18. Поставить рпга для определения титра антител в сыворотке больного. Оценить реакцию по демонстрационному ряду.

Используют стандартные антигенные эритроцитарные диагностикумы. В пробирках готовят последовательные разведения сыворотки больного, ориентируясь на диагностический титр. Затем в каждую пробирку вносят одинаковый объем 3% суспензии нагруженных антигеном эритроцитов (эритроцитарного диагностикума). Через 2 ч инкубации при 37⁰С учитывают результат, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): отрицательная реакция – осадок эритроцитов в виде компактного диска или колечка с ровными краями на дна лунки, положительная реакция – характерный кружевной вид осадка эритроцитов, тонкая пленка с неровными краями.

19. Определить титр антител в ИФА по демонстрационному материалу.

Сначала оценивают контрольные пробы:

1. Отрицательная проба – лунка, в которой цвет пробы прозрачный со слегка желтоватым оттенком.

2. Положительная проба – лунка, в которой цвет среды коричневый.

После этого учитывают лунки, в которых находятся разведения исследуемой сыворотки (1:2, 1:4, 1:8 и т.д.). За титр антител принимают последнее разведение, в котором цвет пробы совпадает с цветом положительной пробы.

20. Поставить опыт по определению чувствительности культуры микроорганизмов к антибиотикам методом бумажных дисков. Оценить опыт по демонстрационным посевам.

Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри. Для этого извлекают из бумажной упаковки стерильную пипетку, ее берут в правую руку. В левую руку берут пробирку с 1 млрд взвесью бактериальной культуры, открывают над спиртовкой пробку 4 –5 пальцами правой кисти. Набирают в пипетку 1 мл культуры, располагают пипетку горизонтально (чтобы случайно не вылить содержимое на стол), обжигают края пробирки и закрывают ее пробкой. Приоткрыв чашку Петри с МПА, выливают 1 мл культуры на агар. Чашку закрывают и распределяют культуру по поверхности агара, оставляют на несколько минут (для всасывания жидкости) на столе. Затем на поверхность питательной среды пинцетом помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37⁰С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста культуры судят об ее чувствительности к соответствующим антибиотикам. При зоне задержки роста диаметром 0-10 мм культура расценивается как нечувствительная (устойчивая), диаметром 11–15 расценивается как малочувствительная, 16-25 мм – чувствительная, больше 25 мм – высокочувствительная.

21. Определение МПК (минимальной подавляющей концентрации) антибиотика методом серийных разведений в бульоне (по демонстрационному ряду).

Из основного раствора, содержащего определенную концентрацию антибиотиков, готовят ряд убывающих разведений антибиотиков в пробирках с бульоном и добавляют испытуемую культуру (обычно 10⁵-10⁶ бактериальных клеток). Контролем служит пробирка с бульоном и культурой без антибиотиков. Срок инкубации зависит от вида микроорганизмов (чаще сутки). Определяют МПК, которая соответствует концентрации препарата в последней пробирке с видимой задержкой роста (прозрачная питательная среда).

22. Среда Эндо.

Среда Эндо – МПА, 1% лактоза, индикатор (основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Колонии микроорганизмов, разлагающих лактозу, приобретают цвет индикатора (красные).

23. Среда Плоскирева.

Используется для выращивания шигелл. Состав: МПА, лактоза, соли желчных кислот и бриллиантовая зелень (для угнетения роста кишечной палочки), индикатор нейтральный красный. Шигеллы не разлагают лактозу, дают рост бесцветных, лактозоотрицательных колоний.

24. Среда Гисса.

Среды Гисса используют для изучения биохимических свойств выделенной культуры. Они представлены рядом пробирок с пептонной водой, 1% раствором углевода (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза, спирт маннит), индикатором Андреде (кислый фуксин, обесцвеченный 1М NаOH), поплавком для улавливания газа. Если углевод разлагается до кислоты, щелочь нейтрализуется, фуксин восстанавливается, среда краснеет, если до газа, то в поплавке появляется пузырек газа.

25. Среда Китта–Тароцци.

Используется для выращивания строгих анаэробов, состоит из МПБ, кусочков печени или мясного фарша для адсорбции кислорода из среды, глюкозы (источник энергии), сверху залита вазелиновым маслом для защиты от кислорода.

26. Среда Ресселя.

Сложная дифференциально-диагностическая среда. Состоит из МПА, 1% лактозы, 0,1% глюкозы и индикатора. Среда имеет форму полускошенного агара.

Применяется для выделения чистой культуры бактерий и дифференциации их по биохимическим свойствам.

27. Среда Кесслера.

Состав среды Кесслера: 1% пептонная вода, 5% желчи, 0,25% лактозы, генциановый фиолетовый для подавления роста грамположительных бактерий. Используется для обнаружения свежего фекального загрязнения в смыве с рук.

7