- •Раздел I.
- •Действие мутации на трансляцию:
- •Виды мутантов:
- •Генетические взаимодействия между вирусами:
- •Негенетические взаимодействия вирусов:
- •Дефектные вирусные геномы:
- •Раздел II.
- •Механизмы
- •Метод е-рок (е-розеткообразующих клеток)
- •Рбтл (реакция бласттрансформации лимфоцитов
- •Ртмл (реакция торможения миграции лейкоцитов)
- •Раздел III.
Виды мутантов:
1. по морфологии бляшек (напр., аденовирусы с большими бляшками быстрее высвобождаются из клеток по сравнению с диким типом.
2. Мутанты по типу хозяев
3. Термочувствительные мутанты – могут размножаться только при пониженной температуре.
4. Холодочувствительные мутанты.
5. Делеционные мутанты – теряют важные участки генома и требуют для своего размножения присутствия вируса-помощника.
6. Прочие: устойчивые к ингибиторам, устойчивые к антибиотикам, потерявшие ферменты и т.д.
Генетические взаимодействия между вирусами:
Комплеметация– если 1 вирус дефектен по к.-л. гену, или оба вируса дефектны по разным генам, то они продолжают расти в ассоциации в клетке. Если же оба вируса дефектны по одному и тому же гену, то комплементации нет.
Рекомбинация– вз-вие между вирусными геномами в смешанно-зараженных клетках, в рез-те чего дочерние геномы содержат генетический материал в комбинациях, отсутствующих у родителей.
Генетич. реактивация– частный случай рекомбинации, когда 1 или оба вируса неинфекционны, но при смешанном заражении дают потомство, которое несет инфекц. признаки.
Негенетические взаимодействия вирусов:
Гетерозиготность– состояние, при котором диплоидные хромосомы различаются по аллельным маркерам в 1 или нескольких локусах.
Интерференциябывает неск. типов:
а) гомологичная интерференция– хотя дефектный интерферирующий вирус конкурирует за компоненты репликационного аппарата с полными вирусами, они необязательно мешают репродукции полного вируса
б) супрессия– подавление мутантного феномена супрессорной мутацией. Фенотип вирусной мутации подавляется второй мутацией либо в вирусе, либоб в клетке, проиводя к реверсии фенотипа вируса, содержащего исходную мутацию.
Дефектные вирусные геномы:
это делеционные мутанты, потерявшие существенный участок генома родительского вируса (потрея может быть до 90% генома). Для восстановления вирулентных свойств необходимо одновременное заражение родственным вирусом-помощником. Впервые это наблюдали в 1948 г. В. Хенли и Г. Хенли. Называют их ДИ-частицами (дефектными интерферирующими частицами).
Большая часть ДИ-частиц активно интерферирует с вирусами-помощниками.
Варианты дефектных вирусов:
- Сателлиты– крайние паразиты генных продуктов, образованных другими вирусами. (Напр., дельта-агент, ассоциирующий с некоторыми тяжелыми формами гепатита, вызываемыми вирусом гепатита В. Генотип его сателлита – небольшая РНК.) Сателлиты могут значительно ослаблять или усугублять заболевание.
- Псевдовирионы– частицы, содержащие НК хозяина, заменяющую ему НК вирусного генома. Для вирусов полимы псевдовирионы составляют значительную часть "урожая" в клетках некоторых видов. Фаги, осущ-щие трансдукцию, обычно содержат только ДНК клетки-хозяина.
Условно-дефектные геномы– мутантные геномы, дефектные в определенных условиях (напр., термочувствительные мутанты или мутанты по спктру хозяев).
33. Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Способы окраски спор, жгутиков, капсул, включений.
Для окрашивания препаратов пользуются кислыми, щелочными и нейтральными анилиновыми красителями. Наиболее широкое применение нашли основной и кислый фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет и везувин.
Простой способ окраски мазковпроизводится водным фуксином Пфейффера и метиленовым синим Леффлера. Готовят водный фуксин из фенолового фуксина Циля, разводя его дистиллированной водой в соотношении 1:10. Состав РАСТВОРА ФУКСИНА ЦИЛЯ: основной фуксин – 1 г; спирт этиловый 96 % – 10 мл; фенол кристаллический – 5 г; глицерин – несколько капель; вода дистиллированная – 100 мл.
Метиленовый синий Леффлераготовят, прибавляя к 30 мл насыщенного раствора метиленового синего (10 г метиленового синего в 100 мл 96 % этилового спирта) 1 мл 1% NaOH или KOH и 100 мл дистиллированной воды.
После окрашивания красители сливают, препарат промывают водой и высушивают между листками фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива оптического микроскопа. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами.
При окраске щелочным метиленовым синим по Леффлеру (3–5 мин) гранулы волютина у дифтерийных коринебактерий приобретают темно–синий, а палочка – голубой цвет.
При сложных методах окраски мазковприменяют два–три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Граму, Цилю–Нельсену, Нейссеру, Бурри–Гинсу, Романовскому–Гимзе и некоторые другие.
