Предмет и задачи клинической микробиологии.

Размещение, оборудование, безопасность работы бактериологической лаборатории в клинике. Организация, забор и доставка клинического материала. Транспортные (консервирующие) питательные среды.

Основные учебные вопросы:

1. Предмет и задачи клинической микробиологии.

2. Размещение, оборудование, безопасность работы бактериологической лаборатории в лечебно-профилактическом учреждении.

3. Правила забора, доставки и хранения клинического материала.

4. Методы стерилизации лабораторной посуды и питательных сред.

5. Транспортные питательные среды.

6. Основные питательные среды, применяемые при бактериологических исследованиях.

7. Современная классификация прокариот.

8. Основные принципы систематики бактерий. Систематика по фенотипическим признакам. Систематика по молекулярно-генетическим признакам.

9. Основные таксономические категории бактерий. Категории вида. Популяция, штамм, культура, клон.

10. Принципы систематики бактерий в определителе Берджи

Вспомогательные материалы по теме.

Микробиологическая лаборатория в зависимости от ее профиля обеспечивается необходимым для работы количеством помещений: гардероб для персонала, препараторская, бактериологическая комната с боксами для работы с отдельными группами бактерий и вирусов, средоварочная, моечная, стерилизационная, виварии с раздельным содержанием здоровых и подопытных животных. Помещения лаборатории, в которых проводится работа с возбудителями заразных болезней, располагаются в отдельном здании или его изолированной части и имеют не менее двух входов.

Лабораторию оборудуют водопроводом, канализацией, центральным отоплением, обеспечивают электроэнергией, горячим водоснабжением и газифицируют. При отсутствии в населенном пункте водопровода и канализации устраивают местный водопровод, канализацию и очистные сооружения с устройствами для обеззараживания сточных вод.

В лаборатории устанавливают водопроводные раковины для мытья рук персонала и раковины для мытья посуды и инвентаря.

Все помещения лаборатории обеспечиваются естественным и искусственным освещением, отвечающим требованиям, предусмотренным строительными нормами и правилами. Рабочие столы в лаборатории размещаются так, чтобы свет падал сбоку, с левой стороны.

Помещения лаборатории оборудуют легко открываемыми фрамугами (форточками), которые в летнее время закрываются мелкоячеистыми сетками.

Стены в лабораторных помещениях облицовывают высотой в 1,5 м кафелем или красят масляной краской светлых тонов; в боксах и виварии стены и потолок красят масляной краской. Полы покрывают линолеумом, в боксах и виварии - гладкой плиткой.

Лабораторную мебель красят масляной или эмалевой краской светлых тонов, рабочие поверхности столов покрывают пластиком или другим материалом, не портящимся от применения дезинфектантов. Внутренние и наружные поверхности мебели должны быть без щелей и пазов, затрудняющих проведение дезинфекции.

Температура воздуха в лабораторных помещениях поддерживается в пределах 18-21 °С, в районах с жарким климатом они оборудуются кондиционерами.

Помещения лаборатории должны быть непроницаемы для грызунов.

Каждый сотрудник лаборатории должен иметь закрепленное за ним рабочее место. Перед началом работы надевается спецодежда, которая хранится в индивидуальных шкафчиках отдельно от верхней одежды. Тип защитного костюма и частота его смены определяются в зависимости от характера работы.

Выполняя микробиологические исследования, необходимо соблюдать следующие правила:

• с инфицированным материалом работают только с помощью инструментов (пинцеты, петли, корнцанги и пр.);

• прикасаться руками к исследуемому материалу и конденсату в засеянных чашках запрещается;

• перед работой тщательно проверяют целость стеклянной посуды, проходимость игл и надежность поршней шприцев;

• при посеве материала делают надпись на пробирках, чашках Петри, колбах, флаконах с названием номера анализа (культуры) и даты посева;

• в пробирки и чашки Петри материал высевают вблизи от огня горелки с обжиганием петли, шпателя, краев пробирки;

• во время работы все чашки с посевами помещают в кюветы или на подносы, пробирки - в штативы;

• растворы, содержащие патогенные микроорганизмы, набирают пипеткой с помощью резинового баллона;

• насасывать ртом и переливать растворы из сосуда в сосуд через край нельзя;

• по окончании работы запрещается оставлять на рабочих столах нефиксированные мазки, чашки Петри, пробирки и другую посуду с инфицированным материалом.

Доставлять инфицированный материал в лабораторию и переносить его из одной лаборатории в другую на территории учреждения нужно в специально приспособленной посуде (металлических биксах, ящиках, баках).

В комнатах, предназначенных для обработки и посева инфекционного материала, нельзя проводить другие работы, выращивать цветы, держать домашних животных.

Принимать пищу, пить, курить, хранить продукты питания в помещениях, где работают с материалом, зараженным патогенными микроорганизмами или подозрительным на такое заражение, запрещается.

Центрифугирование инфекционного материала проводит специально обученный персонал. Если в процессе центрифугирования разбивается пробирка, содержащая инфекционный материал, центрифугу отключают от сети, дезинфицируют, а загрязненные места очищают.

Термостаты и термостатные комнаты, предназначенные для выращивания патогенных микроорганизмов, дезинфицируют не реже одного раза в месяц.

