- •Культивирование микроорганизмов.
- •Классификация питательных сред.
- •1. Консистентция
- •2. Состав:
- •3. Назначение:
- •Этапы бактериологического метода диагностики.
- •1 Этап. Посев исследуемого материала на питательные среды.
- •2 Этап. Выделение чистой культуры возбудителя заболевания.
- •3 Этап. Идентификация выделенного возбудителя заболевания.
- •Классификация питательных сред:
- •Бактериологический метод исследования
- •Посев исследуемого материала (культивирование)____________________
- •План занятия
- •2. Бактериологический метод диагностики
- •Фазы роста и размножения бактерий.
- •Культивирование анаэробов
- •Фазы роста микроорганизмов:
- •Условия культивирования микроорганизмов.
- •Культуральные свойства микроорганизмов
- •Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах
- •Чистая культура - _______________________________________________ Методы выделения чистых культур бактерий
- •План занятия
- •Ферменты бактерий
- •Пигментообразование у бактерий
- •Самостоятельная работа .
- •Методы идентификации микроорганизмов
- •План занятия
- •Культивирование риккетсий, вирусов и хламидий
- •1 Этап – культивирование
- •2Этап - индикация
- •2Этап - идентификация вирусов (определение вида вируса в исследуемом материале)
- •Выберите один или несколько правильных ответов
- •Составьте логические пары: вопрос-ответ
- •51. Укажите морфологические и биологические особенности хламидий:
Культивирование анаэробов
Культивирование анаэробов требует специальных условий, т.к. эти микробы необходимо лишить доступа свободного кислорода. В питательные среды, используемые для посева анаэробов, добавляют вещества, которые поглощают кислород из среды и снижают его концентрацию: глюкозу 1-2%, аскорбиновую кислоту – 0,08%. Все питательные среды перед посевом регенерируют, т.е. кипятят на водяной бане не менее 15 минут и быстро охлаждают, удаляя, таким образом, воздух, содержащийся в среде. Среду после посева заливают слоем вазелинового или парафинового масла, чтобы предупредить доступ кислорода. Культивируют анаэробы в бескислородных условиях. Существует несколько способов удаления кислорода: механический, химический, биологический.
Механический способ
а) Удаление воздуха механическим путем. Удаление воздуха (а, следовательно, и кислорода) проводят в специальных приборах - анаэростатах путем выкачивания. Этот прибор может быть заменен эксикатором.
б) Механическая защита от кислорода воздуха. Делают посев по методу Вейон-Виньяля в пастеровских пипетках. Для посева в чашках делают посев по методу Перетца, для этого разведения исследуемого материала в расплавленном агаре выливают в чашки Петри, на дно которых положены на стеклянные палочки или спички стерильные стеклянные пластинки. Между дном чашки и стеклянной пластинкой образуется капиллярная полость, куда расплавленный агар быстро затекает. Высота слоя агара под стеклом 1-2 мм, в этом слое вырастают анаэробы, в то время как над стеклом растут аэробы.
в) Замена воздуха индифферентным газом. В этом случае в анаэростат после откачивания воздуха нагнетают азот или, присоединив анаэростат к аппарату Киппа, вытесняют воздух с кислородом образующимся водородом.
г) Наиболее простой способ - посев уколом в высокий столбик сахарного агара.
Химический способ
Основан на способности некоторых веществ (щелочной раствор пирогаллола, гидросульфит натрия), поглощать кислород из воздуха. Засеянные чашки, или пробирки помещаю в специальные аппараты: Аристовского, 0мелянского или микроанаэростат, эксикатор, туда же помещают поглощающие вещества в чашке Петри, аппарат плотно закрывают.
Биологический способ
Основан на совместном выращивании в чашке анаэробов и аэробов-метод Фортнера. После посева чашки закрывают, заливают парафином для герметичности. Выросшие аэробы используют кислород и создают бескислородные условия для роста анаэробов.
В некоторых случаях, когда не требуется низкого парциального давления кислорода, кислород из воздуха можно удалить, поместив в эксикатор горящую свечу.
Среды и аппаратура для культивирования анаэробов
Среда Китта-Тароцци – представляет собой питательный бульон с 0,5% глюкозы, в который погружены кусочки печени или мяса. Перед посевом среду кипятят 20 мин, быстро остужают до 45° С и засевают сразу же, после посева в пробирку на поверхность среды наливают стерильное вазелиновое масло, чтобы защитить посев от кислорода.
Анаэростат – прибор, служащий для создания и поддержания стабильно анаэробных условии. Промышленность изготовляет микроанаэростаты и макроанаэростаты.
Микроанаэростат – представляет собой толстостенный металлический стакан цилиндрической формы, который через вакуумную резиновую прокладку закрывают металлической крышкой. Но крышке расположены вакуумметр и патрубок для откачивания и нагнетания воздуха и газа. Крышку прижимают к краям стакана винтом с дугообразным хомутом.
Макроанаэростат – это водяной термостат, внутри которого вмонтирован анаэростат – толстостенный металлический котел цилиндрической формы, герметически закрывающийся крышкой со стеклом для наблюдения за ростом микробов. На верхней стенке анаэростата находятся вакуумметр и патрубок для откачивания воздуха. Рабочая камера имеет съемные полочки для чашек и пробирок. В макроанаэростате вакуум должен быть доведен до 3-10 мм ртутного столба.
Эксикатор – стеклянный толстостенный сосуд, закрывающийся крышкой, которую можно притереть к краям эксикатора. В крышке имеется патрубок с краном для откачивания или нагнетания воздуха.
Посев по Фортнеру. Кровяной питательный агар разливают в чашки Петри толстым слоем, после застывания по диаметру агар вырезают в виде узкой щели. На одну половину чашки засевают культуру аэробного микроба, жадно поглощающего кислород (кишечную палочку, чудесную палочку), а на другую половину засевают исследуемый материал. Чашку закрывают, заливают парафином. Аэробные бактерии быстро используют кислород воздуха в герметически закрытой чашке, затем начинают размножаться анаэробы, через 24-48 часов чашку открывают и из отдельных колоний анаэробов выделяют чистую культуру.
Посев по Вейон-Виньялю в пастеровских пипетках. Пастеровские пипетки представляют собой длинные трубки (20-25 см) диаметром около 5 мм, приготовленные из легкоплавкого стекла. Один конец пипетки открыт, а другой вытянут в виде капилляра и запаян. Перед стерилизацией в широкий конец вставляют вату. Исследуемый материал разводят полужидким агаром с небольшим содержание глюкозы, затем из каждого разведения насасывают агар в стерильную пастеровскую пипетку, предварительно обломив запаянный конец капилляра, и избегая попадания пузырьков воздуха. Затем капилляр запаивают и пипетки помещают в термостат. Через 24-48 часов в среде можно обнаружить ясно видимые колонии бактерий в виде пушинок, комочков ваты, зерен чечевицы и т.д. Нужные колонии можно извлечь, распилив трубку.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА.
Заполнить схемы и таблицы.