При окраске по НЕЙССЕРУ гранулы ВОЛЮТИНА у дифтерийных коринебактерий окрашиваются в сине–черный, а бактерия – в желтый цвет. Мазок окрашивают: 1) 1 мин уксуснокислым метиленовым синим (метиленовый синий – 0,1 г, спирт – 2 мл, ледяная уксусная кислота – 5 мл, дистиллированная вода – 100 мл); 2) сливают краситель и мазок промывают водой; 3) на 20– 30 с наносят раствор Люголя; 4) 1 –3 мин окрашивают везувином (прокипяченная и отфильтрованная взвесь 2 г везувина в смеси 60 мл спирта и 40 мл дистиллированной воды).
Количественное содержание ПЕПТИДОГЛИКАНА, содержащегося в стенке, определяет характер окраски бактерий и других прокариот поГРАМУ. Те из них, которые содержат в клеточной стенке большое его количество (около 90 % пептидогликана), окрашиваются по Граму в сине–фиолетовый цвет и их называют грамположительными, все другие, содержащие в оболочке 5–20 % пептидогликана, – в розовый цвет и их называют грамотрицательными. Толщина слоя пептидогликана в клеточной стенке грамположительных бактерий в несколько раз больше, чем у грамотрицательных. Техника окраски по Граму: 1. Фиксированный мазок 1–2 мин окрашивают раствором генцианвиолета (генцианвиолет – 1 г, этанол 96 % – 10 мл, фенол кристаллический – 2 г, вода дистиллированная – 100 мл; по методу Синева его покрывают пропитанной тем же красителем полоской фильтровальной бумаги, которую смачивают 2–3 каплями воды). 2. Слив генцианвиолет (сняв полоску бумаги Синева), мазок 1 мин обрабатывают раствором Люголя и, не промывая водой, сливают его. 3. Обесцвечивают спиртом в течение 0,5 мин, промывают водой. 4. Окрашивают 1–2 мин фуксином Пфейффера. 5. Мазок ополаскивают водой и высушивают.
Для выявления грамположительных КИСЛОТО– И СПИРТОУСТОЙЧИВЫХ микобактерий туберкулеза и лепры, которые из–за большого количества в клеточных оболочках жировосковых веществ, миколовой кислоты и других оксикислот непроницаемы для разведенных растворов красителей, используют окраску по методу ЦИЛЯ – НИЛЬСЕНА. Окрашивание их по этому способу достигается при помощи концентрированного фенолового фуксина Циля с подогреванием над пламенем горелки до закипания и отхождения паров. Окрашенные с применением термокислотной обработки микобактерии не обесцвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и этилового спирта.Техника окраски.1. Фиксированный мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, на которую наносят фуксин Циля, и несколько раз подогревают над пламенем горелки до появления паров, подливая краситель, далее бумагу снимают и промывают водой. 2. Препарат обрабатывают (обесцвечивают) 5 % раствором серной кислоты и промывают водой. 3. На мазок наливают водно–спиртовой раствор метиленового синего, спустя 3–5 мин промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в интенсивно красный цвет, остальные виды микробов, обесцвечивающиеся в процессе обработки препарата кислотой, – в светло–синий.
При необходимости дифференциации возбудителей лепры от микобактерии туберкулеза используют окраску мазков по методу Семеновича–Марциновского – микобактерии лепры окрашиваются в красный цвет, а микобактерии туберкулеза остаются неокрашенными.
Для обнаружения КАПСУЛ бактерий, плохо воспринимающих красители, используют метод БУРРИ–ГИНСА: в каплю туши, разведенной в 10 раз водой, вносят исследуемые бактерии и равномерно распределяют их петлей по предметному стеклу; мазок высушивают, фиксируют (наносят 2–3 капли спирта и сжигают его на стекле), окрашивают в течение 3–5 мин фуксином Пфейффера, промывают водой, высушивают; на темном фоне препарата капсулы видны в виде светлых ореолов вокруг красных бактерий.
О наличии ЖГУТИКОВ чаще всего судят по направленному характеру движения бактерий в раздавленной и висячей каплях. Но можно использовать и некоторые методы окраски, например по МОРОЗОВУ: 1) обработка препарата кислотой, при этом оболочки и жгутики разрыхляются; 2) закрепление разрыхленных структур танином; 3) обработка азотнокислым серебром, оно окутывает каждый жгутик и самутолстым слоем, давая различные оттенки от жёлтого до тёмно-коричневого.
СПОРЫ. Эндоспоры бактерий выдерживают длительное кипячение, действие горячего воздуха (140–150°С) и химических дезинфицирующих веществ, многие годы сохраняются в почве, на растительности и предметах. Попадая в организм человека и животных, споры патогенных бактерий прорастают в материнские клетки за несколько часов.
