Промита біомаса з 20 мл

культури клітин

Суспензія клітин

Суспензія сферотопластів

Лізат клітин

Забуферений лізат клітин

Суміш

Водна фаза

Осад ДНК

Осад ДНК

Розчин ДНК

Розчин ДНК з РНКазою

Осад очищеної ДНК

77

Ресуспендувати в 1 мл БР І

Додати 1 мл БР І з 2 мг/мл лізоциму,

інкубація 30–60 хв при 37 ºС і перемішуванні

0,5 мл 5% ДСН й витримують при 37 °С,

перемішувати скляною паличкою 10 хв.

Додати 2,5 мл БР ІІ

Додати 5 мл ХОС (9:1) або ХІС (24:1),

суміш інтенсивно струшують 30 хв.

Центрифугування при 10000 об/хв. 15 хв.,

відібрати верхній водний шар

Додати два об’єми охолодженого до 0 °С 96 %

етанолу, осад ДНК намотують на тонку скляну паличку

Промити у 70 % етанолі двічі

Віджати від спирту,

додати 1,8 мл хлороформ-ССР (1:10), витримати 4 °С, 12 год

Додати 0,1 мл 10× ССР, 1 мл 0,4 мг/мл розчину РНКази

Повторна депротеїнізація

та центрифугування, осадження 96 % і промивання 70 % етанолом

Рис.8.1. Виділення ДНК з Bacillus subtilis 23