1. Теоретическая часть.

   1. Общая характеристика, особенности метаболизма эритроцитов (гликолиз, пентозный цикл, изоцитратдегидрогеназа, малатдегидрогеназа, трансаминазы и др.). Na/K АТФ-аза, минеральный состав эритроцитов. Глутатион. Строение, функции, ферменты обмена глутатиона. Антиоксидантная защита. Характеристика белков и фосфолипидов мембран эритроцитов.

   2. Гемоглобин, строение, свойства, производные, виды Hb. Аномальные Hb. Сравнительная характеристика Hb и миоглобина.

   3. Дыхательная функция крови ее регуляция. Спектры крови гемоглобина и его производных. Гипоксия, аноксия, виды. Нарушение обмена при гипоксии. Регуляция степени сродства Hb к кислороду. Роль 2,3-ДФГК.

   4. Обмен хромопротеидов. Переваривание и всасывание. Обмен гемоглобина. Биосинтез гема до порфобилиногена (локализация, ферменты). Распад Hb в клетках РЭС (образование неконъюгированного билирубина). Механизм конъюгации билирубина в печени. Превращение билирубина в кишечнике. Диагностическое значение определения билирубина и продуктов его обмена в крови и моче при различных видах желтух (гемолитической, паренхиматозной, обтурационной).

   5. Метаболизм железа. Механизмы всасывания, транспорта и депонирования.

   6. Особенности метаболизма лейкоцитов. Биохимические основы фагоцитоза.

   7. Особенности метаболизма тромбоцитов.

2. Практическая часть - выполнение лабораторных работ:

   1. Определение содержания Hb в крови.

   2. Определение содержания билирубина в сыворотке крови.

3. Решение задач и проведение контроля конечного уровня

Литература основная:

1. Материал лекций.

2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия, М. Медицина, 1990, стр. 65-71, 434-436, 458-464, М. Медицина, 1998, стр. 78-85, 503-508, 585, 591-599.

3. Строев Е.А. Биологическая химия, М., Медицина, 1986.

4. Николаев А.Я. Биологическая химия, М., Высшая школа, 1989, стр. 227-228, 428-437.

дополнительная:

5. Уайт А. и др., Основы биохимии, том 3, М., Мир, 1981, стр. 1218-1301.

6. Федоров Н.А. Нормальное кроветворение, М., Медицина, 1975.

7. Марри Р. и др., Биохимия человека, М., Мир, 1993, том 1, стр. 52-62, 356-372.

8. Зилва Дж.Ф., Пэннел Д. Клиническая химия в диагностике и лечении, М., Медицина, 1986

9. Руководство по клинической лабораторной диагностике. том 3, Клиническая биохимия под ред. проф. М.А. Базарновой, Киев, 1991.

ЗАДАЧИ:

1. Какие из указанных соединений могут превращаться в желчные пигменты?

а) холевая кислота	д) фосфолипиды
б) гем	е) миоглобин
в) триглицериды	ж) ДНК
г) холестерин	з) цитохромы

2. Производными чего являются порфирины?

а) лизина и пролина	д) глицерина и ЖК
б) аланина и глутамина	е) карбамоилфосфата и
в) янтарной кислоты и глицина	орнитина
г) ацетил-КоА и оксалоацетата	ж) нуклеотидов

3. Уробилиноген не может быть производным от:

а) гемоглобина	д) пероксидазы
б) каталазы	е) хлорофилла
в) флавопротеида	ж) ДНК
г) цитохрома С	з) пиридиннуклеотида

4. Назовите белки сыворотки крови:

а) фибриноген	д) C-реактивный белок
б) альбумины	е) проконвертин
в) криоглобулины	ж) проакселерин
г) глобулины	з) ЛДГ

5. Где синтезируется альфа и бета-глобулины?