Водным фуксином, водно–спиртовым метиленовым синим и по Граму эндоспоры не окрашиваются, так как их плотная многослойная оболочка непроницаема для обычных красителей. В мазках из патологических материалов, культур бацилл и клостридии, окрашенных простыми красителями, споры выглядят в виде бесцветных телец внутри окрашенных в соответствующий цвет вегетативных клеток или вне их. Окрашивать их можно по методу Циля–Нельсена, используя для обесцвечивания мазков после обработки их фуксином Циля не 5%, а 1% серную кислоту. При этом эндоспоры, так же как микобактерии туберкулеза, красятся в розовый цвет и будут хорошо видны на синем фоне бактерий. Для окрашивания спор можно использовать метод по ОЖЕШКО: 1) протравка оболочки споры горячей кислотой; 2) окраска по Цилю–Нильсену.
При исследовании морфологии паразитов крови (спирохеты – бледная трепонема, простейшие – малярийный плазмодий), а т/же ФЭ, используют окраску по РОМАНОВСКОМУ–ГИМЗА. Краска состоит из смеси азура, эозина и метиленовой сини. Окрашивает ЦИТОПЛАЦМУ в голубой, а ЯДРА в красно–фиолетовый цвет. Этот метод позволяет обнаружить различные цитологические детали.
Мазок для люминесцентной микроскопииготовят обычным образом, фиксируют в ацетоне и наносят на него флюорохром на 20–30 мин. Сделанный препарат промывают проточной водой, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.
34. Медицинская биотехнология и генная инженерия.
Биотехнология – наука, разрабатывающая получение различных сложных орг. соединений с помощью микроорганизмов: бактерий, простейших, водорослей.
Б. основанана на достижениях генной инженерии, которая разрабатывает методы получения геномов с необходимым (заданным) набором генов. Это стало возможно после открытия фермента обратной транскриптазы (ревертазы), который наращивает нить ДНК, используя молекулу РНК в качестве матрицы (этот фермент изначально содержался в некоторых вирусах).
Благодаря биотехнологии чел-во получает огромное кол-во лекарств: "челов." инсулин, "челов." интерферон, многие антибиотики, а также моноклональные антитела и проч.
35. Микробиологические основы антимикробной профилактики и терапии. Асептика, антисептика, дезинфекция, стерилизация (определение понятий, методы).
Противомикробным действием обладают:
- галогены и их соединения (йод, йодоформ, хлорамин Б, пантоцид),
- окислители (Н2О2,, KMnO4),
- кислоты, щелочи их соли (бензойная, аммиак и его соли),
- спирты (70–80% этанол),
- альдегиды (формальдегид, уротропин, .уросал),
- соли тяжелых Ме (Hg, Ag, Au, Cu, Pb, Zn),
- фенол и его производные (резорцин, хлорофен),
- производные нитрофурана (фурацилин, фурагин фуразолидон),
- поверхностно-активные вещества (хлоргексидин, грамицидин),
- длинноцепочечные жирные кислоты,
- фитонциды, антибиотики, красители (метиленовый синий, бриллиантовый зеленый).
По МЕХАНИЗМУ ДЕЙСТВИЯ разделяются на:
а) деполимеризующие пептидогликан клеточной стенки,
б) ↑ проницаемость мембраны,
в) блокирующие БХ реакции,
г) денатурирующие ферменты,
д) окисляющие метаболиты и ферменты мк,
е) растворяющие липопротеиновые структуры,
ж) повреждающие генетический аппарат или блокирующие его функции.
АНТИМИКРОБНЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ. В основе методов профилактики и борьбы лежат прямые, косвенные и комплексные методы уничтожения или подавления жизнедеятельности условно-патогенных микроорганизмов.
Прямые методы называются МИКРОБНОЙ ДЕКОНТАМИНАЦИЕЙ – полное или частичное удаление мкс объектов внеш среды и биотопов человека с помощью факторов прямого повреждающего действия. Существует 2 различных типа деконтаминации: микробная деконтаминация ОБЪЕКТОВ ВНЕШ СРЕДЫ (стерилизация и дезинфекция) и ЖИВЫХ(антисептика и химиотерапия).
Деконтаминация объектов внеш среды:Дезинфекция– совокупность хим, физ и механических способов ПОЛНОГО УНИЧТОЖЕНИЯ вегетативных и споровых форм определенных групп мк. ЦЕЛЬ – предупреждение передачи возбудителей ч/з объекты внеш среды. Для этого чаще используют хим вещества с широким спектром микробоцидного действия (дезинфектанты), реже сочетают дезинфектант с t°С обработкой (пароформалиновая дезинфекция), с поверхностно-активными веществами.
Деконтаминация живых :Антисептика– совокупность способов ПОДАВЛЕНИЯ РОСТА И РАЗМНОЖЕНИЯ мкна интактных или поврежденных поверхностях кожи и слизистых оболочках тела. Основной метод – обработка биотопов хим веществами преимущественно с микробостатическим действием (антисептиками) с учетом спектра их активности и чувствительности возбудителей. ЦЕЛЬ – подавление патогенных и условно-патогенных мкпри сохранения аутохтонных видов. Исключение составляет антисептическая ОБРАБОТКА РУК хирурга и операционного поля пациента, ран и слизистых оболочек иммунодефицитных лиц (необходимо полное освобождение отвсех мк).