При хранении инфекционных материалов в холодильнике необходимо принимать меры, предупреждающие его инфицирование. Оттаивание холодильника, предусмотренное правилами эксплуатации, нужно совмещать с его дезинфекцией.

В процессе эксплуатации паровых стерилизаторов, помимо выполнения "Правил устройства и безопасности эксплуатации сосудов, работающих под давлением", необходимо соблюдать следующие требования:

- сдавать под расписку лицу, работающему на паровом стерилизаторе, опломбированные баки и другую посуду с инфекционным материалом, не открывать их до стерилизации;

- вести журнал стерилизации:

- при открывании крышки парового стерилизатора защищать руки от ожогов;

- обеззараживать в конце рабочего дня помещение стерилизационной.

До начала работы помещение лаборатории убирают влажным способом. Пыль с поверхности столов, приборов, оборудования, подоконников стирают чистой тряпкой, увлажненной дезинфицирующим раствором. Полы протирают тряпкой, смоченной 3% раствором хлорамина (карболовой кислоты).

В ходе работы и по ее окончании применяют следующие способы дезинфекции:

- использованные при лабораторных исследованиях предметные стекла, пипетки, шпатели погружают на сутки в банки с дезинфицирующим раствором, затем моют и кипятят;

- отработанные чашки Петри и пробирки с посевами патогенных культур, посуду с использованным материалом, взятым от инфекционных больных, собирают в банки с крышками и стерилизуют паром под давлением;

- трупы зараженных животных помещают в сосуд с дезинфицирующим раствором и по окончании рабочего дня сжигают в специальных печах (крематориях) или автоклавируют в течение часа при температуре 120°С;

- поверхности рабочих столов обрабатывают дезинфицирующим раствором;

- помещения боксов дезинфицируют с помощью бактерицидных ламп и путем обтирания оборудования, стен и столов дезинфицирующим раствором, бактерицидные лампы включают только в отсутствие персонала;

- руки обмывают дезинфицирующим раствором с последующим мытьем с мылом.

Во время проведения дезинфекционных работ персонал лаборатории обязан надевать резиновые перчатки.

При перерыве в работе с инфекционным материалом, выходе из помещения лаборатории, бокса, а также по окончании работы, уборки рабочего места и помещений лаборатории сотрудники должны дезинфицировать руки и мыть их с мылом.

В лаборатории должна быть укомплектованная аптечка для экстренной профилактики и оказания медицинской помощи. В аптечке содержатся этиловый спирт, настойка йода, сухой марганцовокислый калий, перевязочные средства, сухие навески протаргола и азотнокислого серебра, которые можно растворять в мерном объеме дистиллированной воды для получения 1 % раствора, а также необходимый набор антибиотиков с неистекшим сроком годности.

МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ

Стерилизация (от лат. Sterilis - бесплодный) - освобождение от всего живого, полное уничтожение в материалах всех микроорганизмов и их спор.

Стерилизация широко используется в медицине, фармакологии и на производстве. Изменения в службах охраны здоровья, в типах медицинской продукции, требующих стерилизации, влекут за собой изменения в технике осуществления стерилизации. Методы стерилизации описаны ниже.

Физические методы стерилизации

Прокаливанием на пламени горелки или спиртовки стерилизуют металлические инструменты, бактериологические петли, иглы, пинцеты, предметные стекла.

Кипячение применяют для стерилизации хирургических инструментов, игл, резиновых трубок. Кипячение в течение 30 мин в специальных аппаратах-стерилизаторах не обеспечивает стерильности объекта, если он был заражен спорами некоторых бактерий.

Стерилизация сухим жаром применяется для обеспложивания стеклянной посуды, пробирок, колб, чашек Петри и пипеток. Для этой цели используют сухожаровые шкафы (печи Пастера), в которых необходимый эффект достигается при температуре 160°С в течение 2 ч или при температуре выше 170°С в течение 40 мин.

Принципиальные преимущества сухого жара заключаются в том, что при его применении не происходит коррозии металлов и инструментов, не повреждаются стеклянные поверхности; он пригоден для стерилизации порошков и не содержащих воды нелетучих вязких веществ. К недостаткам данного метода относятся медленная передача тепла и продолжительные периоды стерилизации; при использовании сухого жара более высокие температуры (выше 170°С) могут неблагоприятно действовать на некоторые металлы, а также вызывать обугливание и возгорание ватных пробок и бумаги. Кроме того, если нет циркуляции воздуха, может происходить образование слоев воздуха с разными температурами.

При обработке сухим жаром микроорганизмы погибают в результате окисления внутриклеточных компонентов. Споры бактерий более устойчивы к сухому жару, чем вегетативные клетки.

Стерилизация паром под давлением - один из наиболее эффективных методов, основанный на сильном гидролизующем действии насыщенного пара. Паром под давлением стерилизуют различные питательные среды (кроме содержащих нативные белки), жидкости, приборы, резиновые предметы, стеклянную посуду с резиновыми пробками. Для этой цели применяют паровые стерилизаторы (автоклавы). Большинство паровых стерилизаторов относится к гравитационным: пар движется в них сверху вниз под действием разности плотностей пара и воздуха. В таких стерилизаторах существенны проблемы проникновения влаги, перегрева, удаления воздуха, а также отрицательные последствия, вызываемые воздействием тепла и (или) влаги. Весьма важны правильное приготовление стерилизуемых образцов и надлежащая загрузка.