Метод Эдмана лежит в основе автоматического прибора - секвенатора (sequence от английского - последовательность), аминокислотный анализатор. Полученное на каждой стадии производное идентифицируется либо ГЖХ либо ТСХ или жидкостной хроматографией

16.3 Стратегия пептидного синтеза

Схематично рассмотрим синтез дипептида ГЛИ –ЛЕЙ

Для осуществления синтеза пептида с заданной последовательностью α- аминокислот необходимо выполнить ряд последовательных операций

Первый этап синтеза - защита амино группы

одной аминокислоты. С помощью реакций ацилирования в аминогруппу вводят электроноакцепторный заместитель. По окончанию

синтеза эту защиту снимают

H3C

H3C C - O - COCl + HOOC - CH2 - NH2

H3C

трет-бутокси- Глицин карбонилхлорид

HOOC - CH2 - NH - CO - O - C(CH3)3

БОК - NH - CH2 - COOH

Второй этап синтеза– активация

карбокси– N –защищенного глицина

		PCl5	O
	БОК - NH - CH - COOH		БОК - NH - CH2 - C
	2
			Cl

Третий этап синтеза - защита

карбоксильной группы второй аминокислоты -можно осуществить с помощью реакции этерификации

					H+					O
H3C-	CH-CH2-CH-COOH			C2H5OH			H3C-	CH-CH2-CH-C
			+
					-H2O					OC H	5
CH3		NH2					CH3		2
									NH2

Лейцин

Четвертый этап синтеза–

образование пептидной (амидной) связи:

		O		H2N-CH-COOC2H5
	БОК - NH - CH2 - C	Cl	+
				CH2-CH(CH3)2

БОК- NH-CH2-CO-NH-CH-COOC2H5

CH2-CH(CH3)2

Защищенный дипептид ГЛИ-ЛЕЙ

Пятый этап синтеза- завершающий –

снятие защиты

(CH3)3C-O-CO-NH-CH2-CO-NH-CH-COOC2H5

			CH2-CH(CH3)2
	HBr, CH3COOH			H2O, OH-
(CH3)2C=CH2 + CO2			C2H5OH
Изобутилен	H2N-CH2-CO-NH-CH-COOH
	ГЛИ-ЛЕЙ	CH2-CH(CH3)2

Пептиды и белки - полиэлектролиты

ГЛИ - АЛА H2N–CH2–CО–NH–CH–COOH ↔ H 3N+–CH2–CО–NH–CH–COO‾

│	│
CH3	СН3
ИЭТ находится в области рН≈7

ГЛИ - ГЛУ

H2N–CH2–CО–NH–CH–COOH ↔ H 3N+–CH2–CО–NH–CH–COO‾

│	│
(CH2)2 -СООН	НООС–(СН2)2
ИЭТ находится в области рН<7

ГЛИ - ЛИЗ

H2N–CH2–CО–NH–CH–COOH ↔ H 3N+–CH2–CО–NH–CH–COO‾

│	│
(CH2)4 –NН2	NН2 –(СН2)4

ИЭТ находится в области рН>7