Асептика– использует прямые (стерилизацию, дезинфекцию, антисептику) и косвенные (разделительные меры) методы воздействия на мк. ЦЕЛЬ – созданиебезмикробной (гнотобиотической) зоны или зоны срезко сниженной численностью мкв местах нахождения больных (инфекционные боксы, при трансплантации органов, кювет для недоношенного ребенка и др.) или проведения медицинских вмешательств (операционная, родильный зал) и лабораторных исследований.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ –полное уничтожение всех микроорганизмов. Стерилизуют посуду, инструменты, питательные среды, лекарственные препараты, перевязочные средства, медицинское белье, эндоскопические аппараты и другие объекты. Для их стерилизации применяются в основном физические и механические методы.
Стерилизация в пламенипроводится для обеззараживания бактериальных петель, игл, предметных и покровных стекол, пинцетов.
Стерилизация горячим воздухомпроводится в электрических сухожаровых шкафах, имеющих различную форму и размеры, снабженных хорошей тепловой изоляцией. Необходимая температура автоматически поддерживается терморегулятором. Cтерилизуют лабораторную посуду и шприцы при температуре 180С в течение 1 ч. Чашки Петри, пастеровские и градуированные пипетки помещают в специальные металлические пеналы или заворачивают в бумагу по несколько штук. Пробирки и колбы закрывают ватными пробками.
Стерилизация паромпроводится двумя способами: насыщенным паром под давлением и текучим паром.
СТЕРИЛИЗАЦИЮ ПАРОМ ПОД ДАВЛЕНИЕМ осуществляют в автоклаве, который представляет собой толстостенный котел цилиндрической формы, покрытый снаружи кожухом и герметически закрывающийся крышкой, бывают горизонтальные и вертикальные. Пар поступает в рабочую камеру из маленького котла, воду в котором нагревают электротоком. Давление измеряют манометром.
Не изменяющиеся под действием высокой температуры и давления питательные среды (МПА, МПБ), растворы или посуду с заразным материалом стерилизуют при 1 атм (121°С) 15–20 мин; среды с углеводами и нативными белками – при 0,5 атм (110°С) 5–10 мин; материал и посуду, содержащие бациллы сибирской язвы, обеззараживают при 1 атм в течение 2ч.
Контроль за соблюдением режимных параметров работы автоклава проводится с помощью максимального термометра. В отдельных случаях в автоклав помещают бензойную кислоту или бензонафтол с точками плавления 120°С и 110°С.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ ТЕКУЧИМ ПАРОМ проводится троекратно (дробно) в течение трех дней по 30–60 мин в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране или в спец аппарате, который представляет собой металлический цилиндр, покрытый теплоизоляционным материалом с отверстием в конической крышке для выхода пара, краном и указательной трубкой в донной части. Внутри аппарата имеется подставка для стерилизуемых материалов. Залитую в него воду подогревают любым источником тепла. В текучепаровом аппарате стерилизуют питательные среды, изменяющие свои свойства при температуре выше 100°С: молоко, желатину, картофель и среды с углеводами. Вегетативные формы микроорганизмов при такой стерилизации погибают, а споры сохраняются. Спустя сутки при комнатной температуре часть из них прорастает и повторное воздействие пара их уничтожает. Прогреванием на третьи сутки полностью обезвреживают всю спороносную микрофлору, которая к этому времени завершает вегетацию.
Свертывание (уплотнение) сыворотки и яичных средпроизводят в двустенном свертывателе с электрическим нагревом. Аппарат покрыт теплоизоляционным материалом и имеет стеклянную и металлическую крышки. Воду в свертыватель наливают через имеющееся в его верхней части отверстие, которое закрывается пробкой с вмонтированным термометром. Пробирки со средами укладывают на дно свертывателя в наклонном положении. Прогревают среды однократно или дробно при температуре 80–90С в течение 1 ч.
Фильтрованиекак механический способ стерилизации может быть использовано для обеспложивания жидких веществ, которые нежелательно подвергать действию высокой температуры, например сывороток, антибиотиков. Для этого изготовляют мелкопористые фильтры с точно градуированными порами, которые задерживают микроорганизмы.
В быту используется стерилизация кипячением для обработки игл и шприцев. Кипятят их в стерилизаторах 30–45 мин. Для повышения точки кипения и устранения жесткости воды добавляют 1 % соды. Этот метод не обеспечивает полного уничтожения микробов, так как споры бактерий и некоторые вирусы выдерживают кипячение в течение нескольких часов.
36. Антибиотики. Биохимические и генетические механизмы лекарственной устойчивости микроорганизмов. Методы определения антибиотикочувствительности бактерий.
Открыл Флемминг в 1928г, затем были созданы синтетические. Это продукты жизнедеятельности живых , а т/же синтетические в-ва, обладающие способностью убивать или тормозить рост и размножение мкin vivo et in vitro. Известно >1000 антибиотиков и >2 тыс НМС, способных тормозить рост и размножение. Но выбор АБ ограничен, т.к. большая их часть ТОКСИЧНЫ для МК.
