1. Закрепить теоретические знания по теме «Ферменты».

2. Провести опыты, доказывающие влияние рН среды на скорость ферментативной реакции.

Исходный уровень знаний и умений.

Учащийся должен знать:

1. Химическую природу ферментов, их биологическую роль.

2. Специфичность действия ферментов.

3. Активность ферментов, способы её выражения, клиническое значение её определения.

4. Влияние рН среды, температуры, концентрации субстрата и количества фермента на активность ферментов.

Учащийся должен уметь:

1. Приготовить реактивы для проведения опытов.

2. проводить ферментативные исследования согласно предложенной методике.

3. Производить интерпретацию результатов.

Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по теме «Ферменты».

2. Вводное слово преподавателя.

Каждый фермент проявляет свою максимальную активность только при определенном значении рН среды: пепсин – 1,0-1,5; трипсин – 7,0-8,0; амилаза слюны – 6,8-7,4. Отклонение рН от оптимальной величины вызывает понижение активности фермента и снижение скорости реакции, а при значительном изменении реакции среды фермент инактивируется.

Целью предлагаемой работы является проведение реакций, доказывающих влияние рН среды на активность ферментов. Это связано с тем, что в образовании фермент-субстратного комплекса участвуют электростатические связи, которые образуются между противоположно заряженными функциональными группами субстрата и активного центра фермента. Такие заряды возникают только при определенном значении рН, которое называется оптимальным. При изменении рН меняются и заряды этих групп и не происходит взаимодействия субстрата с ферментом.

2. Указания к занятию:

1. Подготовить рабочее место.

2. Соблюдать технику безопасности в работе.

3. Приготовить необходимые реактивы, раствор слюны согласно предложенной методике.

4. Использовать в работе резиновые груши с переходником.

5. Использовать моющие средства для мытья использованной посуды.

3. Практическая часть.

1. Лабораторная работа № 1. Выявление влияния рН среды на активность ферментов.

ОПЫТ 1: Влияние рН среды на активность ферментов.

ПРИНЦИП: Для амилазы слюны оптимальное значение рН среды – 6,8. В кислой и щелочной среде активность её снижается и расщепление крахмала происходит не полностью, до стадии декстринов, которые с раствором йода дают красно-фиолетовую или красно-бурую окраску.

Реактивы: 1% раствор крахмала; дистиллированная вода; 0,2% раствор НС1; слюна – раствор, разведенный в 10 раз; 1% раствор йода.

Ход определения.

В 8 пронумерованных пробирок наливают по 1 мл дистиллированной воды.

В 1-ю пробирку вносят 1 мл раствора соляной кислоты, перемешивают (рН 5,8).

Во 2-ю пробирку вносят 1 мл смеси из 1-ой пробирки, перемешивают (рН 6,2).

Во 3-ю пробирку вносят 1 мл смеси из 2-ой пробирки, перемешивают (рН 6,6).

Во 4-ю пробирку вносят 1 мл смеси из 3-ой пробирки, перемешивают (рН 6,8).

Во 5-ю пробирку вносят 1 мл смеси из 4-ой пробирки, перемешивают (рН 7,0).

Во 6-ю пробирку вносят 1 мл смеси из 5-ой пробирки, перемешивают (рН 7,4).

Во 7-ю пробирку вносят 1 мл смеси из 6-ой пробирки, перемешивают (рН 7,8).

Во 8-ю пробирку вносят 1 мл смеси из 7-ой пробирки, перемешивают.

После этого в каждую пробирку добавляют по 2 мл крахмала и по 1 мл раствора слюны. Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 15 минут при 37°С. Затем через 5 минут из 4-ой пробирки берут каплю смеси и добавляют в заранее приготовленную пробирку с 2 мл воды и каплей 1% раствора йода. Эту реакцию повторяют до тех пор, пока в капельной пробе не будет получено желтое или красно-желтое окрашивание (т.е. произойдет полное расщепление крахмала). После этого во все опытные пробирки прибавляют по 1 капле 1% раствора йода. Содержимое пробирок перемешивают. Наблюдают различное окрашивание смесей в соответствии с глубиной ферментативного гидролиза крахмала. Устанавливают, при каком значении рН произошло наиболее полное расщепление крахмала (оптимум рН).