7. Произвести посев на косой агар с целью выделения чистой культуры микроорганизмов.

Берут чашку Петри с МПА с ростом колоний. Отмечают на дне чашки изолированную колонию. Стерилизуют бактериальную петлю в пламени спиртовки. Левой рукой открывают чашку Петри, на бортике чашки охлаждают бактериальную петлю. Петлей снимают часть отмеченной колонии, чашку Петри закрывают.

Берут в левую руку пробирку со скошенным агаром и мизинцем правой руки плотно захватывают наружный конец ватной пробки, прижав ее к ладонной поверхности руки, и вынимают пробку из пробирки. Обжигают край пробирки в пламени горелки. Опускают петлю с взятой колонией бактерий до конденсационной воды у дна пробирки и проводят зигзагообразную линию, скользя петлей по поверхности агара от одного края пробирки к другому, поднимая штрихи от конденсационной воды до верхней части косого агара. Вынимают петлю из пробирки. Быстро обжигают край пробирки и внутреннюю часть пробки. Пробирку закрывают пробкой. Прокаливают петлю в пламени и ставят ее в штатив. Засеянную пробирку подписывают, ставят в штатив, который помещают в термостат.

8. Сделать посев исследуемого материала на чашку с МПА сплошным газоном.

Один мл исследуемого материала набирают стерильной пипеткой и выливают в чашку Петри (слегка открыв ее). Легким покачиванием чашки распределяют материал по всей поверхности агара.

9. Сделать посев для определения биохимических свойств выделенной культуры.

Чистую культуру с косого агара засевают петлей в среды «пестрого» ряда (пептонная вода, 1% раствор глюкозы, лактозы, сахарозы, маннита, мальтозы, индикатор Андреде и поплавок для улавливания газа) и МПБ. Для этого стерилизуют бактериологическую петлю (до покраснения) в пламени спиртовки. В левой руке держат 2 пробирки (первая - косой агар с чистой культурой, вторая - с одной из питательных сред). Вынимают пробки из пробирок мизинцем и ладонной поверхностью кисти над пламенем горелки. Петлю опускают в пробирку с культурой, после ее остывания берут исследуемую культуру методом соскоба, извлекают из пробирки, вносят поочередно в среды «пестрого» ряда и МПБ. В среду с МПБ после посева культуры помещают индикаторные бумажки, смоченные щавелевой кислотой для выявления индола и раствором уксуснокислого свинца для выявления сероводорода, и закрепляют их у пробки.

10. Выполнить 1 этап бактериологического исследования испражнений больного при подозрении на дизентерию.

Произвести посев испражнений петлей в чашку Петри с питательной средой Плоскирева (технику посева и состав среды см. в вопросах №№6 и 24).

11. Определить вид микроба по антигенным свойствам в реакции агглютинации с адсорбированной агглютинирующей сывороткой.

Предметное стекло делят восковым карандашом пополам. На одну половину наносят каплю изотонического раствора хлорида натрия (контроль), а на другую – каплю сыворотки. Затем петлей в каждую каплю вносят небольшое количество бактериальной культуры и перемешивают круговыми движениями в каждой капле до получения равномерной взвеси. Реакция протекает быстро. Наблюдают за появлением зерен агглютинации в пробах. Учет производят через 3-5 мин.

12. Поставить и оценить ориентировочную реакцию агглютинации для определения вида микроба.

Берут предметное стекло, делят стеклографом на две части: опытную (о) и контрольную (к). На опытную часть пастеровской пипеткой наносят каплю агглютинирующей сыворотки в разведении 1:5, на контрольную – каплю физиологического раствора. Затем в каждой капле тщательно размешивают небольшое количество культуры бактерий до получения гомогенной взвеси. Бактерии вносят прокаленной и остуженной бактериальной петлей. Петля стерилизуется после каждой капли. Результат наблюдают через 1-2 мин. Контрольная капля остается равномерно мутной. В опытной капле в положительном случае наблюдается склеивание бактерий в виде мелких зернышек.

После учета реакции предметное стекло опускают в стакан с дезинфицирующим раствором.