По МЕХАНИЗМУ ДЕЙСТВИЯ выделяют: БАКТЕРИЦИДНЫЕ (убивают) и БАКТЕРИОСТАТИЧЕСКИЕ (тормозят рост и размножение, после устранения АБ рост и размножение возобновляются).
ТРЕБОВАНИЯ к АБ:
Minвлиять наМК.
Maxантимикробный эффект в условиях МК.
Медленно развивающаяся зависимость со стороны мк.
Хорошо растворяться и быть устойчивы в обычных услових хранения.
Сохранять антимикробное действие вне зависимости от среды.
Антимикробное действие должно проявляться вне зависимости от того, где находится мк– внутри или вне.
Желательно, чтобы обладал иммуностимулирующим действием.
КЛАССИФИКАЦИЯ:
По происхождению:
продуцируются БАКТЕРИЯМИ (грамицидин, полимиксин) – борьба м/у мкв естественных условиях
синтезируются АКТИНОМИЦЕТАМИ (стрептомицин, неомицин) – род Streptomycesосновной продуцнет антибиотиков.
Продуцируются ПЛЕСНЕВЫМИ ГРИБАМИ (пенициллин, циклоспорин) – род Penicillium, первый антибиотик.
РАСТИТЕЛЬНОГО происхождения (аллицин)
ЖИВОТНОГО происхождения (лизоцим, интерферон)
По спектру антимикробного действия:
УЗКИЙ спектр действия – только на гр+ или гр–
ШИРОКОГО АНТИБАКТ спектра действия – на гр+ и гр–
ШИРОКОГО спектра действия – на Б!!, + хламидий, риккетсий, спирохет
АНТИГРИБКОВОГО действия (нистатин, леваин)
Действующие на МИКОБАКТЕРИИ – лечат tbc(стрептомицин)
ПРОТИВООПУХОЛЕГО действия – действуют на синтез НК
с ИММУНОСУПРЕССИВНЫМ действием – при пересадке органов.
По механизму действия:
Подавляющие синтез СТЕНКИ мк(пенициллин). Если мкпереходит вL–форму, АБ не эффективен.
Нарушающие ПРОНИЦАЕМОСТЬ мбны, оказывают бактерицидное действие (нистатин, грамицидин).
Нарушающие СИНТЕЗ БЕЛКА (эритромицин, тетрациклин) – действуют только на 70Sрибосомы.
Ингибирующие ДЫХАТЕЛЬНУЮ ЦЕПЬ – бактерицидное (цианиды).
Нарушающие СИНТЕЗ НК – не только на Б!!, но и на В!!, раковые (бактериостатическое).
Устойчивость мк к АБ делится на:
НЕГЕНЕТИЧЕСКАЯ: 1) утрата рецепторов к АБ на поверхности Б!!
↓ метаболической активности АБ, действующие на синтез не работают
если микроб расположен внутри хозяина, то многие АБ не могут на них воздействовать, т.к. не проникают вМК
ГЕНЕТИЧЕСКАЯ– проявляется чаще. Обусловлена следующими факторами:
НЕХРОМОСОМНЫЕ – плазмиды (R-плазмида), придающие устойчивость. Чем больше генов в плазмиде, тем более устойчивы Б!!
R-плазмида содержит гены, контролирующие синтез ферментов, которые разрушают антибиотик (пенициллаза или бета–лактамаза). Плазмиды передаются в процессе конъюгации в пределах вида или рода.
ХРОМОСОМНЫЕ – определяются Мт в структуре самой хромосоме. В основном они вызываются транспозонами и IS–элементами. Если в популяции появляется устойчивый мутант, то он выживает и активно размножается, а остальные гибнут.При лечении не рекомендуется использовать один и тот же АБ, т.к. с устойчивой инфекцией бороться гораздо сложнее.
КОСВЕННАЯ РЕЗИСТИВНОСТЬ – при заражении смешанной инфекцией устойчивые мкбудут разрушать АБ, предотвращая его воздействие на чувствительные мк(они будут выжывать).
37. Экология микроорганизмов. Роль микроорганизмов в круговороте веществ в природе, микрофлора основных сред обитания.
САНИТАРНАЯ МБизучает санитарное состояние среды и мкФ, а т/же её опасность. Люди и теплокровные Ж!! – основные источники распространения большинства инфекционных болезней. Наиболее массивное выделение патогенных мкпроисходит воздушно-капельным или фекально-оральным ПУТЁМ. Сан/МБ исследование необходимо для РЕШЕНИЯ вопроса о наличии или отсутствии мк, патогенных для чка, на объектах окр среды. Обнаружить их в окр среде сложноопределяют загрязнение ВЫДЕЛЕНИЯМИ чка или Ж!!. Если загрязнение есть, то вполне вероятно, что вместе с выделениями в среду попали и патогенные мк. Т.о, определение фекального или воздушно-капельного загрязнения достаточно надёжно при оценки потенциальной опасности для здоровья чка.