а) костный мозг	г) лимфоузлы	ж) кишечник
б) селезенка	д) печень	з) мышцы
в) кишечник	е) почки

6. Предшественниками гема гемоглобина являются:

а) уропорфириноген-III	д) вердоглобин
б) протопорфириноген-IX	е) протопорфирин
в) копропорфириноген-III	ж) биливердин
г) копропорфириноген-I	з) уропорфириноген-I

7. Порфирия связана с дефицитом активности:

а) фенилаланин-аминолиазы

б) гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазы

в) гем-синтетазы

г) ДАЛК-синтетазы

д) энтерокиназы

е) АРС-азы

ж) метилтрансферазы

з) карбамоилфосфатсинтетазы

8. При биосинтезе порфирина первой стадией является реакция:

а) конденсации двух молекул порфобилиногена

б) конденсации гли и сукцинил-CoA

в) образование протопорфирина

г) конденсации двух молекул ДАЛК

д) образование уропорфириногена-III.

е) образование протопорфириногена-IX

9. Билирубин глюкуронид характеризуется тем, что, он:

а) возрастает при неонатальной гипербилирубинемии

б) обычно находится в желчных протоках

в) жирорастворим

г) водорастворим

д) светочувствителен

е) токсичен

ж) не токсичен

10. При обструкции желчных протоков отмечается:

а) значительное увеличение содержания конъюгированного билирубина в крови

б) снижение содержания конъюгированного билирубина в крови

в) увеличение содержания неконъюгированного билирубина в крови

г) снижение содержания неконъюгированного билирубина в крови

д) низкая экскреция холестерина

е) снижение уровня билирубин-глюкуронида в фекалиях

ж) увеличение уровня билирубин-глюкуронида в фекалиях

з) увеличение содержания липидов в фекалиях

и) снижение содержания липидов в фекалиях

11. Когда уменьшается содержание железа в крови?

а) железодефицитная анемия	г) онкозаболевания
б) уремия	д) диарея
в) маточные кровотечения	е) рвота

12. Для какой из желтух характерно повышение конъюгированного билирубина в крови?

а) гемолитическая	д) болезнь Криглера-Найяра
б) болезнь Жильбера	е) болезнь Ротора
в) обтурационная	ж) болезнь Дубина-Джонса
г) паренхиматозная	з) физиологической желтухе

13. Содержание ферритина в сыворотке крови снижается при:

а) железодефицитных анемиях	г) коллагенозах
б) анемиях беременных	д) онкозаболеваниях
в) воспалительных процессах	е) желтухах

14. Когда возрастает содержание железа в сыворотке крови ?

а) гемохроматоз	д) эмфиземе легких
б) гемолитическая анемия	е) онкозаболевания
в) талассемия	ж) инфаркт миокарда
г) гепатит	з) гиповитаминоз В12

15. Патологическое действие высоких концентраций билирубина сводится к:

а) активации процесса свертывания крови

б) угнетению процесса свертывания крови

в) разобщению окисления и фосфорилирования

г) повышению проницаемости биологических мембран

д) инициации гемолиза

е) деструкции гепатоцитов

ж) инициации перекисных процессов

16. Наибольшей токсичностью обладает:

а) неконъюгированный билирубин

б) свободный билирубин связанный с альбумином

в) конъюгированный билирубин

г) билирубин конъюгированный, связанный с фосфолипидами

17. Печень здорового человека не пропускает в общий круг кровообращения поступающие из кишечника:

а) мезобилиноген	д) холестерин и его эфиры
б) желчные кислоты	е) глюкозу
в) фосфолипиды	ж) стеркобилиноген
г) триацилглицерины	з) индол

18. Водорастворимыми и обнаруживаемыми в моче фракциями билирубина и его производных являются:

а) бета, гамма и дельта изомеры свободного билирубина

б) альфа-изомер свободного билирубина

в) глюкурониды билирубина

г) стеркобилиноген

д) мезобилиноген (уробилиноген)

19. Глюкуронидированию в печени подвергаются:

а) билирубин	г) холестерин
б) стероидные гормоны	д) желчные кислоты
в) катехоламины	е) НЭЖК

20. Основными органами синтеза порфиринов являются:

а) костный мозг	д) тонкий кишечник
б) печень	е) миокард
в) почки	ж) головной мозг
г) легкие	з) кишечник

21. Накопление при порфириях уропорфириногена I и копропорфириногена I вызывает:

а) поражение кожи

б) гемолиз эритроцитов

в) увеличение селезенки

г) выделение мочи красного цвета

д) воспалительный процесс в почках

е) остеопороз

22. Для надпеченочной желтухи характерно повышение:

а) неконъюгированного билирубина в крови

б) конъюгированного билирубина в крови

в) уробилиногена в моче

г) стеркобилиногена в кале

д) желчных пигментов в моче

е) желчных пигментов в крови

23. Для обтурационной желтухи характерно повышение уровня:

а) общего и свободного билирубина крови

б) стеркобилиногена мочи

в) общего и связанного билирубина крови

г) мезобилиногена в моче

д) общего и связанного билирубина в крови ахоличный стул

е) свободного билирубина в крови.

