Определение титра комплемента по 100% гемолизу гемосистемы

Приготовить гемосистему:

а) приготовить 3% взвесь эритроцитов барана в физиологическом растворе;

б) гемолитическую сыворотку развести до рабочего титра, указанного на этикетке;

в) приготовить гемолитическую систему, смешав равные объемы 3% взвесиэритроцитов барана и гемолитической сыворотки;

г) инкубировать при +37С° 30 минут;

д) определение титра комплемента осуществить по схеме:

Ингредиенты	Номера пробирок и их содержимого
	1	2	3	4	5		6	7	8	9	К
Сыворотка крови больного 1:10 в мл	0,1	0,15	0,2	0,25	0,3		0,35	0,4	0,45	0,5	-
Физиологическийраствор 0,85% в мл	0,4	0,35	0,3	0,25	0,2		0,15	0,1	0,05	-	0,5
Гемолитическаясистема в мл	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0		1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
Инкубировать при +37 С° 30-40 минут
Учет результатов	Отсутствие гемолиза					Гемолиз					Нет гемолиза

Титр комплемента - 0,3 мл (минимальное количество, дающее гемолиз гемосистемы).

Это количество можно представить в гемолитических единицах.

Пример: Расчет в гемолитических единицах

0,2 мл - 1 гем.ед.

1,0 мл – х

С учетом разведения сыворотки 1: 10 титр комплемента в гемолитических единицах будет равен: 5 х 10 = 50 гем. ед.

Определение титра комплемента микрометодом

/ Н. С. Мотавкина, Б. М. Ковалев, А. С. Шаронов, 1989/

Приготовить равные объемы гемолитической системы 2% и 2% расплавленной и остуженной до +45С° агарозы. Смесь залить в камеру, приготовлен­ную из двух фотопластин и прокладки между ними. После застывания геля и осторожного удаления верхней пластины сделать в нем с помощью гель-пробойника луноч­ки. В них внести испытуемые и контрольные сыворотки, содержащие комплемент крови, инкубировать во влажной камере 2 часа при 37º С. Активность комплемента определяют по формуле:

, где

Со – активность элемента в опытной сыворотке,

До - диаметр зоны лизиса вокруг опытной сыворотки,

Дк – диаметр зоны лизиса вокруг контрольной сыворотки,

Ск - активность комплемента в контрольной сыворотке

Приложение 4

а) ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕТА- ЛИЗИНОВ МИКРОМЕТОДОМ

/по Н.С. Мотавкиной, Б.М. Ковалеву, А.С. Шаронову,1989/

Камера заполняется по вышеприведенному описанию смесью расплавленного и остуженного до +45С° 2% раствора агарозы и тест - культурыBac.subtilis (сенная палочка) в концентрации 10 тыс. м.т./мл. После застывания в геле делают микролунки, куда вносят исследуемый субстрат и соответствующие контроли. Пластины инкубируют при +37 С° 18-24 часа. Расчет активности бета-лизинов проводят по формуле, описанной для комплемента.

б) ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕТА-ЛИЗИНОВ КЛАССИЧЕСКИМ МЕТОДОМ СЕРИЙНЫХ