Биотехнологии 2015 Сборник материалов международного конгресса

SECTION | | “IMMUNOBIOTECHNOLOGY”

позволило осуществить подбор пар МоАТ (одно из них –сорбированное в лунки планшетов, другое – в виде пероксидазногоконъюгата) для «сэндвич»-варианта ИФА при выявлении ТТГ.

UDC 602.68:57.083+557.175.324

MONOCLONALANTIBODIES FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF HUMAN THYROID STIMULATING HORMONE

Poryvaeva V.A.,Agafonova O.A., MarchenkoA.K., Soboleva N.V., Sorokina N.N., Vtorushina I.A., Rukavishnikov M.Yu.

JSC «Vector-Best», Koltsovo, Novosibirsk Region, Russia POB 121, Koltsovo, Novosibirsk region, 630559

E. mail: [e-mail]

Apanel of murinemonoclonal antibodies (MAbs) to humanthyroid stimulating hormone(TSH) was developed and characterized. Groups of MAbs to the β-subunit of TSH and to the α-subunit common to all peptide hormones were distinguished. The possibility of creating the sandwich ELISA variant for TSH detection using MAbs from our panel was demonstrated.

Keywords: monoclonal antibodies, thyroid stimulating hormone, diagnostics.

The goal of the work was to develop diagnostic monoclonal antibodies (MAbs) to human thyroid stimulating hormone (TSH). Purified natural TSH (LeeBio) was used for immunization of BALB/c mice and positive hybridoma screening. To determine the specificity of our collection of hybridoma antibodies, it was tested for reactivity with 3 other peptide hormones: luteinizing hormone (LH), follicle stimulating hormone (FSH) and human chorionic gonadotropin (hCG) followed by dividing into 2 groups.Abs of the first group reacted only with TSH but did not react with LH, FSH and hCG, which suggested their specificity for the β-subunit of TSH.Abs that reacted with all peptide hormones and, therefore, bound to the α-subunit common to all the four peptide hormones were classified under the second group. The specificity of antibodies for the β-subunit of TSH with high affinity index was the selection criteria for further research. The corresponding hybridomas were cloned by the limiting dilution method, and monoclonal antibodies were investigated as components of the sandwich ELISA variant for TSH determination. Using the competitive ELISA, we revealed the presence of 4 non-overlapping antigenic determinants on the β-subunit of TSH and 2 ones on the α-subunit. We designated them as AgD-α (1-2) and AgD-β-TSH (1-4). We found that the AgD-α-1 and the AgD-β- TSH-1 were located on the TSH molecule in close proximity to each other. This was due to the fact that MAbs reacting with the AgD-α-1 and MAbsspecific for the AgD-β-TSH-1 competed with each other for binding to TSH. Theproximity of the AgD-α-2 and the AgD-β-TSH-2 on the TSH molecule

was determined according to the samecriteria. The availability of MAbs to different on-overlapping AgDon the TSH molecule allowed us to select pairs of MAbs(one of them sorbed in the plate wells,

and the other as aperoxidase conjugate) for the sandwich ELISA variant while detecting TSH.

Congress “BIOTECHNOLOGY: STATE OF THE ART AND PROSPECTS OF DEVELOPMENT” March 17-20, 2015	159

СЕКЦИЯ | | «ИММУННАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ»

УДК 543.9

МОДИФИЦИРУЮЩИЕ ПОКРЫТИЯ ПЬЕЗОЭЛЕКТРИЧЕСКИХ ИММУНОСЕНСОРОВ НА ОСНОВЕ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ АНТИТЕЛ Русанова Т.Ю.

Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского, Саратов, Россия 410012, Саратов, ул. Астраханская, д. 83, корп. 1

e-mail: [e-mail]

Получены модифицирующие покрытия пьезоэлектрических сенсоров на основе иммобилизованных антител. Для иммобилизации антител использовали их ковалентное связывание со слоями полиэлектролитов, нанесенных на поверхность сенсоров методом полиионного наслаивания. Полученные сенсоры использованы для определения микотоксинов.

Ключевые слова: пьезоэлектрические сенсоры, иммуноанализ, иммобилизация антител, микотоксины

В настоящее время актуальным является создание малогабаритных и недорогих аналитических устройств сенсорного типа для экспрессного определения химических соединений. Таким требованиям отвечают сенсоры на основе пьезокварцевых резонаторов (ПКР), модифицированных селективным чувствительным слоем, например, на основе антител. Аналитические характеристики полученного сенсора определяются как природой наносимого модификатора, так и методом получения чувствительного слоя, поэтому целью данной работы явилось сравнительное изучение методов иммобилизации антител на поверхность ПКР.

