55. Применяется для олределения опсонинов — антител, стимулирующих фагоцитарную активность лейкоцитов, т.Е. Серодиагностики инфекций, например, бруцеллёза.

Усиление фагоцитоза происходит за счёт присоединения опсонинов с активными центрами (Рав-фрагмент) к детерминантам бактерий, а затем с помощью Рс-фрагментов к Рс-рецепторам фагоцитов. В нормальной сыворотке содержится небольшое количество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсонинов больше, и их активность в меньшей степени зависит от комплемента.

Компоненты:

- Исследуемая сыворотка

- Нормальная сыворотка

- Суточная микробная культура (напр., стафилококковая)

- Фагоциты — взвесь нейтрофилов

Инкубация при 37 °С в течение 30 минут. Из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому-Гимзе и считают под микроскопом количество микробов, в 100 и более нейгрофилах, т.е. определяют фагоцитарный показатель.

Фагоцитарный показатель — количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом.

Опсонический индекс фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.

Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.

Опсоно-фагоцитарный индекс — это цифровой показатель = количество фагоцитов х оценка фагоцитоза (в зависимости от количества поглощенных микробов). Максимальный показатель -75.

56. Использование: биотехнология, микробиология, питательная среда, выявление в исследуемом материале стафилококков с персистентными характеристиками. Сущность изобретения: новая питательная среда позволяет избирательно выявить стафилококки, обладающие персистентными характеристиками. Среда содержит мясопептонный агар, хлористый натрий, желточную взвесь и в качестве селективного агента антибиотик фузидин при следующем соотношении компонентов, г/л: хлористый натрий 65 - 100, желточная взвесь 100 - 200), фузидин 0,00015 - 0,0003 и МПА до 1 л. Новая питательная среда позволяет выявлять штаммы стафилококков, обладающие персистентными характеристиками, что дает возможность своевременно диагностировать резидентных бактерионосителей, а также прогнозировать течение и рациональную терапию гнойно-воспалительных заболеваний человека и животных. Питательная среда может быть использована в клинике при решении вопросов дифференциальной диагностики и лечения, а также в санитарно-гигиенической практике при проведении микробиологического мониторинга. 2 табл.

57. стафилококовые инф.Основной метод — бактериологический; разработаны и внедрены серологические реакции. В случае необходимости (при интоксикациях) прибегают к биологической пробе. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, гной, слизь из зева, носа, отделяемое ран, мокрота (при стафилококковой пневмонии), испражнения (при стафилококковом колите), в случае пищевых интоксикаций — рвотные массы, испражнения, промывные воды желудка, подозрительные продукты.

Материал засевают на кровяной агар (гемолиз), на молочно-солевой (молочно-желточно-солевой) агар (угнетается рост посторонних бактерий за счет NaCl, лучше выявляются пигмент и лецитиназа). Выделеннз'ю культуру идентифицируют по видовым признакам, определяют у нее наличие основных признаков и факторов патогенности (золотистый пигмент, сбраживание маннита, гемолиз, плазмокоагулаза), обязательно проверяют чувствительность к антибиотикам, в случае необходимости проводят фаготипирование. Из числа серологических реакций для диагностики гнойно-септических заболеваний применяют РПГА и ИФМ, в частности для определения антител к тейхоевой кислоте или к видоспеци-фическим антигенам.

Для определения энтеротоксигенности стафилококков используют три метода:

1) серологический — с помощью специфических антитоксических сывороток в реакции преципитации в геле обнаруживают энтеротоксин и устанавливают его тип;

2) биологический — внутривенное введение фильтрата бульонной культуры ста­филококка кошкам в дозе 2—3 мл на 1 кг веса. Токсины вызывают у кошек рвоту и понос;

3) непрямой бактериологический метод — выделение из подозрительного продукта чистой культуры стафилококка и определение у него факторов патогенности (образование энтеротоксина коррелирует с наличием других факторов патогенности, в частности РНК-азы).

Наиболее простым и чувствительным является серологический метод обнаружения энтеротоксина.

58. менингококовые инф.Бактериоскопический и бактериологический методы исследования

Наиболее ранним простым методом исследования является бактериоскопия мазка спинномозговой жидкости. Для этого из осадка приготовляется мазок, фиксируется, окрашивается метиленовой синькой или по Граму. Обнаружение внутри и внеклеточно расположенных грамотрицательных диплококков, имеющих типичную морфологию, является важным диагностическим признаком. Бактериоскопическим анализом диагноз подтверждается в 50-70 % случаев. Выделение чистой культуры менингококка из ликвора более достоверно, но занимает 3-4 дня. Предварительный ответ может быть получен через сутки.