Полости тела чка, сообщающиеся с внеш средой, заселены NмкФ. Обнаружение представителей этой мкФ свидетельствует о загрязнении соответствующими выделениями, т/е мкназываются САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫМИ. Они должны отвечать следующим требованиям, должны:
постоянно и в больших кол-вах содержаться в выделениях чка и большого круга теплокровных Ж!!
не должны иметь прир резервуара или естественных мест обитания
сохранять жизнеспособность в столько же, сколько и патогенные мк, выводимые изтеми же путями
интенсивно размножаться в окружающей среде
легко обнаруживаться МБ методами и подвергаться кол-венному определению
достаточно типичными, чтобы их дифференциальная диагностика осуществлялась без особого труда.
САН-ПОКАЗАТЕЛЬНЫЕ мк В РАЗЛ ОБЛАСТЯХ СРЕДЫ
ВОДА – кишечные палочки и энтерококки.
ПОЧВА – кишечные палочки, энтерококки, Clostridiumperfringens, термофилы.
ВОЗДУХ– стрепто- (зеленящие и гемолитические), патогенные стафилококки.
ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ – кишечные палочки, энтерококки, патогенные стафилококки, протей.
ПРЕДМЕТЫ обихода – киш палочки, энтерококки, патогенные стафилококки.
МЕТОДЫ САН-БИОЛ ИССЛЕДОВАНИЙ
Определение суммарного обсеменения (микробного числа) объектов.
Определение и титрование санитарно-показательных мк.
Обнаружение патогенных мкили продуктов их жизнедеятельности.
Определение микробной порчи изучаемых субстратов.
ПОЧВА. Плотность мкФ особенно высока в черноземных почвах, хорошо удобряемых сероземах. Максимальна на глубине 10-20 см, в верхнем слое и на глубине >1-2м мкмало. Мкпочвы осуществляют синтез биомассы и аккумуляцию энергии, фиксируютN, обеспечивают брожение, гниение, нитрификацию и денитрификацию, трансформациюS,Pи других элементов. Почва содержит также мк, поступающие из воды, воздуха и от животных. С водой в почву попадают патогенные и условно-патогенные мк. В нормально функционирующей почве интенсивно протекает процесс самоочищения: органические вещества перерабатываются в гумус и почва освобождается от несвойственных ей грибов и бактерий.
Сроки выживания патогенных микробов в почве зависят от их вида и интенсивности процессов самоочищения. Аспорогенные пат и условно-пат Б!!, В!! выживают в течение нескольких дней – месяцев; споры возбудителей столбняка, сибирской язвы, анаэробной инфекции – много лет. Для возбудителей ботулизма, актиномикоза, глубоких микозов – естественная среда обитания.
Сан/МБ состояние почвы оценивается по отношению кол-ва термофильных Б!! и бактерий – показателей фекального загрязнения. Преобладание санитарно-показательных бактерий → санитарно неблагополучные почвы. Для определения давности фекального загрязнения почвы определяют несколько. Присутствие в почвеЕ. coli и Streptococcus faecalis указывает на свежее;Citrobacter и Enterobacter – не свежее,aClostridium perfringens –на давнее загрязнение. Более точная оценка – с помощью определения коли-индекса (кол-во БГКП в 1 г почвы), перфрингенс-титра (масса почвы, в которой обнаружена особь видаCl.perfringens), общей численности сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1 г почвы.
ВОДОЕМЫ. Вода открытых водоемов (как и почва) – естественная среда обитания разн Б!!, Г!!, В!!, П!!. В грунтовых водах – единичные мк. Кол-венный и кач состав микробиоценозов зависит от концентрации минеральных и орг в-в, физ-хим состояния,t°С, рН, концентрации О2и СО2и др. Состав мкна поверхности воды и на дне различен. В иле активно протекают гниение и брожение, хемоаутотрофноый и гетеротрофный синтез. На поверхности – образуется пленка, в которой протекает фотосинтез. В прибрежной зоне открытых водоемов, особенно вблизи крупных населенных пунктов, вода содержит большое количество заносных патогенных и условно-патогенных микробов.
Сроки выживания зависят от вида, дозы, t°С воды, степени насыщения органическими веществами, рН, солнечная радиация, тип водоисточника. Споры возбудителя сибирской язвы могут сохраняться в воде годы; многие месяцы –энтеровирусы, сальмонеллы, лептоспиры, вирус гепатита А; дни – недели - возбудители дизентерии, холеры, бруцеллеза.
Сан/МБ состояние оценивается по:
микробному числу (кол-во хемоорганотрофных бактерий в 1 мл воды);
коли-титру (наименьший объем воды, в котором обнаруживается БГКП)
коли-индексу (кол-во БГКП в 1 л воды).
Т/ же определяют наличие энтерококков, сальмонелл, холерного вибриона, энтеровирусов.
Согласно ГОСТу на питьевую водопроводную воду, ее коли-титр должен быть ≥300, коли-индекс – ≤3, а микробное число – ≤100.