Для иммобилизации антител использовали их ковалентное связывание со слоями полиэлектролитов (ПЭ), нанесенных на поверхность сенсоров методом полиионного наслаивания. Конъюгирование антител с ПЭ изучали методом пьезокварцевого микровзвешивания (регистрируя изменение частоты ПКР при нанесении слоев ПЭ и антител, которое согласно уравнение Зауэрбрея пропорционально массе нанесенного вещества, установка Q-Sense E4). Апробировали следующие системы:

1)три бислоя хитозан/гиалуроновая кислота с последующим связыванием антител по карбоксигруппам гиалуроновой кислоты карбодиимидным методом;

2)три бислоя полистиролсульфонат/хитозан с последующим связыванием антител по аминогруппам хитозана с использованием глутарового альдегида;

3)три бислоя полиэтиленимин (PEI)/гиалуроновая кислота (также с последующим связыванием антител карбодиимидным методом).

Массы нанесенных слоев ПЭ и конъюгированных далее антител (использовали специфические антитела на охратоксин А, 0.01 мг/мл) представлены в таблице.

Таблица. Массы нанесенных слоев полиэлектролитов (ПЭ) и антител (Ab)

Система	Масса 3-х бислоев ПЭ, мкг	Масса Ab, мкг
Хитозан/гиалуроновая кислота	4.6 ± 2.2
Полистиролсульфонат/хитозан	30  ± 9	0.9 ± 0.6
PEI/гиалуроновая кислота	6.0 ± 0.5	4.5 ± 1.2

Как видно из данных таблицы наибольшая воспроизводимость нанесения бислоев ПЭ и

масса конъюгированных антител наблюдается для системы PEI/гиалуроновая кислота. Данное покрытие было использовано для получения иммуносенсора для определения охратоксина

160	Конгресс «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ» 17-20 марта 2015

SECTION | | “IMMUNOBIOTECHNOLOGY”

А в водных средах. Преимуществом чувствительных слоев сенсоров на основе полиэлектролитов является возможность их удаления с поверхности сенсора, что обеспечивает его регенерацию и возможность многократного использования.

Работа поддержана Российским научным фондом (проект 14-13-00229).

УДК 543.9

MODIFYING COATINGS FOR PIEZOELECTRIC IMMUNOSENSORS BASED ON IMMOBILIZEDANTIBODIES

Rusanova T.Yu.

Saratov State University, Saratov, Russia 410012, Saratov, 83 Astrakhaskaya str., Bld. 1 E-mail: [e-mail]

Modifying coatings for piezoelectric sensors base nom immobilized antibodies were obtained. Antibodies immobilization was carried out by covalent bindings with polyelectrolyte layers deposited on sensor surface by polyionic self-assembly. Prepared sensors were used for mycotoxin detection.

Кeywords: piezoelectric sensors, immunoassay, antibody immobilization, mycotoxins.

The obtaining of small and inexpensive sensor devices for the rapid determination of chemical compounds is important task at the moment. Sensors based on quartz crystal microbalance (QCM) modified by the sensitive layer, e.g., antibodies, match these requirements. Analytical parameters of the sensor are defined as a modifier nature and method of preparation the sensitive layer. Therefore the aim of this work was a comparative study of antibodies immobilization methods on the surface of QCM.

For antibodies immobilization their covalent bindings with polyelectrolyte (PE) layers deposited on sensor surface by polyionic self-assembly was used. Antibody conjugation with PE was studied by QCM-method (frequency change of piezo quartz crystal, proportional of mass of deposited substances according Sauerbrey equation, was recorded by Q-Sense E4 equipment). The next systems were investigated:

1)three bilayers of chitosan/hyaluronic acid followed by antibody binding with carbodiimide method;

2)three bilayers of polystyrene sulfonate (PSS)/chitosan followed by antibody binding with glutaraldehyde method;

3)three bilayers of poly(ethylene imine) (PEI)/hyaluronic acid followed by antibody binding with carbodiimide method.

Masse of deposited PE layers and conjugated antibodies (Ab, anti-Ochratoxin A antibodies were

used, 0.01 mg/ml) are presented in the Table.