24. Для паренхиматозной желтухи характерно увеличение содержания:

а) общего и свободного билирубина крови

б) стеркобилиногена в моче

в) общего и связанного билирубина в крови

г) уробилиногена в моче

д) общего, связанного билирубина крови

е) свободного билирубина крови

ж) билирубина в моче

25. При печеночной порфирии наблюдается:

а) повышение чувствительности кожи к свету

б) поражение нервной системы в виде полиневритов

в) поражение мышечной системы

г) желтушная окраска слизистых оболочек и склер

д) зуд кожных покровов

26. Всасыванию железа в кишечнике способствует:

а) воздействие HCl желудочного сока

б) гастроферрин

в) лактоферрин

г) аскорбиновая кислота

д) таннин

27. Где депонируется железо?

а) в миоглобине	г) в ферритине
б) в гемоглобине	д) в протопорфиринах эритроцитов
в) в трансферрине

28. При каких состояниях повышается в крови содержание IgG?

а) хронические заболевания печени

б) подострые и хронические инфекции

в) коллагенозы

г) гастроэнтеропатии

д) ожоги (начальная стадия)

е) онкозаболевания

ж) паразитарные заболевания

з) ожоги (восстановительная стадия)

29. Какой белок плазмы крови является транспортной формой железа в организме?

а) транскортин	г) лактоферрин	ж) гаптоглобин
б) трансферрин	д) церулоплазмин	з) гемоглобин
в) ферритин	е) апоферритин

30. Какой белок плазмы крови специфичен для злокачественных опухолей печени?

а) гаптоглобин	д) -2-макроглобулин
б) церулоплазмин	е) антитрипсин
в) трансферрин	ж) факторы роста
г) -фетопротеин	з) проконвертин

31. При каких заболеваниях увеличивается концентрация общих гликопротеидов в сыворотке крови?

а) туберкулез легких

б) острые неспецифические пневмонии

в) инфаркт миокарда

г) инфекционный гепатит

д) микседема

е) болезнь Иценко-Кушинга

ж) ожоговая болезнь

з) онкозаболевания

32. Какой из анионов плазмы является доминирующим по своему количественному содержанию?

а) хлорид-ион	в) H2PO4^-	д) протеинат-ион	ж) нитраты
б) HCO3^-	г) HPO4^2-	е) SO4^2-	з) карбонаты

33. Гипернатриемия обуславливается:

а) резким ограничением введения жидкости (водный голод)

б) увеличением введения внутрь или парэнтерально натрия

в) гиперфункцией коры надпочечников

г) синдром усталости клеток

д) длительный прием мочегонных средств

е) отравления солями тяжелых металлов

ж) гипофункцией коры надпочечников

Практическая часть:

Лабораторная работа № 1. Определение содержания гемоглобина в крови.

ПРИНЦИП МЕТОДА: Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образующий с ацетон-циангидрином окрашенный комплекс гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина.

ХОД РАБОТЫ. Опытная проба: 0,02 мл крови приливают к 5 мл трансформирующего раствора (разведение крови в 251 раз), хорошо перемешивают, оставляют стоять 10 минут, после чего измеряют на колориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против холостой пробы (трансформирующий раствор или вода).

Экстинкцию стандартного раствора измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу.

Расчет содержания гемоглобина (в мг%) производят по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору гемиглобинцианида, или по формуле:

Hb = Еоп/Ест  К  С  0.01

Где:

Еоп - экстинкция опытной пробы

Ест - экстинкция стандартного раствора

С - концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе равная 59.75 мг%

К - коэффициент разведения крови

0,01 - коэффициент для пересчета мг% в г/л (в системе СИ).

