ВЕТЕРИНАРНА МІКРОБІОЛОГІЯ

Змістовний модуль

«МОРФОЛОГІЯ МІКРООРГАНІЗМІВ»

Робота 1	ОБЛАДНАННЯ І МЕТОДИ РОБОТИ В МІКРОБІОЛОГІЧНІЙ ЛАБОРАТОРІЇ
Робота 2	МЕТОДИКИ МІКРОСКОПІЧНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ. Виготовлення живих препаратів
Робота 3	ДОСЛІДЖЕННЯ ФАРБОВАНИХ ПРЕПАРАТІВ. Виявлення структур мікробних клітин за допомогою ПРОСТОГО фарбування
Робота 4	Виявлення будови клітинної стінки мікроорганізмів. Класичний спосіб фарбування за Грамом та його модифікації
Робота 5	ВИЯВЛЕННЯ СТРУКТУР БАКТЕРІЙ. Фарбування оболонок кислотостійких мікроорганізмів

РОБОТА №1

ОБЛАДНАННЯ І МЕТОДИ РОБОТИ В МІКРОБІОЛОГІЧНІЙ ЛАБОРАТОРІЇ

Таблиця 1. Обладнання мікробіологічної лабораторії

Вид лабораторного дослідження	Обладнання
№1. Мікроскопія матеріалу від хворого	Знежирені предметні та покрівні скельця, бактеріологічні голки та петлі, розчини барвників, кислот, лугів, спирт, ацетон, вазелін, фільтрувальний папір, пальник.
№2. Мікроскопія мікробного матеріалу, вирощеного в штучних умовах (в багатьох випадках скупчення клітин збудника мають вигляд, який відрізняється від їх вигляду в матеріалі, відібраного у тварини).
№3. Мікроскопія матеріалу із уражених органів лабораторних тварин
Висів мікроорганізмів з патологічного матеріалу	Чашки Петрі, пробірки, піпетки, колби із спеціальними або діференційно-діагностичними середовищами.
Вирощування чистої культури збудника	Чашки Петрі, пробірки, піпетки, колби із середовищами загального призначення
Внесення чистої культури збудника в організм здорових лабораторних тварин (кролі, миші, морські свинки, птиця та ін.)	Чашки Петрі або пробірки, в яких вирощено чисту культуру збудника, шприци,піпетки та ін.
Внесення чистої культури збудника в живильні середовища специфічного складу (біохімічні дослідження або дослідження харчових потреб збудника хвороби)	Чашки Петрі або пробірки, в яких вирощено чисту культуру збудника, пробірки із напіврідкими або рідкими середовищами, піпетки, голки, петлі, вазелін, індикаторні папірці.
Серологічні реакції	Чашки Петрі або пробірки, в яких вирощено чисту культуру збудника, суспензія патологічного матеріалу від лабораторних тварин, сироватка крові хворих або підозрюваних тварин. Пробірки, серологічні плашки, піпетки, предметні скельця, агар, суспензія еритроцитів, діагностикуми та ін.

Під час встановлення видової належності збудника хвороби використовують різноманітні методи досліджень: мікроскопічні, бактеріологічні, біологічні, біохімічні та серологічні (табл 2).