Table. Masses of deposited polyelectrolyte (PE) and conjugated antibodies (Ab)

System	Mass of 3 PE bilayers, μg	Mass of Ab, μg
Chitosan / Hyaluronic acid	4.6 ± 2.2
PEI / Chitosan	30  ± 9	0.9 ± 0.6
PEI / Hyaluronic acid	6.0 ± 0.5	4.5 ± 1.2

From the data in the Table we can see that highest reproducibility of PE layer deposition and an- tibody quantity are observed for PEI/Hyaluronic acid system. This coating was used for preparation

Congress “BIOTECHNOLOGY: STATE OF THE ART AND PROSPECTS OF DEVELOPMENT” March 17-20, 2015	161

СЕКЦИЯ | | «ИММУННАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ»

of immunosensor for Ochratoxin A detection in aqueous media. The advantages of sensitive layers based on polyelectrolytes are possibility for their remove for sensor surface allowing its regeneration and reusability.

The work was supported by Russian Scientific foundation (project 14-13-00229)

УДК 577.2

ПРОТЕОЛИТИЧЕСКАЯ ЭЛЮЦИЯ, КАК ЭФФЕКТИВНЫЙ МЕТОД ПОДАВЛЕНИЯ КО-СЕЛЕКЦИИ АПТАМЕРОВ Сафарян С.М.1,2, Козырь А.В.1, Колесников А.В.1, Шемякин И.Г.1

1ФБУН Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии, Оболенск, Московская область 2Пущинский государственный естественно-научный институт РАН, Пущино, РФ

e-mail: [e-mail]

Разработан эффективный метод отбора аптамеров, связывающих рекомбинантные белки, позволяющий сократить время отбора и повысить специфичность связывания. Получены высокоаффинные ДНК-аптамеры к легкой цепи нейротоксина C.botulinum и летальному фактору B. anthracis.

Ключевые слова: ДНК-аптамеры, SELEX, токсины

Однойизосновныхпроблем селекции мишень-специфических аптамеров (SELEX, systematic evolution of ligands by exponential enrichment), является обеспечение высокой специфичности селекции и отсев молекул, связывающихся с иными, чем мишень, компонентами селекционной системы (в частности, с твёрдой фазой). Для обеспечения специфичности селекции, нами была разработана технология протеолитической элюции аптамеров, прочно связанных с мишенью. Для этого белковая мишень была введена в состав химерной рекомбинантной конструкции, в которой она отделена от полипептида, ответственного за аффинную иммобилизацию химеры на твердом носителе (например, пептид His6, пептид, биотинилируемый invivo, и т. п.) последовательностью, кодирующей специфический сайт протеолиза. Очищенный химерный белок иммобилизовали на аффинной твердой фазе, инкубировали с библиотекой ДНК-аптамеров, отмывали несвязывающиеся и низкоаффинные молекулы ДНК и проводили протеолитическую элюцию мишени вместе со связанными аптамерами, с использованием сайт-специфической протеазы (SUMO, летальный фактор сибирской язвы). Разработанная методика позволяет эффективно выделять мишень-специфические аптамеры всего за 2–5 раундов селекции избегая ко-селекции аптамеров, специфичных к поверхности твердой фазы. Описанная методология

была использована для селекции высокоаффинных ДНК-аптамеров, специфичных к легкой

цепи нейротоксина C. botulinumи летальному факторуB. anthracis.

Работа поддержана исследовательским грантом 14-15-00630 Российского Научного Фонда.

162	Конгресс «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ» 17-20 марта 2015

SECTION | | “IMMUNOBIOTECHNOLOGY”

UDC 577.2

PROTEOLYTIC ELUTION,ASAN EFFECTIVE METHOD OF SUPPRESSING CO-SELECTION OFAPTAMERS

Sofia M.Safaryan1,2,Arina V.Kozyr1,Alexander V.Kolesnikov1, Igor G.Shemyakin1 1.State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russia

2.Pushchino State Natural Science Institute of the Russian Academy of Sciences, Pushchino, Russia E-mail: [e-mail]

We have developed highly efficient technique for selection of aptamers binding recombinant proteins.This technique allows to reduce time of selection and increase the binding specificity.We selected high affinity DNA aptamers to C. Botulinum neurotoxin light chain and B. anthracis lethal factor.

