Экспресс - методы диагностики:

Лецитиназная проба: для быстрого обнаружения и серологической идентификации α – токсина клостридий в раневом отделяемом определяют его лецитиназную активность в реакции нейтрализации (РН) с моновалентными антисыворотками против токсинов клостридий разных видов. С этой целью исследуемый материал помещают в пробирки с раствором лецитина и добавляют антисыворотки. присутствие лецитиназы в раневом отделяемом выявляется помутнением в пробирке. При нейтрализации лецитиназной активности соответствующей антисывороткой жидкость остается прозрачной.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Обнаружение в исследуемом материале ДНК возбудителя с помощью ПЦР. Обнаружение в материале от больного специфических метаболитов клостридий, включая летучие жирные кислоты, спирты с помощью ГЖХ (газожидкостной хроматографии).

Обнаружение ботулотоксина в исследуемом материале: постановка реакции Бойдена – РНГА с эритроцитами, нагруженными моновалентными антитоксическими противоботулиническими сыворотками типов А, В, Е; ИФА.

Обнаружение столбнячного токсина в исследуемом материале: ИФА. Метод позволяет получить ответ в течение нескольких часов и обеспечивает своевременную диагностику заболевания.

Приложение № 4

Материал для исследования при дифтерии

Исследуют слизь или отделяемое из пораженных органов (нос, глотка, глаз). Материал собирают тампоном. Его делают из плотной, негнущейся проволоки длиной 15 см, которую прокалывают через пробку. На одном конце (его в последующем опускают в сухую, чистую пробирку), накручивают вату; на другом, наружном, проволоку загибают в колечко для удобства держания и предупреждения травм рук персонала.

Тампоны, погруженные в пробирки, завертывают в бумагу (по 10 штук) и стерилизуют сухим жаром. Запас тампонов должен быть в лаборатории, в детских учреждениях постоянно.

Чаще всего материал берут из зева и носа. Больной должен широко открыть рот, его язык фиксируют шпателем и стерильным тампоном снимают налет или слизь на границе пораженного участка. По возможности – посев проводить тотчас. Для пересылки в лабораторию следует оберегать тампон от высыхания (пред тем, как брать материал, тампон нужно смочить в стерильном 5 % растворе глицерина или в физиологическом растворе).

Приложение 5

Микробиологическое исследование при дифтерии

Бактериоскопический метод Мазок, окраска по методу Грамма, Нейссера, Леффлера, РФ (люминесцентная микроскопия)

Бактериологический метод Посевы на: - кровяной агар, - свернутую сыворотку, -среду Клауберга (накопление изолированных колоний) - среду Бучина Изучение изолированных колоний: -характер колонии, наличие гемолиза, -мазки из колоний (окраска по Граму, Нейссеру), - посев на пестрый ряд, -определение протеолитической активности, - проба Пизу на цистиназу, - проба Закса на уреазу, - определение токсигенности (РП в агаре, ИФА, ПЦР – обнаружение tox гена) - реакция агглютинации с типовыми АТ на стекле. Учет результатов. Идентификация вида. Диагноз.

Приложение 6