Бактериологический метод по частоте обнаружения возбудителя уступает бактериоскопическому. При одновременном использовании обоих методов частота подтверждения диагноза достигает 70 %. Отрицательные результаты бактериологического исследования не исключают менингококковой природы заболевания.

П. П. Чибирас предложена бактериоскопия мазков крови или толстой капли крови в целях обнаружения менингококка. Метод прост и высоко результативен, является экспресс-методом. Мазки крови окрашиваются после фиксации по Романовскому-Гимзе, а препараты толстой капли - без фиксации 1%-ным водным раствором метиленовой синьки в течение двух минут. В мазках крови почти в каждом поле зрения удается обнаружить 5-20 менингококков, фагоцитированных нейтрофильными лейкоцитами. Аналогичным методом предлагается исследовать спинномозговую жидкость.

Серологические методы диагностики последнее время не нашли широкого применения в силу малой результативности.

Из иммулогичесих методов наиболее чувствительны и информативны реакция непрямой гемагглютинации и иммуноферментный метод.

59. гоноковые .Диагностика.

Клиническая диагностика гонококковой инфекции очень похожа на диагностику хламидиоза. И хотя чисто условно принято считать, что хламидийная инфекция обладает более мягкими проявлениями, порой эти два заболевания неразличимы по внешним признакам.

Быстрая лабораторная диагностика гонококков может осуществляться на основе особенностей данных микроорганизмов. Они бобовидной формы и имеют тенденцию располагаться парами.

Возможно применения метода посевов бактерий, которые взяты из зараженной области или метод ПЦР, основанный на изучении ДНК микробной клетки.

60. чума1. Бактериоскопический метод (проводится в лабораториях ООИ).

С первых дней болезни исследуют мазки из мокроты, пунктата бубонов (реже слизи

из зева), окрашенные по Граму и метиленовой синью, с целью обнаружения

возбудителя.

2. Бактериологический метод (проводится в лабораториях ООИ). С

первых дней болезни исследуют мокроту, пунктаты бубонов, кровь, слизь из зева с

целью обнаружения возбудителя. Среда для первичного посева: агар Хотингера или

специальные среды. Этим же материалом заражают лабораторных животных.

3. Серологический метод. С конца 1-й недели исследуют в РА и

РПГА и реакции нейтрализации антигена сыворотку крови с целью обнаружения АТ.

4. Метод иммунодиагностики. С первых дней болезни исследуют в

реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА) и реакции нейтрализации

антител (РНАТ) сыворотку крови и патологический материал с целью обнаружения

антигена.

5. Обнаружение антигена возбудителя и антител к нему методом ИФА.

61. Лабораторная диагностика

Сибирская язва

1. Микроскопический метод. Исследуют на наличие капсул мазки,

приготовленные из содержимого везикул или карбункула, окрашенные по Граму.

2. Иммунофлуоресцентный метод. Исследуют мазки, приготовленные

из указанных выше материалов и обработанные специфической люминесцирующей

сывороткой.

3. Бактериологический метод. Исследуют материал (см. выше)

засевают на плотную (МПА) и в жидкую (МПБ) среды с целью выделения возбудителя.

С этой же целью ставят биопробу путем внутрибрюшинного заражения белых мышей.

Материалом для исследования могут быть также кровь, мокрота, испражнения,

трупный материал.

4. Аллергический метод. С первых дней болезни ставят кожную

аллергическую пробу с антраксином.

5. Обнаружение антигена возбудителя и антител к нему методом ИФА.

62. 1.Лабораторная диагностика коклюша. Материалом для исследования служит слизь, выделяемая при кашле. В выделениях дыхательного тракта больного коклюшем бактерии могут быть обнаружены посевом во всех стадиях болезни, но особенно в ранний период заболевания. Материал для посева может быть получен 2 способами:

• методом «кашлевых пластинок»;

• путем забора материала носоглоточным тампоном. Кашлевые пластинки — в момент появления кашля открытую чашку с питательной средой подносят на расстоянии 8—10 см ко рту ребенка и держат ее так в течение нескольких секунд (6—8 кашлевых толчков). Желательно посев делать на 2 чашки. После забора материала4 чашку закрывают как можно быстрее, для того чтобы избежать загрязнения. Чашку помещают в термостат.

Посев носоглоточным тампоном. Стерильный тампон вводят в ноздрю ребенка до задней стенки глотки, где снимают слизь. Взятие материала тампоном через рот со шпателем более сложная и неприятная для ребенка процедура и не имеет преимуществ перед носоглоточным тампоном. Извлеченным из ноздри тампоном немедленно делают посев на чашки с питательной средой. Посев должен быть сделан в течение 1-2 ч после забора материала.