Приложение № 2 Методы диагностики риккетсиозов

Применяют биологические, серологические и аллергологические методы. Материал для исследований – кровь, взятая из вены больного в ранние сроки лихорадки. Можно использовать цельную, дефибринированную кровь или (лучше) сгустки. Материалом заражают культуру клеток или куриные эмбрионы.

Важное место в диагностике риккетсиозов занимают биологические методы. Наиболее распространена проба Музера-Нейла- внутрибрюшинное заражение морских свинок. У животных наблюдают лихорадку, геморрагический некроз различных тканей, у самцов отек мошонки. В результате животные гибнут. В некоторых случаях внутрибрюшинно заражают мышей (возбудитель обнаруживают в клетках перитонеального экссудата). Наиболее чувствительны серологические методы: наиболее часто применяют реакцию Вейля-Феликса, РСК, РПГА, РИФ и РНИФ.

Приложение 3 Серологическая диагностика риккетсиозов: общие принципы и особенности

1. Реакция агглютинации:

Реакция агглютинации положительна в 70-80 % уже на 3-5 дни заболевания, а к 20 дню в 100 % она позволяет осуществить дифференциацию эпидемического и эндемического сыпных тифов с помощью разных диагностикумов.

Реакция Вейля при сыпном тифе

№ п/п	Инградиенты	Разведение сыворотки						Контроли
		1/25	1/50	1/100	1/200	1/400	сыворотки			антигена
1.	Физиологический раствор	-	0,25	0,25	0,25	0,25	-			0,25
2.	Сыворотка больного (1:25)	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	дез р-р		0,25 (1:5)	-
3.	Антиген из риккетсий Провачека (50 млн.м.т./мл)	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	-			0,25

Пробирки встряхнуть, поместить в термостат на 24 часа и 2 часа при комнатной температуре.

Диагностическим титром РАР считают положительный результат в разведениях 1:100 – 1:160.

Максимальные титры антител при первичном сыпном тифе доходят до 1:1280 – 1:3200, при повторном (болезнь Бриля) – до 1:640 (чаще 1:160 – 1:640).

Агглютинины у реконвалесцентов в 88,5 % сохраняются 1 – 3 месяца. После чего они сохраняются в титрах 1:50 – 1:400 – у небольшого числа переболевших, а через год полностью исчезают из кровотока.

Диагностический титр у детей – 1:100, у взрослых – 1:200.

Анамнестическая реакция редко бывает положительной в титре 1:20.

Прочитайте результаты готовой реакции и оцените её по титру.

Сыворотка, взятая на 6 день болезни:

Диагностикум	Разведения сыворотки								Контроли
	1/25	1/50	1/100	1/200	1/400	1/800	1/1600	Диагностикума		Сыворотки
R.prowazekii	+++	+++	++	+	-	-	-	-		-
R.typhi	+++	-	-	-	-	-	-	-		-

Сывортка, взятая на 15 день болезни:

Диагностикум	Разведения сыворотки								Контроли
	1/25	1/50	1/100	1/200	1/400	1/800	1/600	Диагностикума		Сыворотки
R.prowazekii	+++	+++	+++	+++	+++	++	-	-		-
R.typhi	-	-	-	-	-	-	-	-		-

2. Cеродиагностика сыпного тифа в РНГА:

РНГА при сыпном тифе не может быть использована для дифференциации с другими риккетсиозами, но при этой болезни она более чувствительна.

Постановка РНГА и её ингредиенты.

День взятия сыворотки	Разведение сыворотки								Контроль диагностикума
	1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	1/640
5	++++	++++	+++	+++	-	-	-	-
20	++++	++++	+++	+++	+++	+++	-	-

3. Серологическая диагностика сыпного тифа в РСК:

РСК становится положительной, начиная с конца второй недели заболевания, но позволяет выявлять антитела и через много лет после выздоровления.

Это делает ее особенно ценной для ретроспективной диагностики и расшифровки причин эпидемической вспышки.

День взятия сыворотки	Разведения сыворотки							Контроли
	1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	Гемосистемы		Комплемента	Сыворотки
5	++	++	+	-	-	-	-		-	-
20	++++	++++	++++	+++	+++	-	-		-	-

IV. Серодиагностика Ку-лихорадки в динамике РА:

Исследуемые сыворотки	Разведения сыворотки							Контроли
	1/8	1/16	1/32	1/64	1/128	1/256	Диагностикума		Сыворотки
На 3 день болезни	+++	++	-	-	-	-	-		-
На 12 день болезни	++++	+++	+++	+	-	-	-		-
На 20 день болезни	++++	++++	+++	++	++	-	-		-

2. Экспресс-диагностика Ку-лихорадки (выявление в РА): поНоблю

Схема постановки реакции Нобля

Разведения сыворотки							Контроли
1/2	1/4	1/8	1/16	1/32	1/64	Сыворотки		Диагностикума
+++	+++	+++	+++	++	-	-		-

3. Аллергодиагностика Ку-лихорадки (положительна с 5 дня заболевания)