Таблиця 2. Методи лабораторних досліджень

Метод досліджень	Варіанти досліджень	Мета дослідження
Мікроскопія	№1. Мікроскопія матеріалу від хворого	Перевірка наявності збудника в патологічному матеріалі.
	№2. Мікроскопія мікробного матеріалу, вирощеного в штучних умовах	Виявлення збудника, форма і розміщення клітин у якого співпадають з мікроскопією №1 або характерні саме для даного біологічного матеріалу (скупчення клітин збудника мають вигляд, який відрізняється від їх вигляду в пробах, відібраних від тварини).
	№3. Мікроскопія матеріалу із уражених органів лабораторних тварин	Перевірка наявності збудника, форма якого співпадає із формою збудника, знайденого в матеріалі від хворої сільськогосподарської або свійської тварини
Культивування збудника (бактеріо-логічні методи)	Висів з патологічного матеріалу	Виділення збудника хвороби із суміши мікробів, характерних для хворого організму. (Здійснюється на спеціальних або диференційно-діагностичних живильних середовищах)
	Вирощування чистої культури збудника	Накопичення культури збудника хвороби. (Найчастіше здійснюється на спеціальних або на живильних середовищах загального призначення)
Біопроба (біологічні методи).	Внесення чистої культури збудника в організм здорових лабораторних тварин (кролі, миші, морські свинки, кошенята, курчата та ін.)	Дослідження проводиться в декілька етапів: Зараження лабораторних тварин чистою культурою збудника. Реєстрація проявів хвороби тварини. Розтин, реєстрація патзмін в органах штучно зараженої тварини з подальшим іх дослідженням (мікроскопія, виявлення збудника в серологічних реакціях)
Біохімічні тести (біохімічні методи)	Внесення чистої культури збудника в живильні середовища специфічного складу.	Перевірка фізіологічних властивостей збудника хвороби (здатності до претравлення конкретних речовин та виділення певних продуктів біохімічних реакцій)
Серологічні та алергічні дослідження (імунологічні методи)	Серологічні реакції	Дослідження проводяться в декількох напрямках, в яких виявляють: Наявність речовин, характерних для збудника хвороби ( антигени - речовини органоїдів мікробної клітини, токсини) ; Наявність захисних речовин, характерних для природно або штучно заражених організмів (роботи проводяться із сироваткою крові дослідних тварин).

РОБОТА №2

МЕТОДИКИ МІКРОСКОПІЧНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ.

Виготовлення живих препаратів

Для проведення мікроскопічного дослідження використовують: предметні скельця (прямокутна скляна пластина 75*25 мм, товщина – не більше1,2 мм) та покрівні скельця (квадратна скляна пластина 25*25 мм, товщина – не більше 0,15-0,17 мм). Предметні і покрівні скельця із більшою товщиною не дозволяють отримувати чітке зображення об’єкту. Варіанти підготовки скелець до роботи наведені на рис 3.

О чищення предметного скла від жиру проводиться

Витримування впродовж декількох діб в хромовій суміші. Потім – промивання водопровідною та дистильованою водою.	Кип’ятіння 10 хв в 10% НС1, потім – у мильному або 10% содовому розчині (нові скельця – у 1% розчині соди).	Промивання водою та протирання ефіром.
Зберігати чисті предметні скельця найкраще в банках або ванночках з 96% етиловим спиртом

Рис. 3. Підготовка предметних скелець до роботи.

В залежності від виду матеріалу та мети дослідження в препараті можуть бути живі або фіксовані (мертві) мікробні клітини.

Методи виготовлення живих препаратів

Живі мікробні клітини прозорі і лише трохи виділяються на фоні поля зору у мікроскопі. В залежності від мети дослідження, живий препарат готують в двох варіантах.

В живому вигляді зручно вивчати:

• морфологічні особливості таких великих за розмірами мікробних клітин як гриби та дріжджі (еукаріоти). В готових препаратах можна побачити форму клітин, спор грибів та ін. структур. Препарат готується методом “розчавленої краплі” (рис. 4);

• виявляти здатність до руху у бактерій певних видів. В таких препаратих органів руху – джгутиків – не видно. Але направлений рух мікроорганізмів в полі зору мікроскопу під час тривалого спостереження забезпечують саме ці структури. Препарат готується методом “висячої краплі” (рис. 5).

1	2	3
На предметне скло наноситься крапля води	В воду петлею (з колонії) або піпеткою (з бульйону, мокроти) вноситься мікробний матеріал	Суспензію петлею розподіляють по площині 15*15 мм та накривають покрівним скельцем, тримаючи його під кутом

Рис.4. Виготовлення мікробних препаратів методом “розчавленої краплі.

Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

1	2	3
На покрівне скельце обережно наноситься крапля води	В воду петлею (з колонії) або піпеткою (з бульйону, мокроти) вноситься мікробний матеріал. Розмішується петлею	Покрівне скельце накривають предметним склом з лункою, краї якої змащено вазеліном, і два скла разом –перегортають.

Рис.5. Виготовлення мікробних препаратів методом “висячої краплі.

Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________