Keywords: DNA aptamers, SELEX, toxins

Key to successful implementation of aptamer selection is to separate target-specific and off-target aptamers (e.g. those bind to solid phase or other components of reaction mixture) as early as possible in the course of selection. One approachto ensure selectionspecificityis to physically separate targetspecific and off-target components by proteolytic cleavage of the immobilized target with bound aptamer molecules attached to the solid phase. This permits elution of target-bound aptamersto proceed under mildest possible conditions. Afusion protein contained target protein and affinity bait (such as e. g. His6 or in vivo biotinylated peptide) separated by recognition sequence for site-specific protease (SUMO, anthrax LF) was prepared by overexpression of the cognate synthetic gene in E. coli. Purified fusion protein was immobilized on the solid phase via affinity tag, incubated with DNA aptamer library, following by washing out unbound library species. Target-bound aptamers were then elutedproteolytically. Dissociation of target bound aptamers occurred during subsequent PCR amplification.

The developed method yields target-specific aptamers in just 2–5 rounds of selection while avoiding co-selection of any off-target library DNAs.

The described methodology was used for the selection of high affinity DNA aptamers specific for the light chain neurotoxin C.botulinum and lethal factor B.anthracis.

The work is supported by research grant 14-15-00630 from Russian Science Foundation.

Congress “BIOTECHNOLOGY: STATE OF THE ART AND PROSPECTS OF DEVELOPMENT” March 17-20, 2015	163

СЕКЦИЯ | | «ИММУННАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ»

ПУБЛИКАЦИИ

PUBLICATIONS

УДК 578.832

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИХ НАНОКОМПЛЕКСОВ НА АКТИВНОСТЬ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ ВИРУСА ГРИППА НА МОДЕЛИ МЫШЕЙ Алексюк П.Г., Зайцева И.А., Алексюк М.С., Молдаханов Е.С., Соколова Н.С.,

Богоявленский А.П., Березин В.Э.

РГП «Институт микробиологии и вирусологии» КН МОН РК, г. Алматы, Республика Казахстан.

050010, г. Алматы, ул. Богенбай батыра, 103 e-mail: [e-mail]

В результате эксперимента по иммунизации мышей субъединичной и инактивированной вакциной против вируса гриппа в сочетании с иммуностимулирующими нанокомплексами и без их использования, было установлено, что включение нанокомплексов в состав вакцинного препарата на 2 логарифма увеличивало активность синтеза IgGантител.

Ключевые слова: вакцина, нанокомплексы, вирус гриппа, антитела.

Изучение влияния состава вакцинных препаратов на их эффективность относится к числу наиболее актуальных проблем современной науки.

Вданной работе проводились исследования активности продукции IgG антител при иммунизации мышей инактивированной и субъединичной вакцинами против вируса гриппа, в смеси с нанокомплексами, созданными на основе липидов и сапонинов, выделенных из растения

Equisetumarvense

Вакцинные препараты вводили подкожно, доза антигенов по гемагглютинину составляла 10 мкг на мышь, доза иммуностимулирующих нанокомплексов по сапонинам – 15 мкг на мышь. Уровень IgG антител в сыворотках иммунизированных животных определяли методом ИФА через 3 недели после однократной иммунизации.

Врезультате проведённых исследований было установлено, что включение в состав различных типов вакцин против вируса гриппа иммуностимулирующих нанокомплексов, созданных на основе липидов и тритерпеновых сапонинов, выделенных из растения Equisetumarvense, позволяло увеличить активность синтеза вирусспецифических IgGантител на 2 логарифма по сравнению с иммунизацией теми же вакцинными препаратами, но без использования иммуностимулирующих нанокомплексов.

164	Конгресс «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ» 17-20 марта 2015

SECTION | | “IMMUNOBIOTECHNOLOGY”

STUDY OFTHE INFLUENCE OF NANOCOMPLEXES ON THE IMMUNOSTIMULATORY ACTIVITY OF HUMORALIMMUNITYAGAINST INFLUENZAVIRUSES ON MOUSE MODELS

Alexyuk P.G., Zaitseva I.A.,Alexyuk M.S., Moldahanov E.S., Sokolova N.S., BogoyavlenskyiA.P., Berezin V.E.

