Культивирование спирохет
1. Культивирование спирохет на питательных средах
-
среда Нагучи (2% агар, 1 часть асцита, кусочки почек кролика, среда покрывается слоем вазелинового масла);
-
среда Аристовского (кроличья сыворотка, кусочек мозговой ткани под слоем вазелинового масла);
-
среда Уленгута (дистиллированная вода с сывороткой или антикоагулянтом);
-
среда Гельтцера (инактивированная сыворотка кролика, физ. раствор, кусочки куриного белка, 2-3 капли цитратной крови кролика или человека).
Трепонемы с большим трудом культивируются на сложных питательных средах. При длительном выращивании на искусственных питательных средах они теряют вирулентность. Такие штаммы трепонем называются культуральными.
2. Культивирование в развивающемся 7-8 дневном курином эмбрионе.
3. Интратестикулярное заражение кролика-самца и культивирование трепонем в яичках.
Питательные среды для культивирования лептоспир
-
водно-сывороточная среда Уленгута (водопроводную воду стерилизуют, добавляют свежую инактивированную при +56 С° 30 мин. кроличью сыворотку);
-
среда Форварта-Вольфа (дистиллированная вода, хлористый натрий, пептон, фосфорная (буферная смесь). Перед посевом в пробирки со средой добавить инактивированную кроличью сыворотку;
-
полужидкая агаровая среда (вода, агар-агар, кипятить 30 мин., разлить в пробирки, стерилизовать кипячением 30 мин., добавить стерильную сыворотку кролика, подогреть при 56С° 30 мин. для инактивации;
-
среда Терских - для исследования воды на наличие лептоспир (к исследуемой воде добавить фосфатно-буферную смесь, желток свежего куриного яйца, расплавленный слабощелочной мясо-пептонный агар).
Приложение 3
Культивирование грибов
Питательные среды для культивирования грибов:
1. Неселективные среды:
-
пивное сусло (неопохмеленное сусло стерилизуют при 110С° 30 минут, затем используют его для приготовления:
а) сусло жидкое (разводят водой),
б) среда Сабуро жидкая (вода, глюкоза, пептон),
в) сусло-агар (добавляют 2-3% агар-агара);
-
среда Сабуро плотная (агар, пептон, глюкоза, мальтоза, вода),
-
рисовая среда Левиной (варят цельный рис, разбавляют водой, фильтруют, добавляют агар-агар),
-
среда Левина (МПА, лактоза, эозин, метиленовая синь),
-
среда Эндо (МПА, лактоза, кислый фуксин, обесвеченный щелочью),
- картофельно-глюкозный агар (отваренный в течение 1 часа картофель растирают, разбавляют водой, процеживают, добавляют глюкозу и агар),
-
МПА с 2% глюкозой,
-
желатиновая среда (в бульон на отваре сердечной мышцы быка добавляют желатин),
-
5-10% КА (агар, дополненный экстрактом сердца и мозга),
-
асцитический агар (агар, асцитическая жидкость).
2. Селективные среды, дополненные одним или комплексом антибиотиков: пенициллином (20 ЕД/мл), стрептомицином (40 ЕД/мл) или гентамицином (0,5 мкг/мл), левомицитином (16 мг/мл).
Приложение 4
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОПЛАЗМ
1. 2% сердечно-мозговой агар.
2. Мясо-пептонный бульон с 30% сывороткой крови или асцитической жидкости.
В среды добавляют нативную сыворотку, углеводы, витамины, соли, а для угнетения роста сопутствующих бактерий - пенициллин и ацетат калия.
Для культивирования уреаплазм используют среды, содержащие гидролизат бычьего сердца, гидролизат казеина, пекарские дрожжи и красители: кристаллический и бромтимоловый синий. Среды дополняют 10% лошадиной сывороткой, 0,05% мочевины, 2% а-цистеина и антибиотиков (пенициллин).
Рост в виде яичницы-глазуньи.
Приложение 5