Дифференцирующие пробы

1. Проба Пизу для определения цистиназы

В столбик МПА с цистином уколом засевают изучаемую культуру. Пробирку ставят в термостат при + 370 С. Через 20 – 24 часа по ходу укола среда чернеет и на глубине 1 – 1,5 см от поверхности в среде появляется коричневое облачко (дифтерийные бактерии, расщепляя с помощью цистиназы цистеин, восстанавливают ацетат свинца, добавленный в среду, в сульфит свинца черного цвета).

Дифтероиды никогда не образуют «облачка», хотя могут обусловить (+) слабое почернение среды по ходу укола.

2. Проба Закса для выявления фермента уреазы.

• Готовят спиртовой раствор мочевины и индикатор феноловый красный.

Их смешивают перед употреблением и вносят в среду в соотношении 1 : 9;

• 1 петлю чистой культуры вносят в среду и тщательно растирают по стенке пробирки;

• После 20 – 30 минут инкубации при + 37⁰С наблюдают за изменением цвета среды.

Дифтерийные бактериине изменяют цвета среды, не расщепляют мочевину, т.к. фермента уреазы не имеют.

Дифтероидыс помощью уреазы расщепляют мочевину с образованием аммиака, который щелочит среду и изменяет цвет среды (красный – за счет индикатора – фенолового красного.

Приложение 7

Биохимические свойства дифтерийной палочки и сходных с ней коринебактерий

Виды и биоварианты	Зерна волю тина	Гемо лиз	Ферментация углеводов					Проба на:
			Саха роза	Глюко за	Маль тоза	Ман нит	Крах мал	Цисти назу (Пизу)	Уреазу (Закса)
I. C.diphtheriae Биовар V.gravis	+	-	-	К+	К+	-	+	+	-
Биовар V.mitis	+	+	-	К+	К+	-	-	+	-
II. C.Hoffmani	-/+	-	К+	К+	К+	-	-	+/-	+
III. C.xerosis	-/+	-	-	-	-	-	-	-	+

Приложение 8

Схема лабораторной диагностики коклюша

(материал – слизь из верхних дыхательных путей)

Бактериоскопический метод Окраска по Граму (грамотрицательные коккобактерии). РИФ.

Бактериологический метод 1.Кровяной МПА (метод кашлевых посевов пластинок). 2.Казеиново-угольный агар (КУА). 3.Молочно-кровяной агар (МКА). 4.Среда Борде-Жангу.

Серологический метод (ретроспективно) РА РСК (Борде-Жангу) РП. ИФА. РИФ, РНИФ.

Молекулярно-биологический метод ПЦР В случае обнаружения ДНК возбудителя можно поставить предварительный диагноз