Содержание гемоглобина в крови в норме:

у женщин 12-14 г% (120-140 г/л)

у мужчин 13-16 г% (130-160 г/л)

ВЫВОД:

Лабораторная работа № 2. Определение общего билирубина в сыворотке крови (метод Иендрашика и Клеггорна).

ПРИНЦИП МЕТОДА: метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом малиново-красного цвета. Неконъюгированный билирубин вступает в "непрямую" реакцию с диазосмесью - после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива. При этом определяется концентрация "общего" билирубина. По разности концентраций "общего" билирубина и "прямого" билирубина определяют содержание "непрямого".

ХОД РАБОТЫ. Готовят две пробирки (контрольную и опытную). Составляют реакционную смесь по схеме:

Проба	Сыворотка крови (мл)	Кофеиновый реактив (мл)	Дистиллир. вода (мл)	Диазосмесь (мл)
Опытная	1	3,5	-	0,5
Контрольная	-	3,5	1	0,5

Диазосмесь готовят (в количестве, достаточном для всей учебной группы), смешивая 10 мл диазореактива II ( 0.5% раствора нитрата натрия) с 0.3 мл диазореактивом I (готовится в лаборатории кафедры).

Содержимое опытной и контрольной проб хорошо перемешивают, ставят на 20 мин. в темноту, затем колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (длина волны 500-560- нм) против контроля. Если в пробах развивается слабая окраска, то перед колориметрией содержимое обеих пробирок подщелачивают, добавляя в них по 3 капли 30% раствора NaOH. При этом цвет раствора переходит в зеленый, а при большой концентрации билирубина - в синий; часто наблюдается исчезновение мути.

Расчет производят по калибровочному графику.

При оформлении работы в протокол вносят принцип метода, результат колориметрии и расчет. Отмечают пределы колебаний концентрации билирубина в норме.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Билирубин образуется в организме в результате естественного распада в клетках ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенка) гемоглобина и других гемопротеидов (цитохромы, каталаза и др.). Билирубин относится к группе желчных пигментов, является токсическим веществом и обезвреживается в гепатоцитах. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени происходит процесс обезвреживания по схеме:

УДФ-глюкуроновая кислота

БилирубинБилирубин-глюкуронид

глюкуронилтрансфераза

Образующиеся при этом глюкурониды билирубина хорошо растворимы в воде, секретируются в просвет желчного капилляра и выводится из организма по желчевыводящим путям.

В сыворотке крови содержится две фракции билирубина, вместе составляющие "общий" билирубин:

• неконъюгированный (непрямой, токсичный, свободный, водонерастворимый) существует в виде комплекса с альбумином.

• конъюгированный (билирубин глюкуронид, прямой, нетоксичный, связанный, водорастворимый).

Содержание билирубина в крови в норме составляет 0,5-1,2 мг% (8.5-20.5 мкМ/л в системе СИ), причем 75% приходится на долю неконъюгированного. Определение его уровня в крови является важным диагностическим тестом. Так, при различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия - увеличение концентрации билирубина до 30-35 мг% (512.5 -600.0 мкМ/л) и более.

Дифференциальная диагностика различных видов желтух осуществляется на основании исследования содержания фракций билирубина в крови, а также особенностей клинического течения заболевания и др.

ВЫВОД:

ЗАНЯТИЕ 30 ТЕМА: Биохимия почек в норме и при патологии.

Цель занятия: изучить особенности метаболизма почек и биохимическую основу их основных функций в норме и при патологии. Научиться определять основные физико-химические параметры мочи в норме и при патологии.

Исходный уровень знаний и умений:

1. Строение и функция нефронов

2. Механизм образования мочи

3. Механизм действия гормонов - альдостерона, вазопрессина, натрийурического фактора

4. Метаболизм и механизм действия витамина D

5. Принципы и механизмы регуляции кислотно-основного состояния

6. Механизмы регуляции уровня глюкозы в крови, глюконеогенез.

Студент должен знать:

1. Строение и функции нефрона

2. Особенности кровоснабжения почки и нефрона

3. Механизмы действия гормонов

4. Метаболизм и механизм действия витамина D

5. Принципы и механизмы регуляции КОС

6. Метаболизм углеводов, липидов и аминокислот

7. Механизмы регуляции уровня глюкозы в крови

Студент должен уметь:

1. Проводить титрометрический анализ

Структура занятия: