ПРАКТИЧЕСКИЕ НАВЫКИ ПО МЕДИЦИНСКОЙ

МИКРОБИОЛОГИИ

ПЕРЕЧЕНЬ ЗАДАНИЙ

1.	Определить морфологию микроорганизмов (по готовым мазкам).
2.	Определить морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов (по готовым мазкам).
3.	Приготовить мазок из агаровой культуры, окрасить по Граму. Определить морфологические и тинкториальные свойства.
4.	Произвести бактериоскопическое исследование гноя и определить морфологию и тинкториальные свойства имеющихся микроорганизмов.
5.	Сделать посев исследуемого материала петлей на жидкую питательную среду.
6.	Выполнить 1 этап выделения чистой культуры, оценить культуральные свойства по готовым посевам.
7.	Произвести посев на косой агар с целью выделения чистой культуры микроорганизмов.
8.	Сделать посев исследуемого материала на чашку с МПА сплошным газоном.
9.	Учесть биохимические свойства выделенной культуры.
10.	Выполнить 1 этап бактериологического исследования испражнений больного при подозрении на дизентерию, колиэнтерит.
11.	Определить вид микроба по антигенным свойствам в реакции агглютинации с адсорбированной агглютинирующей сывороткой.
12.	Поставить и оценить ориентировочную реакцию агглютинации для определения вида микроба.
13.	Учесть результат ПЦР.
14.	Поставить реакцию преципитации для определения антигена в ликворе больного.
15.	Оценить РПГА для определения наличия столбнячного токсина в фильтрате исследуемого материала (по демонстрационному материалу).
16.	Оценить РГА для индикации вируса по демонстрационному материалу.
17.	Оценить РТГА в парных сыворотках больного с целью серодиагностики вирусных инфекций.
18.	Поставить и оценить РПГА в планшете для определения титра антител в сыворотке больного по демонстрационному ряду.
19.	Учесть ИФА для определения антител в исследуемой сыворотке по демонстрационному материалу.
20.	Поставить опыт по определению чувствительности культуры микроорганизмов к антибиотикам методом бумажных дисков. Оценить опыт по демонстрационным посевам.
21.	Определить МПК (минимальной подавляющей концентрации) антибиотика методом серийных разведений в бульоне (по демонстрационному ряду).
22.	Среда Эндо.
23.	Среда Плоскирева.
24.	Среда Гисса.
25.	Среда Китта–Тароцци.
26.	Среда Ресселя.
27.	Среда Кесслера.
28.	Среда ЖСА.

1. Определить морфологию микроорганизмов (по готовым мазкам).

Морфологию микроорганизмов определяют путем микроскопии мазков в световом микроскопе с иммерсионной системой.

На окрашенный мазок наносят каплю иммерсионного масла, помещают препарат на столик микроскопа и под контролем зрения опускают иммерсионный объектив в масло. Макровинтом находят поле зрения, затем микровинтом устанавливают четкость изображения. Изучают форму (кокки, палочки, спирохеты), размеры, расположение микроорганизмов. В зависимости от способа окраски выявляют дополнительные структуры (капсулу, споры, зерна волютина и т.д.).

2. Определить морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов (по готовым мазкам).

Взять предметное стекло с готовым микропрепаратом, окрашенным по Граму. Нанести на препарат каплю иммерсионного масла. Провести микроскопию в световом микроскопе с увеличением объектива 90.

Определить форму микробных клеток и отношение к окраске по Граму.

3. Приготовить мазок из агаровой культуры, окрасить по Граму. Определить морфологические и тинкториальные свойства.

Стекло обезжиривают мылом, ограничивают стеклографом место для нанесения мазка с обратной стороны от обезжиривания. Стерильной бактериологической петлей на стекло наносят каплю физиологического раствора.

Пробирку с агаровой культурой бактерий берут в левую руку, а петлю за петледержатель – в правую. Петлю прожигают в пламени горелки до покраснения. Вращательным движением вынимают из пробирки ватную пробку, прижимая ее IV и V пальцами правой руки к ладони, и обжигают край пробирки. Осторожно вводят петлю в пробирку со скошенным агаром, охлаждая петлю о внутреннюю поверхность, после чего легким скользящим движением берут материал. Затем вынимают петлю из пробирки, снова обжигают ее край и закрывают пробкой.

Петлей с культурой прикасаются к капле физиологического раствора до появления легкого помутнения. Избыток культуры сжигают в пламени спиртовки, после чего петлю охлаждают прикосновением к стеклу и равномерно распределяют каплю по стеклу в виде круга. Мазок высушивают, фиксируют трехкратным проведением препарата через пламя горелки. Окрашивают мазок по Граму: наносят на фильтровальную бумагу, пропитанную карболово–спиртовым раствором генцианового фиолетового, дистиллированную воду на 1–2 минуты, снимают фильтрованную бумагу, наносят раствор Люголя на 1–2 минуты, сливают его и наливают пипеткой этиловый спирт на 30 секунд. Тщательно промывают водой, докрашивают водным раствором фуксина 1–2 минуты. Промывают и высушивают мазок. Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные – в красный.

4. Произвести бактериоскопическое исследование гноя и определить морфологию и тинкториальные свойства имеющихся микроорганизмов.

Взять чистое предметное стекло, произвести обезжиривание его натиранием кусочком сухого мыла, мыло со стекла тщательно удалить с помощью ваты. Место мазка на стекле обозначить карандашом-стеклографом в виде овала в центре стекла площадью примерно 1/3 предметного стекла. Овал начертить на стороне, обратной обезжиренной.

Взять в правую руку бактериальную петлю, простерилизовать в пламени горелки. В левую руку взять пробирку с гноем. Мизинцем правой руки плотно захватить наружный конец ватной пробки, прижав ее к ладонной поверхности руки, и вынуть пробку из пробирки. Обжечь край пробирки в пламени спиртовки. Опустить петлю в пробирку, остудив о стенку, взять материал. Вынуть петлю из пробирки. Быстро обжечь край пробирки и внутреннюю часть пробки. Пробирку закрыть пробкой, поставить в штатив.

На предметное стекло в центр овала внести каплю гноя и равномерно круговыми движениями распределить по всей площади овала. После этого петлю тотчас же, не выпуская из рук, простерилизовать в пламени горелки.

Мазок высушить при комнатной температуре на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки.

Сухой мазок зафиксировать нагреванием на пламени горелки. Стекло держать за край мазком вверх и 3 раза провести через среднюю часть пламени.

Зафиксированный мазок окрасить по Граму (см. это в вопросе №3).

На окрашенный препарат нанести каплю иммерсионного масла. Провести микроскопию в световом микроскопе с увеличением объектива 90.

Определить форму микробных клеток и отношение к окраске по Граму.

5. Сделать посев исследуемого материала петлей на жидкую и плотную питательные среды.

Пробирку с исследуемым материалом берут в левую руку, а петлю за петледержатель – в правую. Петлю прожигают в пламени горелки до покраснения. Вращательным движением вынимают из пробирки ватную пробку, прижимая ее V и IV пальцами правой руки к ладони, и обжигают край пробирки. Осторожно вводят петлю в пробирку, охлаждая ее о внутреннюю поверхность, после чего легким скользящим движением берут материал. Затем вынимают петлю из пробирки, снова обжигают ее край и закрывают пробкой. Далее в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют материал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Открывают пробирку с жидкой средой и вносят материал петлей в верхнюю часть жидкой среды. Пробирку закрывают как описано выше.

6. Выполнить 1 этап выделения чистой культуры, оценить культуральные свойства по готовым посевам.

Бактериологическую петлю стерилизуют в пламени спиртовки (до ее покраснения). Над пламенем спиртовки открывают пробирку с исследуемым материалом. Мизинцем и ладонной поверхностью правой кисти зажимают пробку и вынимают ее. Обжигают края пробирки и пробку, петлю держат как писчее перо. Погружают петлю в исследуемый материал после ее охлаждения в пробирке. Извлекают петлю материала, закрывают пробку над пламенем спиртовки и ставят ее в штатив. Слегка открывают чашку Петри. Для разобщения микробных клеток материал распределяют петлей параллельными штрихами на обе половины чашки. Закрытую чашку, дном кверху, помещают в термостат на 24 часа. Оценку культуральных свойств проводят с учетом величины, пигмента, формы, края колонии и консистенции колонии.