ВОЗДУХ непригоден для размножения мк(недостаточно влаги и пит в-в + солнечная радиация и высушивание). Обнаруживаемые микробы поступают из почвы, с поверхностей. Видовой и численный состав мкФ зависит от интенсивности солнечной радиации, ветра, осадков, покрова почвы, плотности населения и др. Преобладают споры грибов, актиномицетов, бацилл, пигментообразующие виды аспорогенных бактерий. В жилых помещениях содержится в основном мкдыхательных путей и кожи чка.
Сан/МБ состояние по:
микробному числу (количеству особей в 1 м3воздуха),
наличию сан-показательных Б!! – представителей микрофлоры дыхательных путей (гемолитические стрептококки, золотистый стафилоккок).
ЗНАЧЕНИЕ мк ДЛЯ ОКР СРЕДЫ
Участвуют в круговороте веществ, нитрифицирующие Б!! разлагают аммиак, соли аммония и азотистой кислоты, фиксируют N(важно для растений), разлагают орг в-ва, образуют гумус (↑ плодородие почв), участвуют в круговоротеC,S,Pи др элементов, разрушают попадающие в воду и почву ксенобиотики (обычно не встречаются в природе, появляются в результате деятельности человека).
С развитием молекулярной генетики возникла проблема защиты природы от искусственных мутантов, а с выходом человека в космос – предупреждение заноса на нашу планету внеземных и попадания в космос земных микроорганизмов.
38. Микрофлора человека и её значение.
Пока ребенок находится в утробе, он стерилен. При рождении и в течение нескольких лет после рождения в различных его биотопах формируется определённая мкФ. Аутомикрофлора взрослого человека остается постоянной.
По большей части мкФ у всех людей одинакова, но в составе микробиоценозов есть индивидуальные различия (в основном количественные, иногда качественные). Обмен мкФ (дет сады, ясли, школы, казармы, больницы и др) м.б. опасным, т.к. многие мкявляются условно-патогенными.
При использовании АБ для лечения больных возможна гибель отдельных представителей аутофлоры такие нарушения нужно корректировать.
МкФ кожи.Различают собственную и транзиторную (быстро погибает под влиянием бактерицидных свойств кожи и антагонизма аутохтонных видов).
Постоянная мкФ – стафилококки (в первую очередь эпидермальные, т/же золотистые, сапрофитные) и коринебактерии. МЕСТО ОБИТАНИЯ – роговой слой кожи, сальные железы, волосяные мешочки. Т/же – стрептококки, Candida, спорообразующие аэробные бактерии. КОЛИЧЕСТВО мкна разных участках кожи зависит от пола, возраста и состояния здоровья (от нескольких сотен до тысяч на 1 см2). Наибольшее число мк– в складках кожи, видовой состав сильно меняется по мере приближения к естественным выходам полостей.
ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ мкФ кожи: выявление общей резистентности (по индексу бактерицидности), в динамике лечения антибиотиками, гормонами, лучевой терапии. Обследованию подвергаются также персонал клиник, детских учреждений и др.
ЖКТ. Желудок. Несмотря на попадание с большого кол-ва мк, в 1 мл желудочного содержимого обнаруживается лишь несколько десятков тысяч особей (в основном – кислотоустойчивые лактобактерии, дрожжи и др.). Большинство погибают под действием HCl желудочного сока.
Тонкая кишка. В 12-ПЕРСТНОЙ КИШКЕ – количество 104–105/ 1 мл – лактобактерии (отличаются по адгезивным свойствам от тех, что находят в полости рта и желудка), бифидумбактерии, фекальные стрептококки. По ходу кишки мкФ меняется: ↑ кол-во перечисленных видов и появляются представители, характерные для толстой кишки.
Толстая кишка– мкФ наиболее разнообразна и велика по сравнению со всеми другими биотопами по числу видов и количеству микробов – 109-1011/ 1 г содержимого. Преобладают анаэробы: бифидумбактерии, бактероиды, лактобактерии, клостридии (составляют 96-99%). Аэробы и факультативные анаэробы (1-4%) – энтеробактерии, стафилококки, стрептококки (в основном фекальные), Candida, кишечные амебы и др.
В мкФ ЖКТ различаютМУКОЗНУЮ (М)(связана со слизистой оболочкой вследствие выраженной адгезии) иПРОСВЕТНУЮ (П)флору.
М-флора более стабильна, представлена бифидум–и лактобактериями, они обусловливают КОЛОНИЗАЦИОННУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ толстой кишки, конкурируя с пат и условно-пат мкза рецепторы эпителиальных.
П-флора кроме бифидум- и лактобактерий включает и другие мк.
Состав мкФ кишечника меняется в течение жизни: сразу после рождения, развивается бифидум-флора (стимулируют вещества в грудном молоке), она формируется на 5-6 день и становится основой микробиоценоза здорового ребенка. Их кол-во составляет 109–1010/ 1 г. У детей, искусственно вскармливаемых, и у недоношенных формирование бифидумфлоры замедленокишечные палочки, энтерококки, стафилококки и лактобактериичаще страдают кишечными заболеваниями.
