2 Этап. Выделение чистой культуры возбудителя заболевания.

• Метод Дригальского - метод изолированных колоний, используется для культур, растущих на плотных питательных средах.

• Метод Коха - метод серийных разведений, используется для культур, не растущих на плотных питательных средах.

• Метод Шукевича - используется для микроорганизмов дающих ползучий рост (роение).

3 Этап. Идентификация выделенного возбудителя заболевания.

Определение вида возбудителя заболевания из материала больного проводят по следующим признакам:

1. По морфологии возбудителя (из чистой культуры готовят мазки, окрашивают и микроскопируют).

2. По культуральным свойствам (характеру роста на питательных средах.).

3. По биохимической активности:

Сахаролитическая активность - разложение углеводов и многоатомньгх спиртов до кислоты (К) - изменение цвета индикатора, или до кислоты и газа (КГ) - изменение цвета индикатора и образование пузырьков газа. Сахаролитическую активность изучают на средах Гисса, которые содержат тот или иной углевод, многоатомный спирт и индикатор.

Протеолитическая активность - способность разлагать белки с образованием аммиака (лакмусовая бумажка синеет); сероводорода - сеют микроорганизм на пептонную воду и под пробку вносят индикаторную бумажку, пропитанную уксусно-кислым свинцом - при выделении сероводорода бумажка чернеет; индола - сеют культуру на мясо-пептонный бульон, под пробирку вносят индикаторную бумажку, пропитанную щавелевой кислотой - при выделении индола бумажка розовеет.

Способы изучения биохимических свойств бактерий:

А). Среды «пестрого ряда» (среды Гисса).

Б). Система индикаторных бумаг (СИБы).

Состав: диски из фильтровальной бумаги, пропитанные питательными средствами (питательная основа + субстрат + индикатор) и высушенные, хранятся во флаконах.

Принцип действия: диски добавляются к густой суспензии исследуемой культуры в физрастворе. Учет производят после 18-24 часовой инкубации в термостате по изменению цвета индикатора.

В). Панели биохимической идентификации.

Состав: в лунках специальных пластиковых панелей находятся соответствующие высушенные питательные среды (питательная основа + субстрат + индикатор).

Принцип действия: в лунки вносят суспензию исследуемой культуры и после инкубации (от 5 до 24 часов) учитывают результат по изменению цвета индикатора.

Примеры: Паналь биохимической дифференцировки энтеробактерий –ПБДЭ (Россия), АРI –20Е (Франция), Crystal (США).

Г). Системы автоматизированной идентификации.

Принцип действия тот же, что и в предыдущем методе, однако инкубация панелей, учет результатов и идентификация производится при помощи компьютера.

Примеры: MS-2 (США), Bioscreen (Финляндия), Sceptor (США).

4. По антигенной структуре: постановка реакции агглютинации (РА) на стекле с агглютинирующими сыворотками.

5. Фаготипаж: определение вида возбудителя по заведомо известному бактериофагу (вирус бактерий) методами: стерильного пятна и просветления бульона.

6. По признакам патогенности: определение токсигенности культуры (в реакции преципитации в агаре (ПР); в реакции нейтрализации на животных (РН). По ферментам патогенности (лецитоветиллаза, плазмокоагулаза). Антифагины - капсула при микроскопировании.

Выделенная чистая культура возбудителя заболевания должна быть исследована на чувствительность к антибиотикам для назначения правильного этиотропного лечения или к дезредствам

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА.

Заполнить таблицы и схемы.

Типы питания бактерий	Механизмы питания бактерий