Виявлення ендоспор

При спостереженні в живому стані спори бацил мають вигляд овальних утворень, які сильно заломлюють світло. Вони розміщені в середній частині або на кінці бактеріальної клітини. Оболонки ендоспори не дають можливості ефективно профарбувати клітину бацили одним барвником. Тому простими методами ендоспори не виявляються взагалі.

Оболонки змінюють відношення до фарбування після обробки розбавленою гарячою (60^оС) НС1. Крім того, розроблені методики фарбування, які грунтуються на комбінованій дії концентрованих розчинів барвників і температури (табл.9)

Табл.9. Методики виявлення ендоспор бацил.

Назва методу	Реактиви	Хід роботи*
1	2	3
Метод Пешкова Спори – сині або голубі, клітина – рожева	Метиленовий синій Леффлера наноситься на папір	Мазки нагрівають до появи парів (над полум’ям 2-3 хв, на водяній бані – 10 хв)
	-	Мазки остудиди і промити водою
	0,5% сафранін або 0,5 % нейтральний червоний	Водним розчином барвника мазок фарбують 1-2 хв
	-	Препарат промити, висушити. Мікроскопія з імерсією.
Метод Циля-Нільсена Спори –червоні, клітина – синя	Карболовий фуксин Циля наноситься на папір	Мазки нагрівають на водяній бані 5-7 хв, додаючи фарбу 2-3 рази.
	5% сірчана кислота	Мазки знебарвити у кислоті до блідо-рожевого кольору
	Метиленовий синій (1:40)	Фарбування 3-5 хв
	-	Препарат промити, висушити. Мікроскопія з імерсією.

Виявлення капсул

Капсула складається з полімерів різної будови: поліцукрів, ліпополісахаридів, поліпептидів. Ці структури у бактерій можна досліджувати різними методами (табл 10):

• Живі препарати. 1). До водної суспензії мікроорганізмів додають такі барвники як 3% конго червоний або 10% опаловий синій. Головною проблемою при виборі такого методу дослідження є отримання одношарового препарату бактерій. Для цього надлишок рідини відсмоктують фільтрувальним папером і одночасно притискають суспезію покрівним скельцем. Даний метод потребує певних навичок у дослідника.

2. Суспензію живих бактерій можна робити не у воді, а у розчині стерильної туші (негативне фарбування).

• Фіксовані препарати. Речовини капсули дуже легко руйнуються при фіксації, тому цю стадію роботи потрібно проводити обережно. Через це фіксація мікроорганізмів здійснюється хімічним шляхом або пасивно (висушування на повітрі). Надалі препарат фарбують певними барвниками

Табл.10. Методики виявлення капсул у бактерій.

Назва методу	Реактиви	Хід роботи
Метод Буррі Клітини з капсулами прозорі, фон – темний	Туш	На предметне скло нанести краплю туші, розмішати в ній досліджувану культуру.
	-	Виготовити”мазок крові”. Висушити на повітрі. Мікроскопія з імерсією.
Метод Буррі-Гінса Клітини – червоні, капсули прозорі, фон – темний	Туш	На предметне скло нанести краплю туші, розмішати в ній досліджувану культуру.
	-	Виготовити”мазок крові”. Висушити на повітрі.
	96% етиловий спирт	Налити на мазок декілька крапель спирту, спалити його на мазку (для фіксації).
	Фуксин Пфейффера	Фарбувати 3-5 хв
	-	Промити водою. Висушити. Мікроскопія з імерсією.
Метод Антоні Клітини – темно-фіолетові, капсули – блідо-голубі	1% водний розчин кристалічного фіолетового	Мазок висушити на повітрі Фарбувати крісталічним фіолетовим 2 хв.
	20% водний розчин сульфату міді	Змити фарбу розчином сульфату міді (СuSO4)
	-	Не промивати водою. Висушити на повітрі. Мікроскопія з імерсією.

Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________