиента и последующая рекомбинацией.
Эффективность зависит от СТЕПЕНИ ГОМОЛОГИЧНОСТИ ДНК донора и реципиента, что определяет конечный результат, т. е. количество формирующихся рекомбинантов (трансформантов) межвидовая трансформация происходит гораздо реже, чем внутривидовая.
ТРАНСДУКЦИЯ – передача генетического материала с помощью фагов. Различают три типа трансдукции:
Неспецифическая (общая).В момент сборки фаговых частиц в их головку может проникнуть ЛЮБОЙ фрагмент ДНК Б!–донора. Вместе с фаговой ДНК переносятся любые гены донора и включаются в гомологичную область ДНК Рецпутем рекомбинации. Фаги только переносят генетического материала
Специфическая – фаг переносит ОПРЕДЕЛЕННЫЕ гены при выщеплении профага из Б! хромосомы вместе с рядом расположенными генами, при этом фаг становится дефектным. При взаимодействии фага с Рецпроисходит включение гена донора и дефектного фага в хромосому РецБ!, а Б!! становятся невосприимчивыми к последующему заражению вирулентным фагом.
Абортивная– фрагмент ДНК бактерии-донора не включается в хромосому РецБ!, а располагается в цитоплазме и в таком виде функционирует. Во время деления этот фрагмент ДНК передаётся только одной дочерней, и в конечном итоге утрачиваться в потомстве.
КОНЪЮГАЦИЯ – перенос генетического материала из клетки-донора в клетку реципиента при их СКРЕЩИВАНИИ. Доноры –с F-плазмидой (половой фактор). При скрещивании F+ с F–половой фактор передается независимо от хромосомы донора, при этом почти все Рецстановятся F+.
F-плазмида может интегрировать в Б! хромосому. В некоторых случаях она освобождается, захватывая при этом сцепленные с ней Б! гены (обозначаются с указанием включенного гена: F-lac).
ЭТАПЫ:
прикрепление клетки-донора к Рецс помощью SEX-ПИЛЕЙ
образование конъюгационного МОСТИКА, через который передаётся F-фактор и другие плазмиды, находящиеся в цитоплазме донора.
разрыв одной из цепей ДНК (в месте включения F-плазмиды) при участии эндонуклеазы. Один конец ДНК проникает в Реци сразу же достраивается до 2-нитевой структуры. При переносе захватывается часть ДНК Б!-донора – Hfr-штаммы (HIGH FREQUENCY OF RECOMBINATION). При скрещивании Hfr-штамма с F–F-фактор, не передается (т.к. конъюгационный мостик разрывается, а F-фактор расположен в дистальной части хромосомы). Передаются только гены Б! хромосомы, расположенные вблизи начала переноса (О–точка (origin)).
На ОСТАВШЕЙСЯ в нити ДНК синтезируется 2 цепочка.
32. Генетика вирусов.
Геном вируса представлен РНК либо ДНК, одно- или двунитчатой.
Единица мутации – мутон – замена элемента генома, что ведет к измен. свойств вируса. Может быть вставка или делеция нуклеотидов.
По ПРОИСХОЖДЕНИЮ мутации подразделяют на:
- спонтанные –составляют естественный фон. Они появляются под влиянием разных причин: ошибки в репарации или репликации днк, ошибочное включения в дочернюю цепь некомплементарного ао (а=т, г≡ц), инсертационные мутации (insertion – вставка, возникают при встраивании в хромосому микробнойis-последовательностей, транспозонов и плазмид, при наличии генов-мутаторов частота мутаций увеличивается в >100 раз).
- индуцированные – получают под влиянием мутагенов.
По КОЛИЧЕСТВУ МУТИРОВАВШИХ ГЕНОВ:
Генные – затрагивают один ген, чаще всего – точковые,
а) Точковые – замену или вставку пары нуклеотида в ДНК → изменение 1 кодонавместо одной АК кодируется другая или нонсенскодон (нонсенсмутация) – этоПРЯМАЯ Мт. Впоследствии может возникнутьвторичная(ОБРАТНАЯ) мутация в этом же гене → восстановление дикого генотипа и фенотипа.
Множественные (геномные).
По ФЕНОТИПИЧЕСКИМ ПОСЛЕДСТВИЯМ:
Нейтральные–фенотипически не проявляются.
Проявл. фенотипически.