RSE “Institute of Microbiology and Virology” CS MES RK, Almaty, Republic of Kazakhstan. 050010, Almaty, st. Bogenbaibatyr 103

e-mail: [e-mail]

A result of the experiment on immunization of mice with inactivated subunit influenza virus vaccine combined with immunostimulatory nanocomplexes and without using them it has been found that the inclusion of nano-complexes to the vaccine preparation increased activity of synthesis of IgG antibodies at 2 logarithm.

Keywords: vaccine, nanocomplexes, influenza virus, antibodies.

Study of the influence of vaccines composition on their effectiveness is one of the most urgent problems of modern science.

In this work, we conducted research on the activity of production of IgG antibodies by immunization of mice with inactivated subunit influenza virus vaccine in combination with nanocomplex created on lipids and saponins extracted from Equisetum arvenseplant.

The vaccine was injected subcutaneously, the dose of antigensonhaemagglutin in was 10 micrograms, the dose of immunostimulatorys aponinsnano complexes was 15 micrograms per mouse. IgG antibody levels in the serum of immunized animals was determined by immune-enzyme analysis in 3 weeks after a single immunization.

As a result of studies, it was found that the inclusion of any type of immunostimulatorynano complexes created on the basis of triterpenesaponins and lipids, extracted from a plant Equisetum arvense in to influenza virus vaccines make possible to increase the activity of the synthesis of virus-specific IgG antibodies at 2 logarithm compared to the same immunization vaccine preparations, but without of immunostimulatory nanocomplexes.

УДК 615.214

СРАВНЕНИЕ ПРОТИВОВИРУСНОГО ДЕЙСТВИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ НУКЛЕИНОВОЙ ПРИРОДЫ Квитко К.В.1, Агеевец В.А.1, Шабанова М.Е.2, Баурина М.М.2, Якубович Л.М.2, Васильева Е.Ф.3

1СПбГУ, Санкт-Петербург, Университетская наб., д.7-9 2РХТУ им. Д.И. Менделеева, Москва, ул. Героев Панфиловцев, 20, корп. 1; е-mail: baurinamm@mail. ru

3Научный центр психического здоровья РАМН, Москва

Комплексный нуклеотидный препарат энкад [1] и аналог пуринового нуклеозида ацикловир испытаны на наличие противовирусной активности к группе крупных ДНК-содержащих ядер- но-цитоплазматических вирусов на системе «альгофаг-водоросль». Ключевые слова: альгофаг, водоросль, иммуномодулятор, энкад.

Congress “BIOTECHNOLOGY: STATE OF THE ART AND PROSPECTS OF DEVELOPMENT” March 17-20, 2015	165

СЕКЦИЯ | | «ИММУННАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ»

Приизучениикомплексногонуклеотидногопрепаратаэнкадбыловыявлено,чтоонобладает выраженными иммуномодулирующими свойствами. Так, применение энкада у больных с пигментным ретинитом, шизофренией приводило к нормализации клеточного иммунитета, в том числек повышениюколичестваифункциональнойактивностиобщейпопуляцииТ-лимфоцитов и их субпопуляций: Т-лимфоцитов-супрессоров и Т-хелперов, а также к усилению цитотоксической активности лимфоцитов натуральных киллеров, стимулирующих развитие противоопухолевого и противовирусного иммунитета [2–4]. Известна также десенсибилизирующая способность энкада, выявленная при ряде нейроинфекционных и сосудистых заболеваниях головного мозга (обусловленная, по-видимому, изменением свойств клеточных мембран). Полный спектр защитного действия ряда лекарственных средств, применяемых в настоящее время полностью не известен. Исследование прямого противовирусного действия лекарственных препаратов ацикловир и энкад проведено на модельной системе «альгофаг-водоросль», которая представляла собой клетки зоохлорелл Chlorella variabilis (штамм NС64А) и специфичные лизирующие вирусы РВСV-типа, относящиеся к той же группе, что и вирусы герпеса. Эффекты, оказываемые на клетки хозяина вирусом и препаратом в различных сочетаниях, регистрировались по изменению замедленной флюоресценции (ЗФ), являющейся интегральным показателем метаболического состояния клеток. Противовирусный антигерпесный препарат, аналог гуанозина, ацикловир оказывал выраженное действие на динамику процесса разрушения клеток хозяина, что имело следствием задержку полной деградации клеток водорослей. Зарегистрирована прямо пропорциональная зависимость между дозой препарата и его антивирусным действием; ацикловир обладает ингибиторным действием на репликацию не только вируса герпеса, но на вирусы зоохлорелл [5].