Дыхательные пути.Большая часть мквоздуха задерживается в ПОЛОСТИ НОСА, где погибает через некоторое время. Собственная мкФ носа = стафилококки, дифтероиды, нейссерии, у некоторых – условно-пат золотистые стафилококки (резидентное носительство).
Слизистая ТРАХЕИ И БРОНХОВ почти стерильна благодаря очищению воздуха при прохождении через ВДП, отдельные мквыбрасываются движениями ворсинок эпителия или уничтожаются макрофагами. При нарушении активности эпителия (ингаляционный наркоз, ЗОД, иммунодефициты) мкмогут проникнуть в глубь бронхиального дерева. МЕЛКИЕ БРОНХИ, АЛЬВЕОЛЫ, паренхима легких стерильны.
Незрелость детского , особенно у недоношенных (↓ синтеза сурфактанта, недостаточная продукция IgА) → несовершенство защитных механизмов ОД, м.б. причиной респираторных заболеваний.
Конъюнктива глаза. Бактерицидная СЛЕЗНАЯ ЖИДКОСТЬ уничтожает большинство мк. Но здесь могут обитать в небольших кол-вах коринебактерии, стафилококки, стрептококки пневмонии. При снижении естественной защиты → воспалительные процессы, эндогенные инфекции.
МПС.Почки, мочеточники и моча в мочевом пузыре стерильны. В нижней части уретры встречаются стрептококки, бактероиды, коринебактерии, микобактерии и гр– Б!! кишечного происхождения. На наружных половых органах обитают микобактерии смегмы (морфологически сходные с tbc), и сапрофитная трепонема (сходна с возбудителем сифилиса), а т/же стафилококки, микоплазмы.
МкФ влагалища формируется спустя 12–24ч после рождения, сначала состоит из молочнокислых бактерий, полученных от матери при родах. Затем появляются энтерококки, стрептококки, стафилококки, коринебактерии. С наступлением половой зрелости (↑ эстрогенов, ↓ рН влагалищного секрета) развиваются палочки Додерлайна. Полостьматки стерильна.
Различают несколько КАТЕГОРИЙ ЧИСТОТЫ влагалища здоровых женщин:
рН кислая, много палочек Додерлайна, др мкпочти нет;
и 3: рН слабокислая или слабощелочная, кроме палочек Додерлайна (мало), есть стрепто–, стафилококки и обнаруживаются лейкоциты;
рН щелочная, много лейкоцитов, единичные палочки Додерлайна и множество др мк(стафило–, стрептококки, м.б. энтеробактерии, бактероиды и др).
На состояние мкФ влагалища благоприятно влияет беременность (часто 3 категория → во 2 и даже в 1). Гормональная перестройка благоприятствует развитию молочнокислой флоры, с которой встречается новорожденный. Прерывание беременности → изменения микрофлоры в неблагоприятную сторону, частые воспалительные процессы (эндогенной инфекцией).
Функции мкФ.ЗАЩИТНАЯ – относится к факторам ЕСТЕСТВЕННОГО ИММУНИТЕТА, т.к. большинство аутохтонных мкантагонисты по отношению к патогенам. Особенно –бифидум- и лактобактерии(выделяют кислоты, спирты, лизоцим, бактериоцины, ингибируют выделение энтеропатогенными эшерихиями ТЛ токсина, способствуют всасыванию кальция, Fe, синтезируют АК и белки, витамины). Своевременное формирование и заселение микробиоценоза бифидумбактериями у грудных детей отражаются на здоровье не только в раннем возрасте, но на протяжении всей жизни.
МкФ ЖКТ способствуют ПИЩЕВАРЕНИЮ: обменлипидов, жиров и жирных кислот, разложение желчных кислот, образование стеркобилиногена, копростерина. Обменбелка– разлагают с образованием индола, скатола, фенола, что способствуют перистальтике.Кислоты и газы– благоприятно влияют на обмен веществ, перистальтику, процессы всасывания и образования кала.
ИММУНИЗИРУЮЩЕЕ СВОЙСТВО. Бактериальная мкФ способствует организации и созреванию иммунной системы. В опытах на стерильных животных (ГНОТОБИОНТАХ) показано, что масса и количество центров размножения в лимфоузлах безмикробных Ж!! ↓ в несколько раз. Гнотобионты не способны сохранить свое здоровье при контакте с мк, и погибают от инфекционных процессов, вызываемых у них такими видами, к которым Ж!!, выросшие в обычных условиях, не восприимчивы вовсе.
При переохлаждении, перегревании, нарушении сна, психических стрессовых воздействиях, ИО и др. нарушаются взаимоотношения МКи населяющей его тело микрофлоры → микробы-симбионты распространяются, проникают во внутр среду и вызывают патологические процессы.
Нарушение кач и кол-венного состава мкФ тела чка, перемещение ее в другие биотопы –дисбактериоз (дисбиоз, дисмикробиоз).