Анализ показателей ЗФ выявил, что энкад также способен вмешиваться в жизненный цикл вируса; найдена концентрация препарата, при которой ингибировался процесс разрушения клеток зоохлорелл вирусом. Однако, не удалось выявить дозозависимый эффект действия энкада на противовирусную активность. Более того, использование ряда дозировок препарата имело следствием стимулирование процесса репликации самого вируса. Такое амбивалентное действие данного лекарственного средства объясняется, по-видимому, его сложным составом [6]. Из литературы известно, что при СПИДе вирус иммунодефицита человека поражает лимфо - циты Т-хелперы, что приводит к выраженному, необратимому иммунодефициту Т-хелперной функции, который сопровождается развитием широкого спектра оппортунистических инфекций. Совокупность всех представленных данных дает основание предположить возможность более широкого использования энкада в будущем при ряде аутоиммунных и вирусных заболеваниях человека.

1.  Патент РФ №2274658, 20.04.2006.

2.  Константинова И.В.Проблемы космической иммунологии. Система иммунитета в экс- тремальных условиях. М: Наука, 1988.

3.  Кушнер С.Г., Васильева Е.Ф., Каледа В.Г., др. Изменение функции лимфоцитов натураль-

ных киллеров при шизофрении // Ж-л неврологии и психиатрии им.С.С. Корсакова. – 2002. – №

8. – С. 30–36.

4.  Васильева Е.Ф., Каледа В.Г., Шабанова М.Е., Баурина М.М.Оптимизация психотропной

терапии эндогенных психозов с использованием иммуномодулятора – панкреатического гидро-

лизата дрожжевой РНК: M., – 2010. – С. 473–474.

5.  Агеевец В.А., Квитко К.В.Изучение Chlorella sp. и их вирусов как модельных объектов для тестирования противовирусных препаратов. – М., 2010. – С. 449–450.

166	Конгресс «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ» 17-20 марта 2015

SECTION | | “IMMUNOBIOTECHNOLOGY”

6.  Агеевец В.А., Квитко К.В., Шабанова М.Е., Баурина М.М.Изучение влияния многокомпонентного состава лекарственного препарата нуклеотидов на антивирусную активность: M., – 2012. – С. 180-181.

UDC 623.19.47

COMPARISON OFANTIVIRALEFFECT OF DRUGES OF NUCLEIC NATURE

Kvitko K.V.1,Ageevets V.A.1, Shabanova M.E.2, Baurina M.M.2, Yakubovich L.M2, Vasilyeva E.F3

1SPbGU, Russia, Saint-Petersburg, Universitetskaya nab. 7-9

2MUCTR, Russia, Moscow, Geroyev Panfilovtsev St. 20, Bldg.1, e-mail: [e-mail] 3Scientific Centre of Mental Health, RAMS, Moscow

The complex nucleotide drug encad [1] and the purine nucleoside analogue acyclovir were tested for antiviral effect to the group of large DNA-containing nucleocytoplasmic viruses on the model system «algophage-alga».

Keywords: algophage, alga, immunomodulator, encad.

When studying the drug encad it was revealed that this drug has the pronounced immunomodulatory effect. Thus, application of the drug encad for patients with pigmented retinitis, schizophrenia resulted in normalization of cellular immunity, including to increasing the number and functional activity of the population of T lymphocytes and subpopulations: T-lymphocyte suppressor cells and T helper cells, and also to strengthening of cytotoxic activity of lymphocytes of natural killers stimulating development of antitumor and antiviral immunity [2–4]. The desensibilizing ability of encad was revealed at a number of neuroinfectious and vascular diseases of the brain induced by changes in cell membrane properties. The entire spectrum of protective effect of a number of the medicals applied appears to be unknown in full. The study of antiviral effects of drugs: acyclovir and encad, was carried out with the model system «algophage-alga» included cells of zoochlorella Chlorella variabilis (NC64A) and specific lytic PBCV-viruses closed to the group of Herpesviridae (ICTVdB Index of viruses). The effects produced by both the virus and the drugs in various combinations on the host cells were registered as a change of the falls of delayed fluorescence (DF), an integrated indicator of a metabolic status of cells. Antiviral anti-herpes virus drug, a guanosine analogue, acyclovir had the pronounced effect on dynamics of process of destruction of host cells that resulted in delayed complete destruction of infected Chlorella cells; directly proportional function between a dose of the drug and its antiviral effect being registered, and acyclovir was shown to have inhibitory effect on replication not only a herpes virus, but and zoochlorella viruses [5].

The analysis of the date of DF revealed that encad was also able to interfere in the viral life cycle;

the concentration of encad at which the process of destruction of zoochlorella cells was inhibited by virus being found. However, unlike nucleoside medial acyclovir we did not manage to reveal cor- relation of antiviral effect of encad with its concentrations. Moreover, the use of a number of dosages of encad resulted in stimulation of process of viral replication; such ambivalent effect of this drug was apparently explained by its complex structure [6]. The human immunodeficiency virus is known from the literary date to affect lymphocyte helper T cells with the result that the acquired irreversible immunodeficiency of T helper cell function accompanied by a wide range of opportunistic infections develops. All presented data give the basis to assume possibility of wider use of encad for a number of autoimmune and viral diseases in the future.

1.  Patent US RU№2274658, 20.04.2006.

Congress “BIOTECHNOLOGY: STATE OF THE ART AND PROSPECTS OF DEVELOPMENT” March 17-20, 2015	167

СЕКЦИЯ | | «ИММУННАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ»

2.  Konstantinova I.V.Problems of space immunology. System of immunity under stress challenges. М: Science, 1988.

3.  Kouchner S.G., Vasilyeva E.F., Kaleda V.G., etc. Change of function of lymphocytes of natural killers at schizophrenia//J. Neurology and Psychiatry of S.S. Korsakov. 2002. № 8. P. 30–36.

4.  Vasilyeva E.F., Kaleda V.G., Shabanova M.E., Baurina M.M.Оpnimization of psychotropic therapy of endogenous psychoses with use of immune modulator – preparation of pancreatic hydrolyzate of yeast RNA. – M., 2010. P. 473–474.

5.  Ageevets V.A., Kvitko К.V.Studing of Chlorella sp. and their viruses as model system to test antiviral drugs. – М., 2010. P. 449–450.

6.  Ageevets V.A., Kvitko К.V., Shabanova M.Е., Baurina M.M.Multicomponent composition of the medical product of nucleotides and its antivirus activity. – M., 2012. P. 180-181.

УДК 57.083.3:621.039.75

КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ПРИ ОСТРОМ ГЕМОЛИТИКО-УРЕМИЧЕСКОМ СИНДРОМЕ У ДЕТЕЙ Бураковский А.И., Тишкевич М.Н., Байко С.В., Сукало А.В., Карпович М.В., Карпенко Т.А., Ястребова А.А.

ГНУ «Институт биоорганической химии НАН Беларуси», Минск, Беларусь 220141, ул. Купревича, д. 5, корп. 2

e-mail: [e-mail]

Комплексная оценка иммунологических маркеров при остром гемолитико-уремическом синдроме у детей позволит оптимизировать подходы к диагностике данной патологии, и, как следствие, снизить заболеваемость, степень тяжести и частоту неблагоприятных исходов.

Ключевые слова: гемолитико-уремический синдром, педиатрия, биомаркеры, диагностика Гемолитико-уремический синдром (ГУС) на сегодняшний день является одной из актуальных медико-социальных проблем педиатрии. На это указывает постоянный рост заболеваемости, высокая вероятность летального исхода, хронизация патологии почек и отсутствие специфических методов диагностики и лечения. Общепризнанным является мнение о ведущей роли иммунной системы в развитии основных заболеваний человека, которые в большинстве своем являются иммуно-опосредованными, в том числе и ГУС. В последние годы появилась возможность обнаружения широкого спектра специфических биомаркеров в сыворотке крови и моче (прокальцитонин, NGAL. β2-микроглобулин, IL-18, альдостерон и пр.), что значи - тельно расширило диагностический потенциал лабораторий при подозрении на наличие ГУС. Определение концентрационных зависимостей данных показателей позволит в самые ранние

сроки диагностировать патологию, уровень повреждения и своевременно применить лечебные

и реабилитационные мероприятия по предупреждению развития хронизации патологического

процесса. С этой целью предлагается система мультимаркерной диагностики с параллельным

выполнением тестов по нескольким маркерам, что позволит оптимизировать диагностику, и,

как следствие, снизить заболеваемость, степень тяжести и частоту неблагоприятных исходов при ГУС.

168	Конгресс «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ» 17-20 марта 2015